专性厌氧菌

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厌氧菌培养与鉴定技术

ANAEROBIC/HYPOXEMIC WORKSTATION历史：所有这些罐子，其培养皿/样本操作均在有氧环境中进行，而仅在培养时才置于厌氧环境中。

ELECTROTEKELECTROTEK完善的厌氧培养技术始于适当的样本采集和运输。

适当地采集试样，并快速置于厌氧运输小瓶中ELECTROTEK厌氧罐由于不能提供操作过程的厌氧环境，并且因容量的限制而无法实现灵活的样本厌氧培养，故其应用也越来越受到限制。

一台允许所有操作与培养综合功能的厌氧工作站使厌氧菌实验避免了氧气暴露的风险。

因不当的制备或贮存，使培养介质含有氧气或氧化性物质，最终将抑制厌氧菌的生长。

任何时候都应当使用经预还原处理的厌氧培养介质。

ELECTROTEK专性厌氧菌培养最好是在经预还原处理且厌氧灭菌的培养基上（PRAS培养基）。

养肉汤。

预还原是指氧气通过培养基组分物质化学移除。

ELECTROTEK以下为常见的主要用于临床标本厌氧菌分离的培养基：1、布鲁氏菌血琼脂2、卡那霉素/万古霉素血琼脂（KVLB琼脂）3、拟杆菌属胆汁七叶甙琼脂（BBE琼脂）4、苯乙醇琼脂（PEA琼脂）5、硫乙醇酸钠肉汤ELECTROTEKELECTROTEK布鲁氏菌血琼脂：含有血细胞允许溶血试验，可使特定微生物快速生长非选择性培养基，所有厌氧菌均能很好生长同样，疾病预防控制中心的厌氧菌血琼脂也可被使用。

ELECTROTEK卡那霉素/万古霉素血琼脂（KVLB ）：革兰氏阴性厌氧杆菌选择性培养基。

绝大多数的革兰氏阴性兼性厌氧杆菌被卡那霉素抑制，绝大多数革兰氏阳性菌被万古霉素抑制。

产色厌氧菌（如普雷沃菌属和卟啉单胞菌属）在KVLB 琼脂上产生许多色素。

ELECTROTEK 拟杆菌属胆汁七叶甙琼脂（BBE ）：绝大多数厌氧菌被庆大霉素和胆汁抑制，只有脆弱拟杆菌群作为唯一的厌氧菌能在此琼脂上快速生长。

当细菌（如脆弱拟杆菌群）分解七叶甙而生长于此琼脂上时，将显现深棕色反应。

ELECTROTEK苯乙醇琼脂（PEA ）：该介质支持绝大多数专性厌氧菌生长且抑制兼性厌氧菌生长（如肠杆菌科），专性厌氧菌可呈弥漫性或过度生长。

微生物学第13章厌氧性细菌

厌氧性细菌的酶系统适应了无氧环境，能够利用各种有机物作为能源和碳源。
生长速度
由于无氧环境的限制，厌氧性细菌的生长速度通常较慢，需要较长时间才能达到较高的细胞密度。
02
厌氧性细菌的生态分布与作用
厌氧性细菌在自然环境中的分布
土壤中
厌氧性细菌在土壤中发挥着分解有机物的作用，将动植物残体转化为腐殖质和气体。
生殖道中
女性生殖道中的厌氧性细菌参与维持阴道正常菌群平衡，预防感染。
厌氧性细菌在工业生产中的应用
01
02
03
生物制氢
有机废水处理
甲烷发酵
厌氧性细菌可用于生物制氢过程，通过发酵作用将有机物转化为氢气。
厌氧性细菌可应用于有机废水处理，将废水中的有机物转化为沼气和二氧化碳。
厌氧性细菌可将有机废物转化为甲烷，用于生产能源或进行沼气发酵。
水体中
在缺氧的水体中，厌氧性细菌参与水体自净过程，将有机物转化为氨气、硫化氢等气体。
动物消化道中
许多动物消化道内存在厌氧性细菌，帮助动物消化食物，合成维生素等。
厌氧性细菌在人体内的分布与作用
肠道中
肠道中的厌氧性细菌帮助消化食物，合成维生素K、维生素B12等人体必需的营养素。
口腔中
口腔中的厌氧性细菌参与龋齿的形成，某些种类还可能导致牙周病。
对于已经感染的患者，需要进行彻底的治疗，包括使用敏感抗生素、清创引流等。
在治疗过程中，患者需要保持良好的生活方式和饮食习惯，以提高免疫力，促进康复。
05
厌氧性细菌的培养与鉴定
厌氧性细菌的培养方法
厌氧培养箱
01
厌氧性细菌需要在无氧环境中生长，厌氧培养箱能够提供恒温、

