反相液相色谱法分离芳香烃

实验名称实验十一反相液相色谱法分离芳香烃

目的要求1、熟悉高效液相色谱分离分析的原理及分离度、理论踏板数等概念。

2、掌握根据保留值，用已知纯物质对照定性的分析方法。

3、掌握用归一化法定量测定混合物各组分的含量。

4、掌握用微量进样器进样的基本操作和色谱软件的一般操作。

重点1分离度、理论踏板数、定量分析。

2、分离条件的选择。

难点流动相的配比和过滤，仪器的连接与检漏，进样。

仪器设备高效液相色谱仪（LC-200或其它）、紫外检测器、邻苯二甲酸二壬脂、不锈钢柱（2m）、微量进样(平头)、、苯、甲苯、萘等。

内容提要1、仪器的原理和操作步骤o。

2、试剂的准备（纯物质、混合试液、流动相）。

3、开机、打开软件（建立实验方法）。

4、分别用已知纯物质进样，记录其保留时间。

5、混合试液的分析。

6、数据处理（软件）。

7、用已知纯物质对照，依据保留时间定性，面积归一化法定量（软件）。

操作要点1、试剂的准备（纯物质和混合试液）。

2、流动相的配制、过滤、超声波除气。

3、装上流动相，依次打开主机、泵(设置流量)、紫外检测器（量程）的开关。

4、打开连接色谱工作站的电脑开关

5、建立测定方法。

6.色谱柱的平衡（走基线）

7、待基线走稳后，分别用已知纯物质进样，测定其保留时间。

8、混合试样的测定（以纯物质的保留时间对照定性）。

9、数据记录和结果处理（色谱工作站）

10、关闭紫外检测器。

11、更换流动相，冲洗柱子。

12、关机。

注意事项1、为获得理想的分离效果，保持较低的柱压力降，准确控制流动相的流量，防止微米级的机械杂质阻塞流路是实验操作中的关键。2、必须掌握溶剂的纯化技术，样品最好用针头式过滤器（复杂样品事先要经过预处理），流动相须经0.45微米以下滤膜过滤。

3.注意保护紫外检测器，防止震动。

5、清理实验台面，填写仪器使用记录。

思考题1、高效液相色谱采用3-10微米的固定相有何优点，同时它有给实验带来什么问题，如何克服？

2、若实验中的色谱峰无法完全分离，应如何改善实验条件？

3、高效液相色谱仪由哪几大部分组成？

4、何谓反相键合相色谱？何谓正相键合相色谱？

讨论学习1、什么叫做程序升温？什么叫梯度洗脱？

2、如何选择最佳的实验条件？

3、紫外光度检测器是否适用于所有的有机化合物，为什么？

拓展学习1、探讨液相色谱分离分析的特点和应用？试比较气相色谱法与高效

液相色谱法的相同点和区别。

2、何谓键合固定相？请查阅资料了解C18键合固定相的制备与性能

特点。