白细胞检验

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让我们共同计数下列大格的细胞
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显微镜计数法
【计算】
四个大格白细胞数
白细胞数／Ｌ＝ ———————— × 10× 20× 106
4
式中：÷４得每个大格（即 0.1µl）内白细胞平均数 ×10 因一大格容积为0.1µl，换算为1µl ×20 血液稀释倍数百度文库 ×106 将1µl换算为 1Ｌ。
【操作步骤】 1．制备血涂片 2．血涂片染色 3．白细胞分类 4．计算百分率
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显微镜下白细胞分类计数
准确的白细胞分类计数结果，来源于扎实的血细胞形态学基础和质量优良的血涂片制作与染色，这也是质量控制的关键。
因此，要培养“形态学”镜下硬功夫
血小板
背景细胞
红细胞
白细胞形态
单核细胞
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粒细胞胞质中三种特异性颗粒的鉴别
考考你
中性分叶核粒细胞单核细胞
小淋巴细胞
单核细胞
形态小结
三种粒细胞主要依据胞质中颗粒形态和染色性质去相互鉴别；
淋巴细胞与单核细胞重点根据细胞核的特征区别。
考考你
思考
下列细胞组应重点从哪方面区分：（1）中性粒细胞------嗜酸粒细胞（2）中性粒细胞------单核细胞（3）单核细胞------大淋巴细胞
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中性分叶核粒细胞的核形
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杆状核和分叶核的划分标准
胞核完全分离或核间以丝状相连，或核叶重叠，使核的轮廓看不清，划分为分叶核粒细胞。胞核细长多样，弯曲盘绕，可呈C型、S型、V型或不规则型，划分为杆状核粒细胞。
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中性杆状核粒细胞的核形
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五种白细胞鉴别要点
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白细胞分类计数的参考区间
百分率（%）
中性杆状核粒细胞 1～5
中性分叶核粒细胞 50～70
嗜酸性粒细胞
0.5～5
嗜碱性粒细胞
0～1
淋巴细胞
20～40
单核细胞
3～8
浓度数（×109/L） 0.04～0.5 2～7 0.05～0.5 0～0.1 0.8～4 0.12～0.8
白细胞参考范围是多少？
注意事项
1. 在血涂片选择适宜的分类部位进行细胞分类。 2.移动血涂片的顺序一定要有规律。 3.分类时不能人为地抛弃个别细胞，不能确认者应单独记录比例并用文字描述其形态特征。 4.发现幼稚白细胞应包括在%内，若细胞形态异常也应加以说明。 5.发现有核红细胞（幼红细胞）不计入白细胞%内，而报告“计数×××个白细胞时发现幼红细胞×× 个”，同时要对白细胞计数结果进行校正。 6.如患者WBC少，一张血涂片上分类计数不足100个细胞时可在两张涂片上连续完成。实在有困难时可按“××/50个白细胞”报告（但本法误差大）。
5．计数计数板中细胞如果严重分布不均，应重新充池计数。计数红细胞和血小板用高倍镜，计数白细胞用低倍镜。
6．计数原则凡压线的细胞应按照数上不数下、数左不数右的原则，避免漏数或重复计数。注意识别非细胞成分。
参考区间
白细胞计数：成人： 4×109/L～10×109/L；儿童： 5×109/L～12×109/L；初生儿：15×109/L～20×109/L。
步骤三：分类计数记录步骤四：计算
1、计数的部位
由于各种白细胞大小不同，在血片中分布不很均匀。一般体积较小的淋巴细胞在头、体部较多，而尾部和两侧以中性粒细胞和单核细胞较多，特别是异常大的细胞，常常在片尾末端出现。因此，分类最好是在血膜体尾交界处。
2、计数的秩序
移动血涂片的顺序一定要有规律（城墙式）。由血膜边缘向中央依次上下呈曲线向血膜中间移动，计数不同区域的白细胞，以免重复或遗漏计数，缩小因细胞分布不匀的误差。
8%、 <1%、罕见
分叶核粒细胞
(中性、嗜酸性、嗜碱性)
12%、<5%、<1%
杆状核粒细胞
(中性、嗜酸性、嗜碱性)
20%、 <3%、 <1%
晚幼粒细胞
(中性、嗜酸性、嗜碱性)
10%、<2%、罕见
粒细胞发育
原粒
早幼粒
分叶核血液
中幼粒杆状核
组织
晚幼粒
项目一：白细胞计数
显微镜计数法
