副溶血性弧菌检验-检验操作程序及要点-微课件

副溶血性弧菌课件

食品中副溶血性弧菌的检验生化鉴定操作
用接种环将测试菌株的3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂点种表面干燥的我妻氏血琼脂平板。每个平板上可以点状环种几个菌。36℃±1 ℃ 培养不超过24h，并立即观察。阳性结果为菌落周围呈半透明环的β溶血。
副溶血性弧菌检验培养基和试剂
3％氯化钠碱性蛋白陈水〔APW)
蛋白胨 10g 氯化钠 30g 蒸馏水 1000ml
O抗原的鉴定：
将另外一管的菌悬液转移到离心管内，121℃灭菌 1h。灭菌后4000rpm离心15min，弃去上层液体，将细胞浆弹起制成上层清液。用蜡笔将玻片划分成相等的间隔。在每个间隔内加入一滴菌悬液，将O群血清分别加一滴到间隔内，最后一个间隔加一滴生理盐水作自凝对照。轻微倾斜玻片，使各成分相混和，在前后倾动玻片1min。阳性凝集反应应可立即观察到。如果未见O群血清的凝集反应，将菌悬液121℃再次高压1h 后重新检测。如仍旧为阴性则培养物的O抗原属于未知。
NaOH调整pH为7.0，再加水至50ml）5ml，置4℃冰箱中保存。
0NPG溶液为无色，如出现黄色，则不应再用。
（3）方法：从培养基上取菌，于0.25ml无菌生理盐水中制
成菌悬液，加入一滴甲苯并充分振摇，使酶释放。将试管置37℃
水浴5min，加入0.25ml ONPG试剂，水浴20min～3h观察结果。
混浊不透明，表面光滑，较湿润，边缘不整齐。
增菌
定性检测
1.将上述1:10稀释液于 36 ℃ 士1 ℃ 培养8h ～18h .
分离
在所有显示生长的试管或增菌液中用接种环沾取一环，于TCBS 平板或弧菌显色培养基平板上划线分离。一支试管划线一块平板，于 36 ℃ 士1 ℃ 培养18h--24h.

副溶血性弧菌

1范围本标准规定了食品中副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）的检验方法。

本标准适用于食品中副溶血性弧菌的检验。

2设备和材料设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：2.1恒温培养箱：36 ℃±1 ℃。

2.2冰箱：2 ℃～5 ℃、7 ℃～10 ℃。

2.3恒温水浴箱：36 ℃±1 ℃。

2.4均质器或无菌乳钵。

2.5天平：感量0.1 g。

2.6无菌试管：18 mm×180 mm、15 mm×100 mm。

2.7无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头。

2.8无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL、1000 mL。

2.9无菌培养皿：直径90 mm。

2.10全自动微生物生化鉴定系统。

2.11无菌手术剪、镊子。

3培养基和试剂3.13％氯化钠碱性蛋白胨水：见附录A中A.1。

3.2硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖（TCBS）琼脂：见附录A中A.2。

3.33％氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂：见附录A中A.3。

3.43％氯化钠三糖铁琼脂：见附录A中A.4。

3.5嗜盐性试验培养基：见附录A中A.5。

3.63％氯化钠甘露醇试验培养基：见附录A中A.6。

3.73％氯化钠赖氨酸脱羧酶试验培养基：见附录A中A.7。

3.83％氯化钠MR-VP培养基：见附录A中A.8。

3.93％氯化钠溶液：见附录A中A.9。

3.10我妻氏血琼脂：见附录A中A.10。

3.11氧化酶试剂：见附录A中A.11。

3.12革兰氏染色液：见附录A中A.12。

3.13ONPG试剂：见附录A中A.13。

3.14Voges-Proskauer（V-P）试剂：见附录A中A.14。

3.15弧菌显色培养基。

3.16生化鉴定试剂盒。

4检验程序副溶血性弧菌检验程序见图1。

5操作步骤5.1样品制备5.1.1非冷冻样品采集后应立即置7℃～10℃冰箱保存，尽可能及早检验；冷冻样品应在45 ℃以下不超过15 min或在2℃～5℃不超过18 h解冻。