好氧菌、微好氧菌、耐氧厌氧菌、兼性厌氧菌、专性厌氧菌

好氧菌、微好氧菌、耐氧厌氧菌、兼性厌氧菌、专性厌氧菌好氧菌亦称需氧菌、需氧微生物。

在有氧环境中生长繁殖，氧化有机物或无机物的产能代谢过程，以分子氧为最终电子受体，进行有氧呼吸。

包括大多数细菌、放线菌和真菌。

进行有氧呼吸，但没有线粒体。

如：链霉素、红霉素，弗兰克氏菌微好氧菌性质：仅能在较低氧分压下正常生活的微生物。

正常大气的氧分压为0.2Pa，而微好氧菌仅生活在0.01～0.03Pa下。

例如发酵单胞菌属和弯曲杆菌属等。

如：醋杆菌属嗜酸菌属酸单胞菌属热酸菌属土壤单胞菌属产碱菌属交替单胞菌属氨基杆菌属(胺杆菌属)水螺菌属氮单胞菌属固氮根瘤菌属固氮菌属耐氧厌氧菌代表菌种为溶组织梭菌。

这类细菌不能利用氧，在无氧条件下生长好，而在有氧条件下生长不佳。

如：破伤风芽胞杆菌专性厌氧菌是指在无氧的环境中才能生长繁殖的细菌。

此类细菌缺乏完善的呼吸酶系统，只能进行无氧发酵，不但不能利用分子氧，而且游离氧对其还有毒性作用。

如破伤风杆菌、肉毒杆菌、产生荚膜杆菌等。

只能在没有游离氧存在的环境中生存的微生物。

甲烷菌即属此类细菌。

人们利用甲烷菌等产生沼气，利用厌氧菌处理各种有机废物和废水。

兼性厌氧菌又称兼嫌气性微生物，兼嫌气菌。

在有氧或无氧环境中均能生长繁殖的微生物。

在有氧（O2）或缺氧条件下，可通过不同的氧化方式获得能量。

如酵母菌在有氧环境中进行有氧呼吸，在缺氧条件下发酵葡萄糖生成酒精。

许多肠道细菌，如大肠杆菌等均属此类。

兼性厌氧菌兼有需氧呼吸和无氧发酵两种功能，不论在有氧或无氧环境中都能生长，但以有氧时生长较好。

大多数病原菌属于此。

厌氧细菌anaerobicbacteria

创伤性感染 (厌氧性伤口)破伤风杆菌繁殖分泌痉毒素运动神经终板吸收
神经纤维间隙扩散
淋巴吸收血液
中枢神经与脊髓内抑制性中间神经元突触前体膜上GMI结合阻断
甘氨酸能中间神经元 γ-氨基酸能神经元
释放
甘氨酸 γ-氨基酸
导致
骨骼肌痉挛
破伤风毒素的致病作用
三、防治原则
㈠一般预防：正确处理伤口（伤口清创、扩创、迅速破坏厌氧性伤口）；新法接生。
㈡致病因素与致病条件： 1、致病因素：破伤风痉挛毒素(tetanospasmin) 破伤风溶血毒素(tetanolysin) 2、破伤风痉挛毒素的结构与致病过程。 3、所致疾病：破伤风表现：全身骨骼肌兴奋性增高，张口困难，
牙关紧闭，苦笑面容，颈项强直，角弓反张，呼吸困难，最后窒息死亡。㈢免疫性：病后免疫力不牢固，可再感染、患病后仍需接种破伤风类毒素。
1、感染的条件：
⑴ 全身免疫功能下降，如肿瘤、糖尿病、胶原性疾病等
⑵ 局部防御屏障受到破坏，如拔牙、外科手术、肠穿孔、开放性骨折等。
⑶ 组织缺血、缺氧及Eh降低：局部血管受损、水肿、肿瘤压迫、包扎过紧等。
2、无芽孢厌氧菌的致病物质
毒力因子
粘附素荚膜菌毛血凝素
抗有毒氧基团超氧化物歧化酶触酶
产毒： O2 ＋e→O2-
解毒：
超氧化物
2O2-＋2H+ 歧化酶 O2+H2O2
O2－＋H2O2→OH- +OH＋+O2
H2O2＋H2O2 过氧化物酶 2H2O + O2
O2 ＋OH→OH- + O2
H2O2＋H2R 过氧化氢酶 2H2O + R

