基因定点诱变常用方法
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(2) 大引物诱变:核心 是第一轮PCR产物为 第二轮PCR引物
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(2) 硫代磷酸诱变法: 已知有些限制 酶不能切割硫代磷酸DNA分 子．在异源双链DNA分Leabharlann Baidu制备 时，加入硫代核苷酸，使之掺 入突变链中．然后用前述酶切 割，并用外切酶局部消化后， 进行聚合反应，从而产生具有 定点突变的异源双链DNA
2.4.３ ＰＣＲ诱变 (1) 重组PCR定点诱 变:克服寡核苷酸引 物诱变能力仅限于5’ 端. 特点:经3轮PCR反 应,一对互补的带有 突变碱基的内侧引 物和2个外侧引物
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第四节 基因定点诱变
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2.4.1 盒式诱变 利用一段人工合成 的具有突变序列的 寡核苷酸片段取代 野生型基因中的相 应序列.
2.4.2 寡核苷酸引物诱变
使用化学合成的含有突变碱基
的寡核苷酸片段作引物,启动
单链DNA分子进行复制，随
后这段寡核苷酸引物便成为了
新合成DNA子链的一个组成 部分。
寡核苷酸引物诱变过程
正链DNA合成 突变引物合成 异源双链DNA分子制备 闭环异源双链DNA分子富集 转化 突变体筛选 寡核苷酸引物诱变法的局限性
异源双链DNA分子并非真正异源 突变体子代中突变碱基被错配修 复体系修复
提高寡核苷酸引物诱变突变效率的方法 (1) Kunkel 定点诱变法: 1985年由 T.A.Kunkel发明 ung:尿嘧啶脱糖苷酶