副溶血性弧菌 ppt课件

形、半透明、表面光滑的粉紫色菌落，直径 2mm--3 mm.
注：显色培养基成分：特殊营养物质（75.0 g/L）、混合显色剂（2.3g/L）、琼脂（15.0g/L）。显色培养基是一类利用微生物自身代谢产生的酶与相应显色底物反应显色的原理来检测微生物的新型培养基。 17 ppt课件
四、生化特性
能分解葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、淀粉和阿拉伯胶糖，产酸，不产气。不发酵乳糖、蔗糖、纤维二糖等。从患者样品中分离的致病菌株在人或家兔红细胞的培养基中生长，能产生β溶血。海水中及海产品中分离的菌株不溶血，这个现象称为“神奈川现象”。能在神奈川培养基上产生β溶血者，称为神奈川实验阳性。
ppt课件 31
3.分离
a.对所有显示生长的增菌液，用接种环在距离液面以下 1 cm 内沾取一环增菌液，于 TCBS 平板或弧菌显色培养基平板上划线分离。一支试管划线一块平板。于 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。 b.典型的副溶血性弧菌在 TCBS 上呈圆形、半透明、表面光滑的绿色菌落，用接种环轻触，有类似口香糖的质感，直径 2 mm～3 mm。从培养箱取出 TCBS 平板后，应尽快（不超过 1 h）挑取菌落或标记要挑取的菌落。典型的副溶血性弧菌在弧菌显色培养基上的特征按照产品说明进行判定。
ppt课件
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2、增菌
（1）定性检测
将制备好的 1:10 样品匀液于 36 ℃±1℃培养 8 h～18 h。
（2）定量检测
•用无菌吸管吸取
1:10 样品匀液 1 mL，注入含有 9 mL 3% 氯化钠碱性蛋白胨水的试管内，振摇试管混匀，制备 1:100 的样品匀液。 •另取 1 mL 无菌吸管，按之前操作程序，依次制备 10 倍系列稀释样品匀液，每递增稀释一次，换用一支 1 mL 无菌吸管。 •根据对检样污染情况的估计，选择 3 个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种 3 支含 9 mL 3%氯化钠碱性蛋白胨水的试管，每管接种 1 mL。置 36℃±1℃恒温箱内，培养 8 h～18 h。

副溶血性弧菌标准的检验方法

副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是广泛分布于海水、海底泥沙、浮游生物和鱼贝类中的海洋性细菌，为海产食品引起急性胃肠炎的重要病原菌之一，尤其是在夏秋季节的沿海地区，经常由于食用带有大量副溶血性弧菌的海产食品，引起爆发性食物中毒。

在非沿海地区，因食用此菌污染的食品而引起中毒者亦时有发生。

为保障食品卫生质量和食用安全，根据副溶血性弧菌的特性，进行下列检验，以便鉴别诊断。

第一节副溶血性弧菌标准的检验方法一、检验方法（一）操作步骤1. 分离培养：首先称取样品25g，加225mL3.5％灭菌盐水，用均质器打碎或用乳钵磨碎，接种氯化钠琼脂平板和嗜盐性琼脂平板各一个，同时取10mL加入100mL增菌液中，放37℃8~16h培养后，涂上述平板进行分离，37℃培养18~24h取出观察，挑取可疑菌落，转种3.5％氯化钠三糖铁斜面，37℃、24h观察结果。

2. 涂片镜检：将三糖铁培养基上反应可疑者即底层变黄（葡萄糖产酸不产气）、上层斜面不变（乳糖、蔗糖不分解）、有动力、不产生硫化氢，进行革兰氏染色镜检形态。

3. 嗜盐性试验：将上述可疑培养物分别接种不同含量的盐胨水（0％，3％，7％，10％）于37℃24h培养后观察生长情况，在无盐和10％盐的胨水中不生长，在3％和7％盐的胨水中生长良好者，继续进行下列有关试验。