临床检验主管技师微生物检验第十七章厌氧性细菌及检验

第十七章厌氧性细菌及检验本章内容一、概述厌氧菌的分类厌氧菌的临床意义厌氧菌感染厌氧菌标本的采集与送检厌氧菌的分离与鉴定厌氧环境的指示二、常见厌氧菌破伤风杆菌产气荚膜梭菌肉毒梭菌艰难梭菌厌氧球菌无芽胞厌氧菌厌氧菌概述一大群专性厌氧，必须在无氧环境中才能生长的细菌。

G+有芽胞的梭菌：有芽胞，抵抗力强，广泛存在，可出芽繁殖，产生多种外毒素，引起严重疾病。

G+/G-无芽胞的球菌与杆菌：人体正常菌群，可存在于口腔、肠道、上呼吸道、泌尿生殖道等。

致病性属条件致病性的内源性感染。

厌氧菌概述——分类《伯杰系统细菌学手册》分类标准：无芽胞厌氧菌有40多个菌属，300多个菌种和亚种；而有芽胞的厌氧菌只有梭菌属，包括130个种。

据耐氧性分类（1）专性厌氧菌：是指在降低氧分压的条件下才能生长的细菌。

又分为极度厌氧菌（氧分压＜0.5%，空气中暴露10min致死，如丁酸弧菌）和中度厌氧菌（氧分压为2%～8%，空气中暴露60～90min能生存，如大多数人类致病厌氧菌）。

（2）微需氧菌：能在含5%～10%CO2空气中的固体培养基表面生长的细菌，如弯曲菌属。

（3）耐氧菌：其耐氧程度刚好能在新鲜配制的固体培养基表面生长。

一旦生长，暴露数小时仍不死亡，如第三梭菌、溶组织梭菌。

厌氧菌概述——临床意义及感染感染类型外源性感染：梭状芽胞杆菌属引起的感染。

内源性感染：无芽胞厌氧菌大多数是人体正常菌群，属于条件致病菌，在一定条件下可引起感染，一般不在人群中传播。

感染的危险因素：组织缺氧缺血；机体免疫功能下降；某些手术及创伤易发生厌氧菌感染；长期应用某些抗菌药物；深部需氧菌感染。

感染的临床指征：感染局部产生大量气体；多发生在黏膜附近；深部外伤后继发感染；分泌物有恶臭或为暗红色；常见于长期应用氨基糖苷类抗生素治疗无效的病例；镜检有细菌，常规培养阴性。

厌氧菌概述——标本的采集与送检重要原则：标本绝对不能被正常菌群所污染；应尽量避免接触空气。

适宜标本血液、骨髓、脑脊液、关节液、心包液、胸腔积液、腹腔液、胆汁、由活检或尸体解剖获得的组织标本、深部脓肿抽取物、经环甲膜以下或肺穿刺抽取的肺渗出物、后穹窿穿刺抽取的盆腔渗出液及无菌套管抽取的宫腔内容物、膀胱穿刺液及其它组织穿刺液等不宜标本鼻咽拭子、齿龈拭子、直肠拭子、喀出的痰液、自然排出的尿液和导出的尿液、流出的脓液、接近皮肤或黏膜的分泌物、阴道分泌物、胃和小肠内容物、粪便（艰难梭菌除外）等厌氧菌概述——标本的采集与送检采集多采用针筒抽取、穿刺等，应严格无菌操作，严禁接触空气。

艰难梭菌

免疫防御现致力于活疫苗的研究。主要
分为3类，即减毒突变株、用不同载体菌构建
的杂交株以及营养缺陷减毒株。例如链霉素
依赖株（streptomycin
dependent
strain, Sd）。
真菌性肠炎的发病机制
菌、放线菌、毛霉菌、曲菌、隐珠菌等，其中以白色念珠菌肠炎最为多见。
通常情况下，医用酒精都不能杀灭艰难梭菌。以前抗生素是艰难梭菌的克星，但随着滥用抗生素的日益普遍，艰难梭菌对抗生素也产生了的耐药性。研究人员呼吁，人们要养成良好的生活习惯，饭前便后是用肥皂洗手，普通感冒不要乱服抗生素。
发病机理
艰难梭菌是由于服用抗生素后打破了肠内菌群的平衡从而导致艰难梭菌累计了大量的数量产生大量的外毒素A和B。
白色念珠菌（白假丝酵母菌）
真菌性肠炎的症状
一般可无特殊症状和体征，因此诊断真菌性肠炎有一定困难。诊断本病主人依据有长期粘液样腹泻、便秘交替出现的病史，并经抗生素、磺胺等久治不愈
白色念珠菌累及结肠，约有85.5%的患者出现腹胀，泡沫样腹泻，或便秘交替出现。早期为粘液样称便，偶有便血或带血丝，其特点是粘稠似蛋清附于大便上，或全部粘液便。后期为脓性或脓血样稀便，或无明显的脓血便。出血多时为暗红色糊状粘液便。腹痛及压痛不明显。
白色念珠菌（白假丝酵母菌）
白色念珠菌（Monilia albican 或 canidia Albicans），是一种深部感染真菌，通常存在于正常人口腔，上呼吸道，肠道及阴道，一般在正常机体中数量少，不引起疾病，属于机会致病性真菌。当机体免疫功能或一般防御力下降或正常菌群相互制约作用失调，则本菌大量繁殖并改变生长形式（芽生菌丝相）侵入细胞引起疾病。
志贺菌的抵抗力比其它肠道杆菌弱。

