厌氧性细菌及检验考点总结

厌氧性细菌及检验考点总结

一、厌氧菌概述

概念：一大群专性厌氧，必须在无氧环境中才能生长的细菌。

分类：

据耐氧性分类

（1）专性厌氧菌：是指在降低氧分压的条件下才能生长的细菌。又分为极度厌氧菌（氧分压＜0.5%，空气中暴露10min致死，如丁酸弧菌）和中度厌氧菌（氧分压为2%～8%，空气中暴露60～90min能生存，如大多数人类致病厌氧菌）。

（2）微需氧菌：能在含5%～10%CO2空气中的固体培养基表面生长的细菌，如弯曲菌属。

（3）耐氧菌：其耐氧程度刚好能在新鲜配制的固体培养基表面生长。一旦生长，暴露数小时仍不死亡，如第三梭菌、溶组织梭菌。

二、厌氧菌感染

（一）厌氧菌在正常人体的分布及感染类型

1.厌氧菌在正常人体的分布

正常人的肠道、口腔、阴道等处均有大量的厌氧菌寄居。

厌氧菌与需氧菌和兼性厌氧菌共同组成人体的正常菌群，其中绝大多数为无芽胞厌氧菌。

其中肠道中的厌氧菌数量是大肠埃希菌的1000～10000倍。

重要的厌氧菌种类及其在正常人体内的分布

厌氧菌皮肤上呼吸道口腔肠道尿道阴道

芽胞菌

革兰阳性杆菌

梭状芽胞杆菌属0 0 ±＋＋±±

无芽胞菌

革兰阳性杆菌

乳杆菌属0 0 ＋＋＋±＋＋

双歧杆菌属0 0 ＋＋＋0 ±

优杆菌属±±＋＋＋0 ±

丙酸杆菌属＋＋＋＋＋＋？±

放线菌属0 ±＋＋＋0 0

无芽胞菌

革兰阴性杆菌

类杆菌属0 ＋＋＋＋＋

梭杆菌属0 ＋＋＋＋＋±

普雷沃菌属0 ＋＋＋＋＋＋＋

紫单胞菌属0 ＋＋＋＋＋＋＋

无芽胞菌

革兰阳性球菌

消化球菌属＋＋＋＋＋＋±＋＋

消化链球菌属＋＋＋＋＋＋±＋＋

2.外源性感染

梭状芽胞杆菌属引起的感染，其细菌及芽胞来源于土壤、粪便和其他外界环境。

3.内源性感染

无芽胞厌氧菌大多数是人体正常菌群，属于条件致病菌，在一定条件下可引起感染，一般不在人群中传播。

（二）临床意义

1.厌氧菌感染的危险因素

1）组织缺氧或氧化还原电势降低。

2）机体免疫功能下降。

3）某些手术及创伤。

4）长期应用某些抗菌药物。

5）深部需氧菌感染。

2.厌氧菌感染的临床及细胞学指征

1）感染组织局部产生大量气体，造成组织肿胀和坏死，皮下有捻发感，是产气荚膜梭菌所引起感染的特征。

2）发生在口腔、肠道、鼻咽腔、阴道等处的感染，易发生厌氧感染。

3）深部外伤如枪伤后，以及动物咬伤后的继发感染，均可能是厌氧菌感染。

4）分泌物有恶臭或呈暗血红色，并在紫外光下发出红色荧光，均可能是厌氧菌感染。分泌物或脓肿有硫黄样颗粒，为放线菌感染。

5）分泌物涂片经革兰染色，镜检发现有细菌，而培养阴性者，或在液体及半固体培养基深部生长的细菌，均可能为厌氧菌感染。

6）长期应用氨基糖苷类抗生素无效的病例，可能是厌氧菌感染。

7）胃肠道手术后发生的感染。

三、厌氧菌标本的采集与送检

注意：标本绝对不能被正常菌群所污染；应尽量避免接触空气。

1.采集

不同部位标本采集法

标本送到实验室，应在20～30分钟内处理完毕，不超过2h。

如不能及时接种，可将标本置室温保存。

（1）针筒运送；

（2）无菌小瓶运送；

（3）棉拭子运送；

（4）厌氧罐或厌氧袋运送。

四、厌氧菌的分离与鉴定

（一）直接镜检

根据形态和染色性，结合标本性状与气味，初步对标本中可能有的细菌作出估计。

厌氧菌直接镜检初步鉴别

菌名革兰染色形态及其他特征