4. 生化试验：分别接种下列各类生化培养基，葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、甲基红、靛基质、V-P，赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸、硫化氢及溶血性试验，放37℃培养，除V-P、靛基质和甲基红试验培养48h后加试剂观察外，其他均在24h观察结果。

5. 动物试验：将上述符合各类反应的副溶血性弧菌，接种3.5％氯化钠胨水，经37℃、16~18h培养后，小鼠腹腔注射0.3mL，观察2~3d，将死亡小鼠进行解剖作分离培养。

（二）检验程序图6-1 副溶血性弧菌检验程序二、结果分析判定及注意事项（一）样品处理采样时应注意首选准备好灭菌用具及容器，以无菌手续取有代表性的样品，样品必须尽快送检，不宜存放时间过长，副溶血性弧菌在适宜温度下繁殖较快，但不适于低温生存，在寒冷的情况下容易死亡，防止待检材料冷冻，以免影响检验结果。

微生物学检验(第3版)副溶血弧菌

• 食物中毒标本血平板、SS平板/人 • 老师发下菌种： • 1、观察细菌形态 • 2、氧化酶试验 • 3、双糖 • 4、半固体 • 5、弧菌微量生化反应管 2人
形态与染色
1、革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌，单端鞭毛、两端浓染。杆状、棒状、甚至球状、丝状等
培养特性：
1、需氧或兼性厌氧：生长最好 2、在2～３%NaCL培养基中生长最好，无盐或食盐>10%不能生长。 3、最适温度36℃，PH7.5—7.8（7.7） 4、在专用选择性平板上，菌落呈圆形凸起，混浊不透明，表面光滑，较湿润，边缘不整齐。 5、血平板：可见溶血环。
6、嗜盐性试验：
将可疑培养物接种于不同盐浓度的盐胨水中，37℃ 24小时，观查生长情况。盐含量0、3、7、9、11% ，在3～7 %生长良好。
０
３
７
９
11
副溶血弧菌的生化特性
A 靛基液质 B 液葡 V葡磷 I蛋水蔗＋－＋－
甘＋
阿
肌
赖
＋/－
－/＋＋
赖对
精－
精对
材料要注明件数、样品量、采样条件、时间、容器灭菌及清洁方法，食物中毒发生情况及可疑原因等。填写送检单。检验室接到检样后，要检查样品及送检资料后签字，注明接到时间，立即进行检验。检验人员根据检验中的发现，可进行送检项目外的项目的检验。
标本采集－样品送检
• 细菌性食物中毒：
①致病菌检验：对中毒食物、病人排泄物、血液进行检验，作为确定诊断的依据，对环境、设备、工器具、包装材料等的检验，也是诊断的参考依据，以确定污染环节、原因、条件等。 ②致病菌计数检验：有些食物中毒原因菌的检验，需对可疑中毒食品中的活菌数做测定。如腊样芽胞杆菌，只有食品中含菌量≥105个/克时，才能引起食物中毒，病原性大肠埃希氏菌也应做 “MPN”测定；产气荚膜梭菌的重点是活菌计数及确证试验；葡萄球菌也应做菌数检验。对国际上尚未被公认的食物中毒病原菌如变形杆菌属，更需要做计数检验。