厌氧菌

强化血琼脂平板
卡那万古霉素冻溶血琼脂平板

七叶苷胆汁平板等等

(2) 标本的接种每份标本应接种3个培养平板，分别放置于有氧，无氧和含 5%~10%的CO2的容器中，有时需要专用的培养基

(3) 厌氧培养法

a. 厌氧罐培养法
b. 气袋法

c. 厌氧手套箱法
(参观厌氧培养系统)

d. 其它方法
(2) 用常规细菌培养法, 血培养阴性的败血症、感染性心内膜炎、脓毒性血栓性静脉炎等。 (3) 分泌物或脓肿穿刺液带血性, 或呈黑色或乳白色混浊、有恶臭, 有时有气体。 (4) 分泌物直接涂片可见细菌, 但普通培养法无细菌生长。 (5) 使用氨基糖甙类抗生素(链霉素、卡那霉素、庆大霉素等)长期治疗无效。
两类厌氧菌感染的不同点
────────────────────────────────────
项目感染类型致病因素
有芽胞厌氧菌感染
无芽胞厌氧菌感染内源性感染为主内毒素侵袭因素为主, 毒性弱 90% 与机体抵抗力降低密切相关分布临床各科,引起身体各部位炎症, 脓肿, 败血症无特殊临床病型以抗菌药物治疗为主增强机体抵抗力

1) 致病条件
(1) 机械或病理损伤
如手术、拔牙、肠穿孔、经阴道手术、长期或多次静脉或其他部位插管等, 破坏皮肤、粘膜的屏障, 使细菌得以侵入非正常寄居部位。
(2) 局部形成厌氧微环境
如组织坏死、缺血、有异物存在, 有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染, 有利于厌氧菌生长。
(3) 菌群失调
如长期应用抗生素, 使原来拮抗厌氧菌的菌群消失, 厌氧菌可趁机繁殖。

厌氧性细菌

3.免疫性:抗毒免疫,吞噬防御功能增强。 4.A及F型可产生肠毒素,引起食物中毒。 (三)微生物学诊断
1.采标本直接涂片镜检 2.分离培养鉴定细菌 3.动物试验
(四)防治原则 1.自动免疫─多价类毒素 2.被动免疫─多价抗毒素
常用的培养方法：
1，厌氧培养法：肉渣汤培养基、巯基乙酸钠培养基即可造成厌氧环境；
2，焦性没食子酸法： 3，厌氧缸法： 4，气袋法： 5，厌氧箱法：
两类厌氧菌感染的不同点
────────────────────────────
项目
厌氧芽胞杆菌感染
无芽胞厌氧菌感染
────────────────────────────
3000 U。注意过敏反应：因为TAT马抗毒素。脱敏疗法：紧急预防,早用, 量足。
二、产气荚膜杆菌(Clostridium perfringens) (一)生物学特性 1.形态染色:粗短杆菌,芽胞呈梭状,体内形成荚膜
2.培养特性:专性厌氧。
血平板上，菌落较大，灰白色，不透明、边缘锯齿状；多数菌株有双层溶血圈，内环完全溶血是毒素，外层为毒素，不溶血；
产气荚膜杆菌菌落（溶血）
厌氧芽胞杆菌检查
接种破伤风杆菌
接种产气荚膜杆菌
肉牛高
渣汤培养基
乳培
糖琼脂
养基
培养基
破伤风杆菌产气荚膜杆菌
(二)致病性与免疫性
1. 致病物质
此酶破坏线立体，死细胞呼吸
α毒素分解细胞膜上
和高能磷酸化合物合成障碍
红细胞破坏贫血
毒
卵磷脂酶组织细胞组织坏死
肉渣汤培养基：混浊生长，产生气体、肉渣不被消化，肉色呈肉红色，

