胆碱脂酶测定操作规程

湘西州疾控中心/职防所作业指导书文件编号:XXJK/ZY-F013:2009 标题：全血胆碱脂酶活性测定规程第1版第1页共3页

湘西自治州疾病预防控制中心

作业指导书标题：全血胆碱脂酶活性测定规程

修改记录

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1. 目的

规范全血胆碱脂酶活性测定，正确使用测定方法，保证测定工作顺利进行。

2. 适用范围

适用于全血胆碱脂酶活性测定。

3. 操作程序

3.1 试剂准备：

需准备的试剂包括：磷酸盐缓冲液，碱性羟胺液（使用前用14%盐酸羟胺液和14%氢氧化钠液临时配制），1：2盐酸溶液，10%三氯化铁盐酸液（深棕色瓶储存），0.01%皂素溶液（冰箱保存），氯化乙酰胆碱标准液（包括标准储备液和标准应用液两种）。

3.2 分析：

3.2.1 乙酰胆碱标准曲线制备：将6支具塞比色管中各加水1ml，再分别加入氯化乙酰胆碱标准应用液0ml,0.2ml, 0.4ml, 0.6ml, 0.8ml, 1.0ml，再分别加入磷酸盐缓冲液至2ml，摇匀，然后加入碱性羟胺液4ml，振摇3分钟，再分别加入1：2的盐酸溶液2ml，充分振摇，2分钟后加入10%三氯化铁盐酸液2ml摇匀后过滤，最后于500mm 波长下比色（以试剂空白管调零），按氯化乙酰胆碱不同微克分子数与光密度的相对关系绘制标准曲线。

3.2.2 样品分析：于A管（样品管）和B管（对照管）内各加入0.98ml水，然后加入耳垂血20ul，置于370C水浴箱中5—10分钟后将测定管A系列中每隔半分钟或1分钟依次加入氯化乙酰胆碱标准应用液1.0ml，准确记时后于370C+0.50C水浴中保温30分钟后取出，依次加入碱性羟胺4ml振摇3分钟终止反应；对照管B中先加入碱性羟胺4ml，再加入氯化乙酰胆碱标准应用液1.0ml，振摇3分钟；最后将A、B管分别于500mm波长下比色。

3.3 计算：

3.3.1 被水解的氯化乙酰胆碱的光密度=对照管B的光密度-样品管A光的密度。

3.3.2 用被水解的氯化乙酰胆碱的光密度对照乙酰胆碱标准曲线，可得到相应的被水解的氯化乙酰胆碱量（微克分子），这一数值就是0.02ml血液经过370C30分钟反应条件下的胆碱脂酶活性绝对值。

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4. 注意事项

4.1 0.01%皂素溶液可用蒸馏水代替，不影响测定结果。

4.2 氯化乙酰胆碱标准储备液放久后会霉变而不能用，使用前应注意检查。

4.3 反应的温度和时间对测定结果有明显影响，必须正确控制。

4.4 加入三氯化铁显色后，其产生的棕红色的络合物易褪色，必须在20分钟内完成比色。在样品较多时，应分批加入三氯化铁显色。