副溶血性弧菌检验技术

2.6 无菌试管：18mm×180mm、15mm×100mm
2.7 无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头
2.8 无菌锥形瓶：容量250mL、500mL 1000mL 2.9 无菌培养皿：直径90mm
2.10 全自动微生物生化鉴定系统
2.11 无菌手术剪、镊子
225ml 3%氯化钠碱性蛋白陈水
液体
25mL
摇匀 36±1℃ 均质
25g
样品
8~18h
固体样品
划线分离
氧化酶试验
革兰氏染色
•典型的副溶血性弧菌在 TCBS上呈圆形、半透明、表面光滑的绿色菌落，用接种环轻触，有类似口香糖的质感，直径2mm~3mm。
TCBS琼脂科玛嘉显色琼脂
3％氯化钠TSI
GB 4789.7-2013 标准解读
5 操作步骤
5.1.3 以无菌操作样品25g（mL）加入3%氯化钠碱性蛋白胨水225mL，用旋转刀片式均质器以8000r/min均质1min,或拍击式均质器拍击2min，制备成1：10的样品匀液。如无均质器，则将样品放入无菌乳钵，自 225mL3%氯化钠碱性蛋白水中取少量稀释液加入无菌乳钵，样品磨碎后放入500mL无菌锥形瓶，再用少量稀释液冲洗乳钵中的残留样品1~2次，洗液放入锥形瓶，最后将剩余稀释液全部放入锥形瓶，充分振荡，制备1：10的样品匀液。
食品中副溶血性弧菌检验
一、副溶血性弧菌概况
副溶血性弧菌属弧菌科，是一种生活在近海的海洋微生物，深海一般未发现，大多在温暖的季节水体中分离到该菌。从多种海产品中均能分离到该菌。
副溶血性弧菌引发的胃肠炎一般表现为骤发性剧烈腹痛。所有的副溶血性弧菌胃肠炎起因均是由于进食了海产品或海产品相关的一些食物。在日本，有副溶血型弧菌引发的胃肠炎相当普遍，约占全部胃肠炎爆发事件的50%，原因是日本人爱生吃鱼。

KJ01副溶血性弧菌检验.

典型的副溶血性弧菌在TCBSL呈圆形、半透明、表而光滑的绿色菌落，用接种环轻触，有类似口香糖的质感，直径2mm--3 mm 。
纯培养
挑取三个或以上可疑菌落，划线3 ％氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂平板，36 ℃ 土l ℃ 培养 18h--24h.
初步鉴定
氧化酶试验挑选纯培养的单个菌落进行氧化酶试验，副溶血性弧菌为氧化酶阳性。涂片镜检将可疑菌落涂片，进行革兰氏染色．镜检观察形态。副溶血性弧菌为革兰氏阴性，呈棒状、弧状、卵圆状等多形态，无芽胞，有鞭毛. 3﹪氯化钠三糖铁琼脂挑取纯培养的单个可疑菌落，接种3 ％氯化钠三糖铁凉脂斜面并穿刺底层，35 ℃ 士1 ℃ 培养24h 观察结果。
副溶血性弧菌致病性

致病因子： 1、耐热直接溶血素TDH，肠毒素 2、耐热相关溶血素TRH，与TDH 相似。
二、生物学特性
（一）形态与染色
1、革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌，无芽孢单端鞭毛、两端浓染。杆状、棒状、甚
至球状、丝状等
革兰染色阴性兼性厌氧菌,无芽孢，有鞭毛
菌体为多形态杆菌或稍弯曲弧菌

3 ％氯化钠三糖铁琼脂中的反应为底层变黄不变黑，无气泡，斜面颜色不变或红色加深，有动力。
嗜盐性试验

挑取纯培养的单个可疑菌落．分别接种于不同氯化钠浓度的胰胨水，36 ℃ 士1 ℃ 培养 24h 观察液体混浊清况。副溶血性弧菌在无氯化钠和10％氯化钠的胰胨水中不生长或微弱生长，在7 ％氯化钠的胰胨水中生长旺盛.
检查
副溶血性弧菌
一.副溶血性弧菌的概述

副溶血性弧菌（Bibrio Parahemolyticus），进食含有该菌的食物致可食物中毒，也称嗜盐菌食物中毒，主要翻版海产品。临床上以急性起病、腹痛、呕吐、腹泻及水样便为主要症状。本病多在夏秋季发生于沿海地区，常造成集体发病。近年来由于海鲜空运，内地城市病例也渐增多。此菌对酸敏感，在普通食醋中5分钟即可杀死；对热的抵抗力也较弱。