产甲烷菌

产甲烷菌胡俊英 222010328210116动医二班摘要：产甲烷菌（Methanogenus），是专性厌氧菌，属于古菌域，广域古菌界，宽广古生菌门。

1974年《伯杰氏细菌鉴定手册》（第八版）中将其归属于1科、3属、9种。

截至1992年已发展为3目、7科、19属、70种。

截至2009年已发展为4目、12科、31属。

1979年，Balch和Wolfe通过16S rRNA测序将产甲烷菌发展为3目（甲烷杆菌目、甲烷球菌目、甲烷微菌目）4科7属14种。

1993年，Boone将甲烷八叠球菌科上升为一个目，建立了火热产甲烷菌目，至此产甲烷菌发展为5目10科25属59种。

2001年，Bergey's Manual of Systematic Bacteriology将产甲烷菌放在宽广古生菌门（Euryarchaeota）中，至此产甲烷菌发展为3纲，5目，10科，26属，78种。

产甲烷菌属于古菌域（Archaea），广域古菌界（Euryarchaeon），宽广古生菌门（Euryarchaeota）。

关键词：产甲烷细菌，厌氧分离技术，产甲烷作用产甲烷菌（Methanogenus），是专性厌氧菌，属于古菌域，广域古菌界，宽广古生菌门。

1974年《伯杰氏细菌鉴定手册》（第八版）中将其归属于1科、3属、9种。

截至1992年已发展为3目、7科、19属、70种。

截至2009年已发展为4目、12科、31属。

1979年，Balch和Wolfe通过16S rRNA测序将产甲烷菌发展为3目（甲烷杆菌目、甲烷球菌目、甲烷微菌目）4科7属14种。

1993年，Boone将甲烷八叠球菌科上升为一个目，建立了火热产甲烷菌目，至此产甲烷菌发展为5目10科25属59种。

2001年，Bergey's Manual of Systematic Bacteriology将产甲烷菌放在宽广古生菌门（Euryarchaeota）中，至此产甲烷菌发展为3纲，5目，10科，26属，78种。

厌氧性细菌及检验考点总结

厌氧性细菌及检验考点总结一、厌氧菌概述概念：一大群专性厌氧，必须在无氧环境中才能生长的细菌。

分类：据耐氧性分类（1）专性厌氧菌：是指在降低氧分压的条件下才能生长的细菌。

（2）微需氧菌：能在含5%～10%CO2空气中的固体培养基表面生长的细菌，如弯曲菌属。

（3）耐氧菌：其耐氧程度刚好能在新鲜配制的固体培养基表面生长。

一旦生长，暴露数小时仍不死亡，如第三梭菌、溶组织梭菌。

二、厌氧菌感染（一）厌氧菌在正常人体的分布及感染类型1.厌氧菌在正常人体的分布正常人的肠道、口腔、阴道等处均有大量的厌氧菌寄居。

厌氧菌与需氧菌和兼性厌氧菌共同组成人体的正常菌群，其中绝大多数为无芽胞厌氧菌。

其中肠道中的厌氧菌数量是大肠埃希菌的1000～10000倍。

重要的厌氧菌种类及其在正常人体内的分布厌氧菌皮肤上呼吸道口腔肠道尿道阴道芽胞菌革兰阳性杆菌梭状芽胞杆菌属0 0 ±＋＋±±无芽胞菌革兰阳性杆菌乳杆菌属0 0 ＋＋＋±＋＋双歧杆菌属0 0 ＋＋＋0 ±优杆菌属±±＋＋＋0 ±丙酸杆菌属＋＋＋＋＋＋？±放线菌属0 ±＋＋＋0 0无芽胞菌革兰阴性杆菌类杆菌属0 ＋＋＋＋＋梭杆菌属0 ＋＋＋＋＋±普雷沃菌属0 ＋＋＋＋＋＋＋紫单胞菌属0 ＋＋＋＋＋＋＋无芽胞菌革兰阳性球菌消化球菌属＋＋＋＋＋＋±＋＋消化链球菌属＋＋＋＋＋＋±＋＋2.外源性感染梭状芽胞杆菌属引起的感染，其细菌及芽胞来源于土壤、粪便和其他外界环境。

