第5章免疫凝集试验

原理图
混 合
SPA
IgG
SPA- IgG待测抗原 凝集颗粒
SPA- IgG 待测抗原
二、间接免疫血凝试验
间接免疫血凝试验：以红细胞作为载体的间接免 疫凝集试验。
用已知抗原或抗体致敏红细胞，检测标本中相应 的抗体或抗原。
根据红细胞凝集的程度判断阳性反应的强弱，以 出现明显凝集的孔为滴度终点。
三、颗粒免疫凝集试验
（一）玻片凝集试验
方法评价:
定性试验 简便和快速 敏感度低
应用:
菌种鉴定 血清学分型 血型鉴定
（二）试管凝集试验
在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合 ，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝 集现象。
试管凝集试验
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 弃掉0.5
菌液 1
2 3 45 6 7
结 果
试管凝集试验原理
抗原、抗血清、致敏颗粒试剂和血清标本
抗原的种类、数量、共同抗原决定簇、浓度、稀释剂 、温育时间等。
抗体的浓度以及非特异性凝集抗体的干扰。 未致敏的颗粒不应与实验血清起反应，致敏所用的抗 原或抗体要求纯度高，并具有良好的免疫活性。 血清标本宜新鲜、无污染、无溶血。
试验条件
反应时间：不得少于10分钟 温度：室温(23℃～29℃) 酸碱度：一般为6～8 离子强度： 生理盐水 振荡：混匀后应静置 质量控制措施：必须严格按照相应的标准操作程序操作， 同时可利用阴阳对照血清、标准抗原和参考血清设立试验对照 进行室内质量控制。
二、间接免疫凝集试验的临床应用
抗原的检测： 用于病原体可溶性抗原的检测：如乙型肝炎病毒表面抗原 ，细菌、腺病毒及流感病毒等的抗原鉴定和细菌可溶性产物如 外毒素等。 用于检测各种蛋白质成分：如尿液绒毛膜促性腺激素、纤 维蛋白原等血浆蛋白成分等。
间接免疫凝集试验的临床应用
抗体的检测： 用于检测细菌、病毒、螺旋体、寄生虫等感染后产生的抗 体：如抗人类免疫缺陷病毒抗体、抗溶血素O、梅毒螺旋体抗 体等。 用于检测自身免疫性疾病的抗体：如类风湿因子、抗DNA 抗体和抗甲状腺蛋白抗体等。 用于超敏反应患者的抗体测定：如青霉素抗体、某些花粉 抗体等。
注：待检标本采用受检者的全血
自身红细胞免疫凝集试验原理
抗人O型红细胞的单克隆抗体。 将之与特异性抗原连接，可用于检测标本中的相应抗体 。
注：待检标本采用受检者的全血
第六节 免疫凝集试验的临床应用
重点提示
直接免疫凝集试验的临床应用 间接免疫凝集试验的临床应用
抗原的检测 抗体的检测
一、直接免疫凝集试验的临床应用
第七节 临床常用免疫凝集试验试 剂方法特点
重点提示
诊断菌液 载体颗粒 其他
一、诊断菌液
菌种应使用标准株，制备菌液时需经无菌试 验证实细菌确已被杀灭，并采用比浊管比浊调整 至所需浓度。
二、载体颗粒
红细胞：最常用绵羊、家兔、鸡的红细胞及O型人红 细胞。醛化红细胞具有较强的吸附蛋白质抗原或抗体的 能力，且可长期保存而不溶血。
第一节 免疫凝集试验的基本原理
是指颗粒性抗原，例如细菌、红细胞、螺旋体、细胞性抗 原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒 后，与相应的抗体（或抗原）在适量的电解质存在的条件 下，经一定时间后凝聚成肉眼可见的凝集现象。
排斥
抗原Leabharlann Baidu
抗原
抗体
抗原
抗原
抗原
抗原
凝集反应的分型
凝集反应
直接凝集反应 间接凝集反应 抗球蛋白试验
一、直接Coombs试验
用于检测结合于红细胞表面的不完全抗体。
二、间接Coombs试验
用于检测游离在血清中的不完全抗体。
第五节 自身红细胞免疫凝集试验
重点提示
自身红细胞免疫凝集试验原理
自身红细胞免疫凝集试验原理
抗人O型红细胞的单克隆抗体。 将之与另一种特异性抗体连接成双功能抗体，可用于检测 标本中相应抗原。
Page 17
外斐试验
变形杆菌属的X19,X2.Xk菌株的菌体O抗原与斑疹伤寒立 克次体和恙虫病立克次体有共同抗原，故可用OX19， OX2，OXk代替立克次体作为抗原与相应患者血清进行交 叉凝集反应，此称外斐试验，辅助诊断立克次体病。 外斐试验采用试管凝集试验法。
Page 18
第三节 间接免疫凝集试验
0.5ml
弃掉 0.5 6
0.5
0.5ml
抗体稀释度 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 对照管
彻底混匀
④
56℃, 1h
结果
上清 清亮 轻度混浊 中等混浊 混浊 与对照相同
沉淀 大的凝集块 大多凝集管底 小、部分凝集块 很小的凝集颗粒 无凝集现象
凝集程度 ++++ +++ ++ + -
一、间接免疫凝集试验的类型
（一）正向间接免疫凝集试验：测抗体
间接免疫凝集试验的类型
（二）反向间接免疫凝集试验：测抗原
间接免疫凝集试验的类型
（三）间接免疫凝集抑制试验：可测抗原，也可测抗体
间接免疫凝集试验的类型
（四）协同免疫凝集试验：测抗原，原理与反向 间接免疫凝集试验相似。
所用载体是细胞壁含有A蛋白（SPA）的金黄色葡 萄球菌，SPA具有与IgG（IgG3除外）的Fc段结合的特 性。
临床免疫学与免疫学检验
第五章 免疫凝集试验
凝集反应的发现
• 早在1896年，Widal就利用伤寒病人的血清与伤寒杆 菌发生特异性凝集的现象，有效地诊断伤寒病。--肥 达试验 • 至1903年，Landsteiner在特异性血凝现象的基础上 发现了人类ABO血型，并于1930年获得了诺贝尔医学 奖。 --血型鉴定
胶乳：聚苯乙烯胶乳颗粒或羧化聚苯乙烯胶乳颗粒 。性能稳定，保存期长。
炭粉粒子 甲苯胺红颗粒 ......