副溶血性弧菌检验PPT幻灯片课件

• 在血平板和嗜盐性平板上，菌落生长良好。 • 肉汤、琼脂、生化管都应含有3-4%的NaCl
含量。
10
• 神奈川现象(Kanagawa phenomenon，
KP) --在特定条件下，某些菌株在含高盐(7％)的人O型血球或兔血球及以D 甘露醇作为碳源的我妻琼脂平板上产生β溶血的现象 • 神奈川现象与本菌的致病性密切相关
11
血清分型
• O抗原（耐热的菌体抗原） O1- O13 共13种
• K抗原型（荚膜抗原） K1- K71 共65种
• H抗原（鞭毛抗原），无特异性
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三、检测程序
食品安全国家标准副溶血性弧菌检验 GB 4789.7 -2013
13
GB 4789.7-2013
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1、样品制备
• 食品样品鱼类：表面组织、肠、鳃贝类：全部内容物（贝肉和体液）甲壳类：动物的中心部分，包括肠、鳃水产制品
GB 4789.7-2013 副溶血性弧菌检验
1
• 一、概述 • 二、生物学特性 • 三、检测方法
2
一、概述
• 副溶血性弧菌Vibrio parahaemolyticus于 1950年从日本一次暴发性食物中毒中发现。
• 该菌存在于近海海水、海底沉积物和鱼类、贝壳等海产品中。在37℃、pH7.7、3～ 4%NaCl环境中生长最好。
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TCBS平板上典型特征
19
科玛嘉弧菌显色平板--紫色菌落
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4、纯培养
• 挑取3个或以上的可疑菌落，划线3％氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂平板，36℃±1 ℃培养 18 h～24h。
5、初步鉴定
• 氧化酶试验 • 涂片镜检 • 3%氯化钠三糖铁 • 嗜盐性试验

副溶血性弧菌检验课件

培养温度
在37℃下培养24-48小时，观察是否有细菌生长。
分离培养
分离培养基
在SS（Salmonella Shigella）培养基上进行分离培养，副溶血性弧菌在此培养基上呈现绿色菌落。
菌落形态
观察菌落的形状、大小、色泽等特征，以初步判断是否为副溶血性弧菌。
生化鉴定
氧化酶试验
副溶血性弧菌为阳性结果。
基因测序
对PCR扩增产物进行测序，与副溶血性弧菌的基因序列进行比对，以确定是否为副溶血性弧菌。
快速检测方法
Hale Waihona Puke 免疫胶体金试纸条利用抗原抗体反应的原理，将特异性抗体或抗原固定在试纸条上，当与样品中的副溶血性弧菌抗原或抗体结合后，会出现显色反应，判断是否为副溶血性弧菌。
生物传感器
利用生物传感器技术，将副溶血性弧菌的特异性抗体或抗原固定在传感器上，当与样品中的副溶血性弧菌结合后，会产生电信号或光信号，通过信号的强弱判断副溶血性弧菌的浓度。
消毒处理
对接触过患者的物品和环境进行消毒处理。
加强监测
加强食品和水质的监测，及时发现并控制副溶
血性弧菌的传播。
消毒与灭菌方法
高温消毒
将食品或物品加热至70度以上，持续一段时间进行消毒。
紫外线消毒
使用紫外线灯对空气和表面进行消毒。
化学消毒
使用漂白粉、酒精等化学药剂进行消毒。
煮沸消毒
将水加热至沸腾状态，持续一段时间进行消毒。
培养特性
副溶血性弧菌为需氧或兼性厌氧菌，在普通培养基上生长良好，适宜温度为37°C，适宜盐浓度为2-4%。
流行病学特点
01
02
03
传染源
副溶血性弧菌主要来自海产品，如鱼类、贝类、甲壳类等。