3.内源性感染无芽胞厌氧菌大多数是人体正常菌群，属于条件致病菌，在一定条件下可引起感染，一般不在人群中传播。

（二）临床意义1.厌氧菌感染的危险因素1）组织缺氧或氧化还原电势降低。

双歧杆菌的培养

双歧杆菌的培养和分离双歧杆菌是专性厌氧菌，对氧气非常敏感，因此，双歧杆菌的分离、培养及活菌计数的关键是提供无氧和低氧化还原电势的培养环境。

双歧杆菌的最适生长温度37℃~41℃，最低生长温度25℃~28℃，最高43℃~45℃。

初始最适pH 6.5~7.0，在pH4.5~5.0或pH 8.0~8.5不生长。

其细胞呈现多样形态，有短杆较规则形、纤细杆状具有尖细末端形、球形、长杆弯曲形、分枝或分叉形、棍棒状或匙形。

单个或链状、V形、栅栏状排列，或聚集成星状。

革兰氏阳性，不抗酸，不形成芽孢，不运动。

双歧杆菌的菌落光滑、凸圆、边缘完整、乳脂至白色、闪光并具有柔软的质地。

双歧杆菌是人体内的正常生理性细菌，定殖于肠道内，是肠道的优势菌群，占婴儿消化道菌丛的92%。

该菌与人体终生相伴，其数量的多少与人体健康密切相关，是目前公认的一类对机体健康有促进作用的代表性有益菌。

该菌可以在肠粘膜表面形成一个生理性屏障，从而抵御伤寒沙门氏菌、致泻性大肠杆菌，痢疾致贺氏菌等病原菌的侵袭，保持机体肠道内正常的微生态平衡；能激活巨噬细胞的活性，增强机体细胞的免疫力；能合成B族维生素、烟酸和叶酸等多种维生素；能控制内毒素血症和防治便秘，预防贫血和佝偻病；可降低亚硝胺等致癌物前体的形成，有防癌和抗癌作用；能拮抗自由基、羟自由基及脂质过氧化，具有抗衰老功能。

双歧杆菌的培养方法很多，如厌氧箱法、厌氧袋法、厌氧罐法。

本实验介绍的是一种简便的试管培养法——亨盖特厌氧滚管技术该技术的优点是：预还原培养基制好后，可随时取用进行试验；任何时间观察或检查试管内的菌都不会干扰厌氧条件。

近年来兴起的一种新的RAPD等分子生物学技术对双歧杆菌进行基因指纹图谱的构建，分析不同双歧杆菌种间存在的同源性和多态性；RAPD技术也可用于双歧杆菌菌种鉴定及分型。

一般来讲，我们都应用适合鉴定所有厌氧菌的方法，主要包括双歧杆菌特定酶的检测、乙酸、乳酸等有机酸的测定、糖发酵试验和其他相关指标等。

基础医学概要三第五节：厌氧性细菌-qu

防治原则
• 加强食品卫生管理和监督，提高防范意识（低温保存食物，高温破坏毒素） • 及早做出诊断，迅速注射A、B、E三型多价抗毒素，加强护理与对症治疗。
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厌氧芽胞梭菌口诀
• 芽孢如梭厌氧长 • 释放外素毒力强
• 破伤风菌像鼓槌 • 抽搐咬牙角弓张 • 产气荚膜气坏疽 • 汹涌发酵解诸糖 • 肉毒中毒经口入 • 肌肉麻痹形匙样
抵抗力
强，肉毒毒素对酸的抵抗力大于破伤风毒素，胃液作用24h不被破坏，故可被胃肠吸收，不耐热100℃ 1′可破坏。
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致病性
肉度毒素（botulin)
小肠胰酶
毒素前体
污染食物厌氧 15～40℃
血液、淋巴液
外周胆碱能神经
是细菌死亡后，游离出无毒的前体毒素，经肠道中胰蛋白酶或细菌产生的蛋白酶作用后解离出有毒的肉毒毒素。
各部位炎症，脓肿，败血症无特殊
抗毒素治疗为主
抗毒素紧急预防、类毒素预防破伤风杆菌、产气荚膜杆菌、肉毒杆菌等
抗菌治疗为主
增强机体抵抗力条件致病菌 3 如双歧脆弱类杆菌等
厌氧芽胞梭菌共同特点
①G+大杆菌 ②严格厌氧 ③能形成芽胞，芽胞的形状和在菌体中的位置，
因菌种不同而异，在鉴别上有意义。
④除产气荚膜杆菌外，均无荚膜。 ⑤能产生多种外毒素和侵袭性酶，致病性强。
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• 婴儿肉毒病：见于1岁以下婴儿。表现为便
秘、吸乳无力、吞咽困难、眼睑下垂、全
身肌张力降低，可因呼吸麻痹而死亡。病
死率不高。
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微生物学检查法
1 、分离培养与鉴定：在怀疑为婴儿肉毒病的粪便中检出此菌，并证实可产生毒素则诊断意义较大。 2、毒素检测：动物试验小鼠腹腔注射，观察发病情况。