三、其他
质控物：标准血清、阳性对照血清、阴性对 照血清等
试剂盒应2℃～8℃保存，切勿冻存，使用前 使试剂接近室温(23℃～29℃)，摇匀后使用。
第八节 影响免疫凝集试验的 主要因素
重点提示
抗原因素 抗血清因素 致敏颗粒试剂 血清标本 试验条件
管底沉淀 凝集程度
最高稀释比例
待测血清的滴度
方法评价：
半定量试验 简便、快速 敏感度低 可有假阳性
临床应用： 肥达试验
外斐试验 交叉配血试验
肥达试验
概念：肥达试验是一种试管凝集反应，最早由肥达（Widal）用于临床，故名。 用已知的伤寒杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原,与待测血清作试管或 微孔板凝集实验,以测定血清中无相应抗体存在,作为伤寒、副伤寒诊断的参考。 原理：伤寒杆菌有三种抗原：分别为菌体抗原（O抗原）、鞭毛抗原（H抗原） 、体表抗原（Vi抗原）。其中以O抗原及H抗原的抗原性较强，而Vi抗原的抗原 性不强，且相应抗体效价低且为时短暂，随细菌的消除而消失，故不列为肥达 试验的检测项目。（但其检查有助于发现伤寒带菌者。）当抗原遇到特异性抗 体（抗O及抗H）时，便会发生凝集反应，通过对凝集物量多少来推算病人体内 抗体的多少，以协助诊断、治疗及判断预后。 值得一提的是：由于检查抗体的肥达试验是一种间接诊断试验，故对结果的判 断要综合分析。肥达试验阴性，亦不能排除患伤寒的可能。如有些伤寒患者， 肥达试验始终阴性。
采用不同颗粒作为载体的间接免疫凝集试验。 胶乳颗粒凝集试验(LAT)：载体为聚苯乙烯胶乳颗粒 明胶颗粒凝集试验(GAT)：载体为明胶颗粒 炭颗粒凝集试验(CAT)：载体为炭粉微粒 甲苯胺红颗粒凝集试验：载体为甲苯胺红颗粒
第四节 抗球蛋白红细胞免疫凝集试验
重点提示
又称为Coombs试验： 直接Coombs试验 间接Coombs试验
第二节 直接免疫凝集试验
重点提示
直接免疫凝集试验的概念 玻片凝集试验 试管凝集试验
直接免疫凝集试验
直接免疫凝集试验（direct agglutination test）：细 菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下直接与 相应抗体结合出现肉眼可见的凝集现象
凝集原 agglutinogen 凝集素 agglutinin 玻片凝集试验：定性 试管凝集试验：半定量
1. 实验材料：
灭活的伤寒菌液 (7×108/ml), 待测血清
2. 方法：
② 待测血清
① 生理盐水 (ml)
③
灭活的伤 寒菌液
1
0.1 0.09.9ml
0.5ml
2
0.5 0.05.5ml
0.5ml
3
0.5 0.05.5ml
0.5ml
4
0.5 0.05.5ml
0.5ml
5
0.5 0.05.5ml
载体 可溶性抗原
致
敏
致敏
颗 粒
NS
凝 集 颗 粒
重点提示
间接免疫凝集试验的类型 正向间接免疫凝集试验 反向间接免疫凝集试验 间接免疫凝集抑制试验 协同免疫凝集试验
间接免疫血凝试验 颗粒免疫凝集试验
胶乳颗粒凝集试验 明胶颗粒凝集试验 炭颗粒凝集试验 甲苯胺红颗粒凝集试验
间接免疫凝集试验的概念
间接免疫凝集试验（indirect agglutination）：将 可溶性抗原（或抗体）预先吸附或偶联于与免疫无关、大 小适当的颗粒性载体表面，使之成为抗原（或抗体）致敏 颗粒，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质存 在的条件下，可出现肉眼可见特异性凝集现象。
玻片凝集试验：常作定性检测。用已知抗体检测未知的颗 粒性抗原，主要用于细菌菌种的鉴定及分型、ABO血型鉴定等 。
试管凝集试验：可作为半定量检测。多用于测定血清中某 种特异性抗体的效价，以协助临床诊断或供流行病学调查；在 用颗粒性抗原免疫动物后，可用该法测定免疫血清中特异性抗 体的效价，判定抗体生成情况。