副溶血性弧菌检验标准操作程序

样品制备
甲壳类取整个动物，或者动物的中心部分，包括肠和鳃。
样品制备
如为带壳贝类或甲壳类，则应先在符合生活饮用水卫生标准的流水中洗刷外壳并甩干表面水分，然后以无菌操作打开外壳，按上述要求取相应部分。
样品制备
以无菌操作取检样25 g（mL），加入 3％氯化钠碱性蛋白胨水225 mL，用旋转刀片式均质器以8 000 r/min均质1 min，或拍击式均质器拍击2 min，制备成1:10 的均匀稀释液。如无均质器，则将样品放入无菌乳钵中磨碎，然后放在500 mL的灭菌容器内，加225 mL 3％氯化钠碱性蛋白胨水，并充分振荡。
TCBS琼脂上面的副溶血性弧菌
四种显色培养基
纯培养
挑取3个或以上的可疑菌落，划线 3％氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂平板， 36 ℃±1 ℃ 培养18 h～ 24 h。
初步鉴定
氧化酶试验：挑选纯培养的单个菌落进行氧化酶试验，副溶血性弧菌为氧化酶阳性。
初步鉴定
涂片镜检：将可疑菌落涂片，进行革兰氏染色，镜检观察形态。副溶血性弧菌为革兰氏阴性，呈棒状、弧状、卵圆状等多形态，无芽胞，有鞭毛。
范围
本标准规定了食品中副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）的检验方法。本标准适用于水产品及食物中毒样品中副溶血性弧菌的检验，其他食品可参照使用。
食品种类
动物性水产品：鲜冻水产品（定性检测）：新鲜水产品和冷冻水产品；生食水产品（定性、定量检测）：新鲜的、冷藏、冷冻的海水或淡水鱼类、甲壳类、贝壳类和软体动物等，未经腌制、加热，可以直接食用的。
初步鉴定
挑取纯培养的单个可疑菌落，转种3％氯化钠三糖铁琼脂斜面并穿刺底层，36℃±1℃培养24h观察结果。副溶血性弧菌在3％氯化钠三糖铁琼脂中的反应为底层变黄不变黑，无气泡，斜面颜色不变或红色加深，有动力。

副溶血性弧菌标准的检验方法

副溶血性弧菌标准的检验方法副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是广泛分布于海水、海底泥沙、浮游生物和鱼贝类中的海洋性细菌，为海产食品引起急性胃肠炎的重要病原菌之一，尤其是在夏秋季节的沿海地区，经常由于食用带有大量副溶血性弧菌的海产食品，引起爆发性食物中毒。

在非沿海地区，因食用此菌污染的食品而引起中毒者亦时有发生。

为保障食品卫生质量和食用安全，根据副溶血性弧菌的特性，进行下列检验，以便鉴别诊断。

第一节副溶血性弧菌标准的检验方法一、检验方法（一）操作步骤1. 分离培养：首先称取样品25g，加225mL3.5％灭菌盐水，用均质器打碎或用乳钵磨碎，接种氯化钠琼脂平板和嗜盐性琼脂平板各一个，同时取10mL加入100mL增菌液中，放37℃8~16h培养后，涂上述平板进行分离，37℃培养18~24h取出观察，挑取可疑菌落，转种3.5％氯化钠三糖铁斜面，37℃、24h观察结果。

2. 涂片镜检：将三糖铁培养基上反应可疑者即底层变黄（葡萄糖产酸不产气）、上层斜面不变（乳糖、蔗糖不分解）、有动力、不产生硫化氢，进行革兰氏染色镜检形态。

3. 嗜盐性试验：将上述可疑培养物分别接种不同含量的盐胨水（0％，3％，7％，10％）于37℃24h培养后观察生长情况，在无盐和10％盐的胨水中不生长，在3％和7％盐的胨水中生长良好者，继续进行下列有关试验。

4. 生化试验：分别接种下列各类生化培养基，葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、甲基红、靛基质、V-P，赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸、硫化氢及溶血性试验，放37℃培养，除V-P、靛基质和甲基红试验培养48h后加试剂观察外，其他均在24h观察结果。

