活性氧检测试验方案

活性氧检测试验方案
活性氧（reactive oxygen species，ROS）是一个广泛存在于植物、
动物和微生物细胞中的有害物质，在细胞内氧化还原反应中扮演重要角色。

活性氧包括超氧阴离子（O2-）、过氧化氢（H2O2）、羟基自由基（·OH）等，具有强氧化性。

活性氧在正常细胞代谢和维持细胞信号传导途径中发挥重要作用，但
在细胞内过量生成会对细胞结构和功能造成损害，引发细胞衰老和死亡，
促进炎症反应，以及导致一系列疾病的发生，包括心血管疾病、癌症、神
经退行性疾病等。

活性氧检测是研究活性氧与细胞过程和疾病发生关系的重要手段。

常
用的活性氧检测方法包括荧光探针染色法、电子自旋共振（electron
spin resonance，ESR）法、流式细胞仪法、化学法等。

下面是一种基于
荧光探针的活性氧检测实验方案，具体步骤如下：
材料：
1.细胞培养样本（如细胞系或原代细胞）
2.活性氧检测荧光探针（如2',7'-二氯二羟苯基-4'-巯基吡啶，DCFH-DA）
3.PBS（磷酸缓冲盐溶液）
4.离心管
5.无菌1.5mL离心管
6.显微镜玻片
7.荧光显微镜
8.细胞培养基
实验步骤：
1.把细胞培养在合适的培养基中，保持在37°C的恒温培养箱中，条
件合适时使其达到对照组的80%～90%接种度。

2.将细胞分装到离心管中，每支40mL细胞悬液。

3.加入DCFH-DA溶液，终浓度为10mM，使细胞充分吸收荧光探针。

将培养管放入37°C恒温培养箱中孵育30分钟以进行探针进入细胞。

4.将细胞洗涤剂去除，用PBS洗涤细胞3次以除去多余探针。

5.加入1mL的PBS溶液，留出0.5mL的悬液放入1.5mL离心管中，以
进行离心。

去除上清液，避免细胞牵涉。

6.加入1.5mLPBS溶液，留出0.5mL的悬液放入1.5mL离心管中离心，去除上清液。

7.将取得的细胞悬液滴在显微镜玻片上，并加盖玻片。

在荧光显微镜
下观察细胞活性氧的荧光信号强度。

可以通过观察细胞数量、荧光染色等
来评估活性氧的产生水平。

8.如果需要定量测量活性氧水平，可使用流式细胞仪进行荧光信号的
检测和分析。

该实验方案可以用于评估细胞体内活性氧的产生水平，并可以用于研
究活性氧在细胞生物学和疾病发生中的作用机制。

此外，也可以根据需要，
结合其他检测方法对活性氧产生与细胞过程和疾病发生之间的关系进行探究。