微生物检验与控制精品PPT课件

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对于固体培养基,获得的生长结果不得 超过由标准接种而来的计算值的两倍范围。
回收率:
对照组计数
—————— ≤ 数 2
测试组计数
≤ 2 X 对照组计
计数方法适用性试验:
实质:微生物计数方法验证。
几个数字要求: - 接种菌悬液的体积不大于供试液的1% - 菌悬液含菌量不大于100cfu - 抗菌或抑菌活性的标准:回收率低于50%
作为重要组成的微生物控制:
原料和组分的微生物控制 环境的微生物控制 生产过程的微生物控制 成品的微生物控制 人员的微生物控制 所有微生物控制的整合
微生物实验室重要的控制点:
-无菌技术 -培养基控制 -菌种控制 -设备控制 -实验室布局和运作 -数据文件控制 -员工培训
无菌技术:
防止和保持无菌物品及无菌区域不被污染 的操作方法和管理方法。
-无菌环境 -灭菌 -消毒 -卫生要求 -无菌操作技术
培养基
微生物实验室工作质量的核心是培养基,应根据既定的 目的选用正确的培养基。生产商应提供相关的COA和说 明书:
-配制 -储存 -菌种选用
水:
-纯化水,去离子水,蒸馏水 -记录用量
成分的测量:
-校准过的天平,天平的量程应准确 -清洁的容器和工具 -记录称量
微生物测试方法
平皿法
1、倾注发;
薄膜过滤法
2、涂布法
MPN法
涂布法:
新引入的方法 关键点:涂布供试液不少于0.1mL.
微生物限度标准解释:
101 可以接受的最大菌数为20; 102 可以接受的最大菌数为200; 103 可以接受的最大菌数为2000;
非无菌产品微生物限度检查: 控制菌检查法
培养基适用性检查合格标准:
1、回收率比值:0.5-2 范围内; 2、菌落:形态大小与对照培养基一致; 3、液体培养基:被检液体培养基与对照培养
基比较,生长良好。
回收率:
USP34-61:
For solid media, growth obtained must not differ by a factor greater than 2 from the calculated value for a standardized inoculum。
1、非无菌药品的微生物污染可能性很低,因 此测试的价值不大。
2、微生物限度测试属于“小概率事件”;以 小概率事件衡量整批产品质量不妥。
3、微生物测试延长了产品放行周期,增加了 库存成本和市场缺货的机会
微生物控制菌检验结果解释:
-阳性。产品报废。 -阴性,(1)未检出;
(2)非控制菌。怎么办?
微生物实验室检验技术
防止过度加热或潜在污染 -融化时,使用
水浴或流通蒸汽 微波炉,热板要防止过度加热 -融化的培养基储存 在40~45℃水浴不应超过8小时 浇制平皿前擦干
培养基应标示:
-制备批号 -制备日期,有效期 -培养基名称
有效期确定
-根据成分,配方,容器,储存条件等确定 -生长能力试验数据支持
培养基储存: 培养基应根据生产商的说明书,并在验 证过的条件下储存
接种量:不大于100 cfu
培养条件:温Fra Baidu bibliotek:30-35℃
过5天
时间:不超过3天;不超
霉菌和菌总数计数:
培养基:沙氏葡萄糖琼脂 SDA 试验菌株:白色念珠菌、黑曲霉菌 接种量:不大于100 cfu 培养条件:温度:20-25℃
时间:不超过5天
培养基适用性检查:
范围: - 成品培养基(新引入概念) - 有脱水培养基制成的培养基 - 按处方配制的培养基
培养基
不要过度加热
-加热帮助溶解,通常培养基变深说明过度加热 -添加剂加入后需充分混合
清洁的玻璃器皿
-防止外来污染和抑菌剂 -玻璃器皿清洁
培养基
灭菌条件
-供应商提供参数,或自己验证 -高压蒸汽灭菌,过滤除菌 -验证应考虑无菌和培养基生长能力 - 湿 热 灭 菌 要 考 虑 装 载 分 布 , 通 常 121℃
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中国药典修订版整体特点:
微生物检验方法与国外药典接近 符合微生物生长特性 标准与国际药典USP/EP/JP相近
微生物学是开发、生产及成品测试的一部分
无菌控制也适用于非无菌产品 控制贯穿于一个药物或生物制剂从研发到市场 到成品控制的整个过程
整个过程中的各种微生物控制的整合将提高 最终产品微生物质量的保证
培养基适用性检查
培养基促生长能力检查
分离培养基在规定的最短时间内促生长能力考 察。
培养基抑菌能力检查
分离培养基在规定的最长时间内的抑菌能力考 察。
检验方法适用性试验:
实质:控制菌检验方法验证。
适用性试验:
规定最短时间培养,试验菌检出能力试验。
供试品检查:
规定最长时间下的控制菌试验。
微生物限度测试的必要性:
非无菌产品微生物限度检查: 微生物计数法
主要特点
需氧菌概念 回收率测试方法与合格限度
培养基适用性检查:
培养基: 胰酪大豆胨琼脂/胰酪大豆胨肉汤 TSA / TSB
沙氏葡萄糖琼脂/沙氏葡萄糖肉汤 SDA
需氧菌总数计数:
培养基:胰酪大豆胨琼脂 TSA
试验菌株:金黄色普通球菌、铜绿假单胞菌、枯 草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌
培养基储存不得超过有效期
重要区域环控用培养基必须
-双层包装 -最终灭菌,否则进行全数预培养及用前检查
培养基质量控制:
所有待用的培养基应检查:
-生长能力
每批制备的培养基均需进行 测试菌种根据药典,供应商说明及环境中分离得到的菌株
生长能力测试不合格 -调查 -不得使用该批号
15min
培养基灭菌条件
-在无菌和过度加热之间平衡 -消毒锅灭菌结束后,不建议在其中存储培养基 -不正确的加热、灭菌条件会影响培养基的
颜色 澄清度 pH 凝固能力 促生长能力 选择性
制备培养基的储存:
-低于0℃,凝胶结构破坏 -避光 避热 -琼脂培养基密封
融化 -重复融化应被限制(不超过一次),
药品微生物检验与控制
培训主题:
1、新修订的“微生物限度检查法”介绍 2、药品微生物实验室质量管理和质量保证 3、药品微生物检验操作技术 4、洁净环境微生物监测
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3
4
培训主题:
1、2010版《中国药典》第一增补本介绍 2、新修订的“微生物限度检查法”介绍 3、药品微生物实验室质量管理和质量保证 4、药品微生物检验操作技术 5、洁净环境微生物监测
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