5. 动物试验：将上述符合各类反应的副溶血性弧菌，接种3.5％氯化钠胨水，经37℃、16~18h 培养后，小鼠腹腔注射0.3mL，观察2~3d，将死亡小鼠进行解剖作分离培养。

（二）检验程序图6-1副溶血性弧菌检验程序二、结果分析判定及注意事项（一）样品处理采样时应注意首选准备好灭菌用具及容器，以无菌手续取有代表性的样品，样品必须尽快送检，不宜存放时间过长，副溶血性弧菌在适宜温度下繁殖较快，但不适于低温生存，在寒冷的情况下容易死亡，防止待检材料冷冻，以免影响检验结果。

KJ02-食品卫生微生物学检验-副溶血性弧菌检验.上课讲义

流行病学
➢ 季节分布，多见于春夏季；
➢ 中毒食品种类多，多见于奶、肉、蛋、鱼及其制品。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。
耐受力
➢ 几乎所有的消毒试剂以及热加工过程对金黄色葡萄球菌都有严重的破坏作用
➢ 肠毒素可耐受100℃ 30分钟不被破坏。
➢ 对于加工过的食品或食品加工设备而言，此菌或其肠毒素的存在通常作为卫生条件差的一种指标。
生物学特性
---菌体形态及培养特征
大多数菌株能生长在6.5-46℃之间（最适温度3037℃）能在pH4.2-9.3之间生长（最适pH为7.07.5）；
大多数菌株产生类胡罗卜素，使细胞团呈现出深橙色到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，而且在单个菌株中可能也有变化。
生物学特性
---菌体形态及培养特征
3
2、范围
➢ 本标准规定了副溶血性弧菌检验方法。 ➢ 本标准适用于动物性水产干制品、腌醉制生食动物性水
产品、即食藻类食品、鱼糜制品等水产食品和水产调味品以及食物中毒样品中副溶血性弧菌的检验。
4
3、生物学特性
1）菌体形态学特征 3）抵抗力
2）培养特性 4）致病性
1）菌体形态学特征
本菌为G-，可两端浓染，多形态，无芽孢，单端单鞭毛，有嗜盐特性，在30-37℃最适温度时增长较快，一般冬季不易检出。
生化试验
12
结果样品经过增菌培养、分离培养后，根据形态观察、生化试验的结果判断是否发现副溶血性弧菌并报告。
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金黄色葡萄球菌检测
生物学特性
---菌体形态及培养特征
革兰氏阳性球菌，直径为0.8-1.0微米，镜检时呈单个、成对、四联或不规则的簇群；

实验四水产品中副溶血型弧菌的检测

副溶血性弧菌是革兰氏阴性杆菌，无芽胞，无夹膜，有鞭毛，营养要求不高，在普通培养基中加入适量氯化钠即可生长，对副溶血性弧菌的检验及鉴定过程并不复杂，关健是样品的采集和及时送检，若不能及时送检，千万不能放冰箱保存，因其不耐低温。最好将样本放硷性蛋白胨水或卡布运送培养基内。
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三、试剂和仪器
剪刀1把
不锈钢汤匙1把
称量纸适量
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（三）应准备的培养基和试剂
培养基总量
所用容器
1.3.5%灭菌盐水：
8瓶 225ml/瓶
500ml三角瓶
2.氯化钠结晶紫增菌液：8瓶 100ml/瓶
250ml三角瓶
3.氯化钠蔗糖琼脂
2瓶 150ml/瓶
250ml三角瓶
4.选择性琼脂：
2瓶 150ml/瓶
250ml三角瓶
制法：将上述成分加蒸馏水至1000mL，混合，使全部溶解，校正pH为，加热煮沸，不需高压灭菌，倾注平皿15~20mL。
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待用培养基
（五）氯化钠血琼脂（我妻氏培养基）成分：酵母膏 3g
蛋白胨
10g
氯化钠
70g
磷酸氢二钠 5g
甘露醇
10g
结晶紫
0.001g
琼脂 15g
（一）最先准备的器材
规格名称
数量
用途
1、500ml三角瓶 1个
制3. %氯化钠碱性蛋白胨
2、250ml三角瓶 3个
制培养基
3、15×150mm试管 7支
制3 %氯化钠三糖铁培养基
4、直径为90mm平皿 4套
制TCBS等平板
5、1ml移液管
2支
6、10ml移液管 2 支
7、250ml量筒

