实验四细菌革兰氏染色

实验四 细菌革兰氏染色
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目的：1、了解细菌革兰氏染色的原理 2、学习及掌握革兰氏染色方法
内容： 1、涂片 2、革兰氏染色
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细菌染色的目的意义：
细菌菌体微小、而且折光率低，在显微镜下 特别是在油浸物镜下几乎与背景无反差，很难看 清楚，如将其染色，使折光率增大，便容易观察。 由于菌体的性质及各部分对某些染料的着色性不 同，因此可以利用不同的染色方法来区别不同的 细菌及其结构。
革兰氏阴性菌：细胞壁肽聚糖层薄，网状结构交
联少，类脂含量较高， 经乙醇处理后，类脂被溶解， 细胞壁孔径变大，通透性增加，结晶紫与碘的复合 物被溶出细胞壁，因而细菌细胞被脱色，再经石炭
酸复红复染后细胞呈红色。
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革兰氏染色步骤
蒸
馏
水
涂片
接
种
环
固定 自然干燥
干燥 镜检
红石 稀
炭释 酸的 复
95% 酒精
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染色剂分类：
碱性染色剂：（电离后分子带正电荷）；碱性染色剂主要用于 染核和异染颗粒等细胞结构。
酸性染色剂：（电离后分子带负电荷）；酸性染色剂主要用于 染细胞质。
复合染色剂：（在电离后分子不带电荷，故也称为中性染色 剂）；复合染色剂主要用来染螺旋体和立克次 氏体。
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涂片染色程序： 涂片 自然干燥 固定 干燥 镜检
洗。 →干燥→镜检。
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革兰氏染色时注意事项：
1、要用幼龄培养物作革兰氏染色； 2、涂片不宜太厚，以免脱色不完全造成假阳 性
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革兰氏染色原理： 细菌细胞壁的化学组成和结构
不同 。
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革兰氏阳性菌：细胞壁肽聚糖层厚，交联而成的
肽聚糖网状结构致密，经乙醇处理发生脱水作用， 使孔径缩小，通透性降低，结晶紫与碘形成的大分 子复合物保留在细胞内而不被脱色，结果使细胞呈 现紫色。
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18Hale Waihona Puke Baidu
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染色的基本原理
• 1、用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性 • 染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电 • 荷，能和带负电荷的物质结合。 • 2、革兰氏染色法所以能将细菌分为G+菌和G— • 菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所 • 决定的。
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染色剂（染料）：
是苯环上含有发色基团和助色基团的化 合物。发色基团使化合物本身具有染色之 能力，助色基团有电离特性，可以于被染 物结合，使被染物着色。
染色
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大肠杆菌、枯草杆菌 水
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革兰氏染色可将所有的细菌分为两大类，蓝 色的革兰氏阳性菌和红色的革兰氏阴性菌。 是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法。
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革兰氏染色步骤为：紫、碘、酒、红四步。
1、草酸铵结晶紫染色1-2 min（碱性染料着 染）→水洗； 2、革兰氏碘液染1-3 min（媒染剂媒染） → 水 洗； 3、酒精脱色30s-1 min（脱色剂） →水洗； 4、稀释的石炭酸复红10-30s（复染） →水
复染 10~30s
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脱色 20~30s
晶铵草 紫结酸
初染 1min
媒染 液 碘 2-3min
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思考题：
1、革兰氏染色的关键步骤是什么？ 2、当你对未知菌进行革兰氏染色时，怎样保证操作 正确，结果可靠？ 3、进行革兰氏染色时注意那些事项？ 作业：原理、方法、结果、分析讨论及绘图 绘图：绘出用革兰氏染色法染出的细菌形态图 要求：视野要圆；细菌的大小要合理；并写出菌名 及放大倍数；用铅笔。标出染的细菌种类及颜色。