【原理】用白细胞计数稀释液，将血液稀释一定倍数并破坏红细胞后，混匀充入计数池中，在显微镜下计数一定容积内的白细胞数，经换算即可求得每升血液中白细胞的总数。
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显微镜计数法
计数池
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计数白细胞的四个大方格
四个角的大方格都用单线划分为16个中方格，为计数密度小的（白）细胞用。
容量： 0.1μl/大方格
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显微镜计数法
【操作】１．取小试管１支，加入白细胞稀释液0.38ml。２．用微量吸管准确吸取外周血20µl。３．擦去管尖外部余血，立即将吸管插入盛有稀释液的试管底部，
1. 中性粒细胞 N neutrophil，N
根据核的形状分类：中性杆状（带状）核粒细胞中性分叶核（多节核）粒细胞标准：核径最窄处小于最宽处1/3为分叶核
核径最窄处大于最宽处1/3为杆状核
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中性分叶核粒细胞（Nsg）
中性分叶核粒细胞的核分２叶～５叶或更多叶，以３叶为常见，叶间以核丝或核桥相连。分叶的大小、形状和排列各不相同。
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绝对值的计算方法
某种细胞绝对值＝白细胞总数×该种细胞% 例：某患者WBC为4×109/L；D.C中Nc为60%，求该患者中性粒细胞浓度数（绝对值）？解：绝对值＝4×109×60%
＝2.4×109/L
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显微镜观察方法
步骤一：低倍镜观察步骤二：油镜观察
分类细胞数量计数区域
2.计数板保证计数板和盖玻片清洁。操作中勿让手指接触计数板表面，以防污染，致使充池时产生气泡。千万勿用粗糙织物擦拭，以免磨损计数板上的刻度。
3．充池一次完成充池，如充池过少、过多、有气泡或出现任何碎片，应拭净计数板及盖玻片后重新操作。
使用计数板进行显微镜计数的注意事项
4．静置计数板平放计数板，充池后不能移动盖玻片。白细胞和红细胞计数一般需沉淀2～3min，血小板应沉淀10～15min，且需注意保湿，因沉淀时间过长会因稀释液挥发造成计数结果不准确。
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1. 中性粒细胞N
杆状核与分叶核的划分标准：
核径最窄处＞最宽处1/3为Nst；
核径最窄处＜最宽处1/3为Nsg;
1. 中性粒细胞 N neutrophil，N
中性分叶核粒细胞（Nsg）
中性杆状核粒细胞（Nst）
1. 中性粒细胞 N neutrophil，N
✓ 细胞质丰富，呈粉红色，含较多细小、均匀、密集的针尖样的染淡粉红色的中性颗粒
【报告方式】 X.XX×109/L
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注意事项
1.试管、计数板等均须清洁。 2.充池前的混匀要注意，气泡不能太多。 3.加盖玻片方式：“推式”，不要“盖式”。 4.计数池内细胞分布要均匀。
总数在参考范围内，每个大方格间白细胞数不得相差8个以上，两次重复计数误差不得超过10%，否则要重新充液计数。 5.遇白细胞数太低者、白细胞数太高者稀释倍数应灵活掌握。 6.当外周血出现大量有核红细胞时应予以校正除去。
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固有误差(计数域误差)
根据统计学研究，白细胞在计数池内的随机分布符合泊森分布。
从计算公式中可以看出计数范围越大，计数的细胞越多，计数域误差越小。
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使用计数板进行显微镜计数的注意事项
1．采血不能过分挤压采血部位，针刺深度必须适当。采血速度不应过慢，否则容易造成血内有凝块，导致细胞减少或计数分布不均。如出现凝块，则应重新采血，并应充分混匀血液和稀释液，且在充池前再次混匀。
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稀释倍数的确认
稀释倍数＝（溶质＋溶剂）/溶质注意：体积单位需一致后方能运算。
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项目二：白细胞分类计数
如何进行血片人工复查（显微镜检查）？
【原理】将标本制成血涂片，经瑞氏染色后，在显微镜下根据白细胞形态学特点逐个分类计数，得出各种白细胞相对比值（或百分率），并注意观察其形态和质量的变化。