按照微生物与氧的关系可以把它们分为专性好氧菌、兼性厌氧菌、微好氧

Forma厌氧工作站在纯生啤酒微生物检测方面的应用福建省燕京惠泉啤酒股份有限公司技术质量部孙黎琼【摘要】在纯生啤有害菌检测中，厌氧菌是一个十分重要的指标。

如何正确选择厌氧菌培养装置，有效控制纯生啤微生物，是纯生啤微生物检测的关键之一。

【关键词】厌氧菌厌氧工作站啤酒检测随着啤酒生产技术的发展，纯生啤酒的生产越来越普遍，纯生啤微生物控制不再单纯是细菌总数、大肠菌群两个指标的检测控制，厌氧菌是控制纯生啤的一个重要指标。

按照微生物与氧的关系可以把微生物分为专性好氧菌、兼性厌氧菌、微好氧菌、耐氧菌、专性厌氧菌。

对于啤酒来说较有害的为后四类，因为它们都可以在啤酒的微氧或无氧的环境中生长，也是我们实验室检测的重点。

培养厌氧菌首先需要特殊的培养装置。

目前大概有交层琼脂柱、Hungate滚管技术、厌氧培养皿、厌氧罐与厌氧工作站等几种厌氧培养装置。

我公司使用的是Forma公司的厌氧工作站。

1、厌氧工作站简介厌氧工作站（Anaerobic System），主要由培养室和隔离室两部分组成（如图1）。

培养室为严格的无氧环境。

操作时把样品放在隔离室内，经过3次抽真空、2次充氮气、1次混合气体（N2/CO2/H2 ，85/5/10）制造无氧环境。

然后打开内门把样品放入培养室培养。

微量的氧气是在钯的催化下使氧气与氢生成水，然后被干燥剂吸收。

厌氧工作站示意图12． Forma厌氧工作站的优点2．1 厌氧工作站使培养专性厌氧菌成为可能。

专性厌氧菌是一种危害很大的啤酒有害菌。

它只有在其深层的无氧或低氧化还原势的环境下才能生长。

即使短期接触空气也会抑制其生长甚至致死。

对于厌氧工作站来说，样品从隔离室进入培养室只需要几分钟。

厌氧罐是通过反应袋反氧除掉而达到厌氧环境，而使用反应袋制造无氧环境需要150分钟以上。

所以对于专性厌氧菌来说，厌氧工作站的培养环境优于厌氧罐，能准确地把专性厌氧菌检测出来，这对纯生啤的微生物控制是非常重要的。

取几瓶已发生生物混浊的瓶装啤酒，分别取1ml于NBB-A培养基平板中，同一试样分别置厌氧工作站和厌氧罐中培养5天观察，结果见表1从表1可以看出：同一试样，在厌氧工作站检测的厌氧菌数往往高于厌氧罐。