食品中副溶血性弧菌的检验

食品中副溶血性弧菌的检验
食品中副溶血性弧菌的检验
一、概况媒介食品副溶广泛存在于海岸和海水中，海生动
植物常会受到污染而带菌。海鱼、虾、蟹、蛤等海产品带菌率极高；被海水污染的食物、某些地区的淡水产品如鲫鱼、鲤鱼等及被污染其他含盐量较高的食物如咸菜、咸肉、咸蛋亦可带菌，也可因受到污染而引起中毒。带用少量该菌的食物，在适宜的温度下，经3～4小时细菌可急剧增加至中毒数量。进食肉类或蔬菜而致病者，多因食物容器或砧板污染所引起。
无粘性，(绿)兰色，直径2—4mm 嗜盐选择性平板：直径2.5mm，圆整或不
齐，隆起混浊，无粘性，无色，湿润。 4、选择性培养
取上述可疑菌落接种于3.5% Nacl-TSI 培养37℃ 24小时 5、镜检：取上述可疑菌落镜检，应为革兰氏阴性，无芽胞多形态，两端浓染。
食品中副溶血性弧菌的检验
副溶血性弧菌在海博弧菌显色培养基上典型特征。典型副溶
7、生化试验
• 分别接种各类生化培养基，置37 ℃恒温培养。除V-P、靛基质、甲基红试验培养48小时后加试剂观察外，其他均可在24小时观察。试验结果判定参照下表。
食品中副溶血性弧菌的检验
生化特性
葡萄糖产酸葡萄糖产气蔗糖乳糖甘露醇硫化氢甲基红
7、生化试验
副溶血性弧菌的生化性状表
血性弧菌显蓝色至蓝绿色，霍乱弧菌和其它弧菌显无色。
副溶血弧菌在蔗糖琼脂（tcbs）平板上的菌落
食品中副溶血性弧菌的检验
6、嗜盐性试验
将可疑培养物接种于不同盐浓度的盐胨水中，37℃ 24小时，观查生长情况。盐含量 0、3、7、9、11% ，在3-7 %生长良好。
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食品中副溶血性弧菌的检验

农产品微生物检验技术W4504-1-副溶血性弧菌检验-检验操作程序及要点-微设计

《农产品/食品微生物检验》课程-微设计
微课名称
副溶血性弧菌检验-检验操作程序及要点
关键词
副溶血性弧菌；检验；操作；要点
微课类型
讲授型
微课形式
PPT动画式
画中画式
教学设计模式
讲授法
教学目标
掌握副溶血性弧菌检验操作程序
明确副溶血性弧菌检验操作要点
教学内容
知识点
技能点
副溶血性弧菌检验操作程序
副溶血性弧菌检验操作要点
副溶血性弧菌检验操作
副溶血性弧菌检验操作要点把控
设计思路
教学步骤
呈现形式与素材
时长(min)
副ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ血性弧菌检验操作程序（知识点1）
副溶血性弧菌检验操作要点（知识点2）
副溶血性弧菌检验操作（技能点1）
副溶血性弧菌检验操作要点把控（技能点2）
ppt、图片、视频
微课1：12.5min
微课2：25min
小计
37.5 min
PBL讨论
试述副溶血性弧菌在TCBS琼脂平板上的典型菌落特征。
副溶血性弧菌初步与确定鉴定包括哪些生化项目。
设计者
黄涵年，应用工程系
版本号
20150820
备注
副溶血性弧菌检验-检验操作程序及要点分为1、2两个微课进行

副溶血性弧菌检验-检验操作程序及要点-微课件

副溶血性弧菌课件