脆弱类杆菌G-b 两端钝圆，着色深，中间色浅且不均匀，且有气泡，长短不一

产黑素普雷沃菌G-b 多形性，长短不一，有浓染和空泡，无鞭毛和芽胞。标本有恶臭，琥珀味，紫外线照射发红色荧光

具核梭杆菌G-b 菌体细长，两头尖，紫色颗粒菌体长轴成双排列，标本有丁酸味坏死梭杆菌G-b 高度多形性，长短不一，菌体中部膨胀呈圆球形

韦荣球菌G-c 极小的革兰阴性球菌

消化链球菌G＋c 革兰阳性呈链状的小球菌

乳酸菌G＋b 细长，有时多形性，呈单、双、短链或栅状排列

痤疮丙酸杆菌G＋b 排列特殊呈X、Y、V或栅状，标本有丙酸气味

双歧杆菌G＋b 多形性，有分支呈Y、V形成棒状，标本有醋酸气味

放线菌G＋b 分支呈棒状、X、Y、V或栅状，脓汁中得黄色颗粒，有琥珀酸味破伤风杆菌G＋b细长、梭形或鼓槌形，有芽胞，有周鞭毛

产气荚膜梭菌G＋b粗大杆菌，呈单或双排列，有芽胞，有荚膜

艰难梭菌G＋b粗长杆菌，有芽胞，有鞭毛，近来发现有荚膜

（二）分离培养

主要分初代培养和次代培养两个阶段，初代培养的一般原则是：

（1）先将标本涂片染色直接镜检，指导培养基的选择；

（2）尽量选用在厌氧菌中覆盖面宽的非选择性培养基；

（3）最好多选1～2种覆盖面不同的选择性培养基；

（4）尽量保证培养基新鲜；

（5）要考虑到微需氧菌存在的可能。

1.选用适当的培养基接种

培养基的使用，应注意下列各点：

尽量使用新鲜培养基，2～4h内用完；

应使用预还原培养基，预还原24～48h更好；

可采用预还原灭菌法制作的培养基；

液体培养基应煮沸10min，以驱除溶解氧，并迅速冷却，立即接种；

培养厌氧菌的培养基均应营养丰富，并加有还原剂与生长刺激因子。

培养基的选择：

初次培养一般都使用选择培养基和非选择培养基。

非选择培养基：本培养基使分离的厌氧菌不被抑制，几乎能培养出所有的厌氧菌。

常使用心脑浸液琼脂（BHI）、布氏琼脂（BR）、胰豆胨肝粉琼脂（GAM）、胰胨酵母琼脂（EG）、CDC 厌氧血琼脂等。

选择培养基：为有目的选择常见厌氧菌株，以便尽快确定厌氧的种类。

选择培养基

2.每份标本至少接种3个血平板，分别置于有氧，无氧及5%～10%C02环境中培养。

3.厌氧培养法

厌氧罐培养法；气袋法；气体喷射法；厌氧手套箱培养法（迄今厌氧菌培养的最佳仪器之一）；平板焦性没食子酸法；生物耗氧法；高层琼脂培养法。

4.厌氧状态的指示：

美蓝和刃天青。

无氧时均呈白色，有氧时美蓝呈蓝色，刃天青呈粉红色。

5.分离培养厌氧菌失败的原因：

①培养前未直接涂片和染色镜检；

②标本在空气中放置太久或接种的操作时间过长；

③未用新鲜配制的培养基；

④未用选择培养基；

⑤培养基未加必要的补充物质；

⑥初代培养应用了硫乙醇酸钠作为唯一厌氧菌培养基；

⑦无合适的厌氧罐或厌氧装置漏气；

⑧催化剂失活；

⑨培养时间不足；

⑩厌氧菌的鉴定材料有问题。

（三）鉴定试验

（1）形态与染色：可为厌氧菌的鉴定提供参考依据。

（2）菌落性状：不同的厌氧菌其菌落形态和性质不同。

（3）抗生素敏感性鉴定试验：

卡那霉素可用于梭杆菌属与类杆菌属的区分，甲硝唑用于厌氧菌与非厌氧菌的区分。

（4）生化特性：主要包括多种糖发酵试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验、触酶试验、卵磷脂酶试验、脂肪酸酶试验、蛋白溶解试验、明胶液化试验、胆汁肉汤生长试验以及硫化氢试验等。