临床检验技师-微生物检验(2019)讲义第十七章_厌氧性细菌及检验

G+有芽胞的梭菌：有芽胞，抵抗力强，广泛存在，可出芽繁殖，产生多种外毒素，引起严重疾病。

G+/G-无芽胞的球菌与杆菌：人体正常菌群，可存在于口腔、肠道、上呼吸道、泌尿生殖道等。

致病性属条件致病性的内源性感染。

厌氧菌概述——分类《伯杰系统细菌学手册》分类标准：无芽胞厌氧菌有40多个菌属，300多个菌种和亚种；而有芽胞的厌氧菌只有梭菌属，包括130个种。

据耐氧性分类（1）专性厌氧菌：是指在降低氧分压的条件下才能生长的细菌。

（2）微需氧菌：能在含5%～10%CO2空气中的固体培养基表面生长的细菌，如弯曲菌属。

（3）耐氧菌：其耐氧程度刚好能在新鲜配制的固体培养基表面生长。

一旦生长，暴露数小时仍不死亡，如第三梭菌、溶组织梭菌。

厌氧菌概述——临床意义及感染感染类型外源性感染：梭状芽胞杆菌属引起的感染。

内源性感染：无芽胞厌氧菌大多数是人体正常菌群，属于条件致病菌，在一定条件下可引起感染，一般不在人群中传播。

感染的危险因素：组织缺氧缺血；机体免疫功能下降；某些手术及创伤易发生厌氧菌感染；长期应用某些抗菌药物；深部需氧菌感染。

厌氧菌概述——标本的采集与送检厌氧菌概述——标本的采集与送检采集多采用针筒抽取、穿刺等，应严格无菌操作，严禁接触空气。

厌氧菌的鉴定程序

厌氧菌的鉴定程序1 概述厌氧菌是一大群专性厌氧菌群，必须严格无菌环境才能生长。

主要分为两类：一类是革兰阳性有芽胞的厌氧梭菌，另一类是无芽胞的革兰阳性和阴性的球菌和杆菌。

大部分无芽胞厌氧菌为条件致病菌，所引起的感染可遍及临床各科和人体各部位，在人体寄居的厌氧菌比需氧菌在数量上占有明显的优势。

2 分类包括革兰阴性球菌和杆菌及革兰阳性球菌和杆菌。

分类主要依据形态、革兰染色、鞭毛、芽胞、荚膜及终末代谢产物来判断。

2.1 革兰阳性厌氧球菌主要包括消化球菌属和消化链球菌属；其镜下形态分别为圆形或卵圆形，排列成双，成链状，黑色消化链球菌排列常呈不规则。

在厌氧血琼脂平板上形成细小不溶血菌落。

生长温度范围25～38℃，最适生长温度为 35～37℃.生长缓慢，一般需要培养 48h 才能形成肉眼可见的小菌落。

在硫乙醇酸盐肉汤中呈现沉淀或絮状，但不浑浊。

2.2 革兰阴性厌氧球菌主要包括韦荣球菌属、氨基酸球菌属、巨球菌属等。

其中韦荣球菌属最为常见，与人体有关的有小韦荣球菌、齿蚀韦荣菌、不典型韦荣球菌和殊异韦荣球菌。

此处仅介绍韦荣球菌属。

韦荣球菌属镜下呈成双、聚集不规则及短链状排列，无动力，厌氧生长，最适温度 30～37℃。

该菌属氧化酶试验阴性，触酶试验不定，不分解碳水化合物，分解乳酸盐产生乙酸盐、丙酸盐、CO2 和 H2，培养时需 CO2才能生长。

初步鉴定根据菌落和镜下形态、革兰染色、对特定抗生素的敏感性和某些快速生化试验；确切鉴定包括糖类发酵试验和气相色谱技术。

该菌属特点为革兰阴性球菌，对多粘菌素和卡那霉素敏感，对万古霉素耐药，还原硝酸盐为亚硝酸盐；在厌氧血琼脂平板上菌落形态为细小、圆形、凸起、灰白色，可初步推断为韦荣球菌属。

2.3 厌氧革兰阴性无芽胞杆菌与人类致病性相关的只要包括拟杆菌属和梭杆菌属，拟杆菌属和梭杆菌属均为革兰阴性杆菌，拟杆菌为短小的规则杆菌，而梭杆菌为细长的梭形杆菌，均不产生芽胞，不能进行有氧代谢，严格无氧环境生长。

2913.0医学微生物学厌氧性细菌概述

口腔、胸腔、腹腔和盆腔等感染混合感染：怀疑细菌感染，有查不出致病菌
可考虑无芽胞厌氧菌感染
பைடு நூலகம்
小结
厌氧性细菌的种类厌氧芽胞梭菌的共同特点无芽胞厌氧菌特点
艰难梭菌
无芽球菌（G+ G-）胞杆菌（G + G-）菌
厌氧芽胞梭菌无芽胞厌氧菌
厌氧芽胞梭菌共同特点
厌氧、G+、大杆菌；形成芽胞，抵抗力强；分布广泛如空气、土壤、水、人和动物肠道；
芽胞侵入人体，繁殖体，生长繁殖，产生毒素强烈的外毒素和酶致病；
破伤风、肉毒梭菌：外毒素产气荚膜梭菌：外毒素和酶明显的临床症状；类毒素预防，抗毒素治疗。
无芽胞厌氧菌特点
皮肤、上呼吸道、消化道、泌尿道等构成正常菌群，无芽胞厌氧菌占绝对优势
肠道菌群，厌氧菌占99.9% 皮肤、口腔、上呼吸道和泌尿生殖道，
占80%-90% 一般情况下对人体无害、有利，对维持皮肤黏
膜的正常功能起着重要作用动态的平衡，微生态不打破不致病
条件致病、内源性感染
某些条件下，用药菌群失调，免疫力变化
细菌按对氧气的需要与否，分为哪四类？
1.专性需氧菌：有氧气条件下生长 2.微需氧菌：生长需要少量氧气，5%-6%氧气 3.兼性需氧菌：有氧气没氧气条件下都生长 4.专性厌氧菌：低氧分压或无氧条件下生长
1861年，巴斯德发现厌氧菌。发明厌氧菌培养技术及其应用。
厌氧性细菌种类
芽胞（G+）菌
破伤风梭菌产气荚膜梭菌肉毒梭菌