中性杆状核粒细胞 1%~5%
中性分叶核粒细胞 50%~70% 嗜碱性粒细胞 0~1%
嗜酸性粒细胞 0.5%~5%
单核细胞 3%~8%
淋巴细胞 20%~40%
一、外周血常见白细胞的形态
经瑞特染色后外周血中常见各种成熟白细胞形态如下：
细胞大小、形态细胞核形态、染色质结构细胞浆、特异性颗粒
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轻轻将血放出，并吸取上清液漱洗吸管２次～３次，注意每次不能冲浑稀释液，最后用手振摇试管混匀。
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操作
４.充液将计数板和盖玻片擦净，盖片盖在计数池上，用毛细滴管或玻璃棒取已混匀的细胞悬液1滴，充入计数池与盖玻片间的缝隙中，静置 2min～3min，待白细胞下沉。
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a. 加白细胞稀释液0.38ml于一小试管中
b. 用微量吸管吸取20ul末梢血。
c. 擦去微量吸管外余血，将其插入稀释液底部，轻轻将血放出，并吸取上清液洗涤微量吸管3次（注意每次不能冲浑稀释液），混匀。
d. 用微量吸管或玻璃棒取混匀的细胞悬液1滴，充入计数池与盖片的缝隙中，静置2-3min，使白细胞下沉。
白细胞检验
（WBC，white blood cell）
白细胞检验相关项目
白细胞计数白细胞分类计数嗜酸性粒细胞直接计数红斑狼疮细胞检验
血液的组成
静置/离心沉淀
—血浆 —白细胞、血小板
—红细胞
项目一：白细胞计数项目二：白细胞分类计数项目三：嗜酸性粒细胞直接计数项目四：红斑狼疮细胞检验
3、计数的细胞
需分类的细胞有中性分叶核粒细胞、中性杆状核粒细胞、淋巴细胞、异型淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。
4、计数的数目
一般分类计数100个白细胞。为减少计数误差，分类计数的白细胞数量视白细胞总数而定。当白细胞总数 >15×109/L时，应分类计数200个白细胞；当白细胞总数<3×109/L时，可多检查几张血涂片，分类计数50~100个白细胞。
✓ 细胞核为深紫红色，染色质致密成块状，粗糙 ✓ 根据核形状分类：中性杆状核粒细胞、中性分叶核粒细胞
2.
淋巴细胞 L
lymphocyte，L
小淋巴细胞：胞浆很少，仅在核的一侧出现一线天蓝色胞浆，有的甚至完全不见。细胞核圆形，偶见凹陷，染色质粗糙致密，可有块状。
大淋巴细胞：体积较大，胞浆较丰富，常有少量粗大、大小不均的紫红色嗜天青颗粒。细胞核染色质比小L疏松。
白细胞概述
粒细胞
中性粒细胞（N）：Nsg\Nst 嗜酸性粒细胞（E）嗜碱性粒细胞（B）
白细胞淋巴细胞（L）
单核细胞（M）
中性粒细胞
嗜碱性粒细胞
红细胞
血小板
嗜酸性粒细胞
单核细胞
淋巴细胞
各系血细胞分化发育阶段及名称
粒细胞系统阶段划分
原始粒细胞
<2%
早幼粒细胞
<5%
中幼粒细胞
(中性、嗜酸性、嗜碱性)
3. 单核细胞 M monocyte，M
✓ 胞浆丰富，染淡蓝或灰兰色，呈毛玻璃样半透明，含大量细小、灰尘样的紫红色嗜天青颗粒。
✓ 核圆形、肾形、马蹄形或不规则形，染色质细致疏松如网状，淡紫红色。
4. 嗜酸性粒细胞 E eosinophil，E
✓ 胞浆内充满粗大、整齐、均匀、排列紧密的橘红色嗜酸性颗粒。
✓ 胞核多为两叶，呈眼镜状，也可偶见分3~4叶的
5. 嗜碱性粒细胞 B basophil，B
✓ 胞质量较少，呈淡红色，含少量粗大但大小不均、排列不规则的紫黑色嗜碱性颗粒，常盖于核上，及细胞边缘。
✓ 细胞核常被颗粒遮盖，核着色较淡，模糊不清。
嗜酸性粒细胞中性粒细胞
嗜碱性粒细胞
淋巴细胞
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显微镜细胞计数的误差
1.技术误差: 由于操作不正确和仪器不精确造成的误差。
2.固有误差: 因每次白细胞分布不可能完全相同所造成的偏差属固有误差，也称计数域误差。
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常见技术误差：
血液凝固稀释倍数不准充液不当识别错误器材不符合要求
e. 低倍镜计数四角4个大方格内白细胞总数。
镜下白细胞形态
似成熟蚕卵，中央核深染，胞质色淡。
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显微镜计数法
计数方法用低倍镜依次计数四角
的四个大格内的白细胞数。对于压线的白细胞，应采取数上不数下；数左不数右（左、上计入，右、下弃去）的原则，保证计数域的一致性，使计数准确。