脂溶性维生素的测定

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液相色谱水—异丙醇体系测定脂溶性维生素A,D,E

液相色谱水—异丙醇体系测定脂溶性维生素A,D,E
1 1 仪 器 与 材 料 .
解, 溶液 经紫 外分 析仪 扫 描 发 现 , 种 维 生 素 在 2 0 n l 有 三 8 l 均 T
较 强 的 吸 收 , 以 检 测 波 长 选 择 为 2 0n l 所 8 l 。 T 2 2 流 动 相 的 选 择 .
Waes 效液 相 色 谱 仪 ;6 0 tr 高 0 E泵 ; 外 检 测 器 ; K手 紫 U6 动进 样器 ;8 0数 据处 理 系 统 ; 声 波 振 荡 器 ;旋 转 蒸 发 仪 ; 1 超
维普资讯
第 2 卷 , 4期 2 第
2 0 0 2 年



V 1 2 o 4 p 6 3 6 4 o. . . .p 9 -9 2
Au u t 2 0 g s,0 2
S e to c p n p c r l p cr so y a d S e ta ay i An l ss
维 生素 是维 持人 类 机体 正常 生育 的具 有 生物 活性 的一 类 化 合物 . 多维 生素 是 酶的辅 基 和酶 的组 成部 分 , 许 因此 , 定 测 食 品 中或药 物 中维生 素 的含 量是 食 品营养 分 析 和药物 分析 的 主要 内容之 一 。脂 溶 性 维 生 素 的分 析 方 法 一 般 有 生物 法 、 分 光光 度 法 、 薄层 色谱 法 、 光光 度法 等 , 这些 方 法 都 只 能 单 荧 但 独 的测定 一 种维 生素 , 随着 高效 液相 色谱 技 术 的发展 , 内外 国 研究 工 作着 利用 高效 液 相色谱 技 术分 析脂 溶性 维 生素 做 了很 多工 作 , 展 了更具 有 选 择 性 的分 析 方 法 , 电 化学 法 、 谱 发 如 质 法等 , 且 对 同 时 测 定 脂 溶 性 维 生 素 的 方法 作 了 一些 探 索 。 并 为 了完 全分 离一组 脂 溶 性维 生 素 , 高 效 液 相 色谱 中需 要 梯 在 度洗 脱 或者需 要连 柱 色谱 技术 。用 单 独的 流动 相来 同时测 定 脂溶 性 维生 素 A, E 比较难 , 达 到最 佳完 全分 离 效果 。本 D, 很 文在 综 合 国内外研 究 成果 的基 础 上用 水 一异丙 醇体 系 同时 测

脂溶性维生素的定量检测

脂溶性维生素的定量检测

脂溶性维生素的定量检测维生素的化学多样性使得其难以同时被萃取和分析。

食物中的维生素含量介于纳克到毫克之间,婴儿配方奶粉等基质中的维生素含量进行标记时,水溶性和脂溶性维生素的分析通常分开进行,这就会延长分析时间。

维生素的不同,其分子结构的多样性会因为最大吸光度而不同。

脂溶性维生素包括维生素A、D、E和K,它们都含有环结构和长的、脂肪族烃链,这四种维生素都是高度疏水的,每一种都至少有一个极性基团。

脂溶性维生素由长的碳氢链或稠环组成的聚戊二烯化合物。

在研究中,我们采用了一种高灵敏度、可靠的方法,通过紫外检测技术,同时测定9种脂溶性维生素。

使用此方法能够对食品样品进行营养成分标记快速分析,可获得极高的色谱分离度。

峰面积和保留时间重现性的相对标准偏差值较低,这证实了所开发的方法的可靠性和灵敏度。

为了证明该方法能够有效用于营养成分的标记,我们对婴儿配方奶粉和复合维生素片中的维生素D进行定量分析,然后将所得结果与标示值进行比较。

采用回收率校正方法,计算得到的婴儿配方奶粉和复合维生素片中维生素D的含量数值与标示值非常接近。

结果表明该方法非常适用于定量食品样品中的维生素。

北京清析技术研究院在华北、华南、华中、华东、西北等地区,建立12大分院及配套实验室,秉承母校校训,以严谨、求实的工作态度,为数千家企业客户提供产品研发、成分分析、材料检测、工业诊断、模拟测试、大型仪器测试、可靠性验证等专业技术服务,还为全国范围内的公安局、法院、检察院、律师事务所、司法鉴定中心、医院、高等院校、中国科学院提供专业技术服务。

经过几十年的团队技术积累,北京清析技术研究院下设环境检测事业部、食品保健品检测事业部、药品化妆品检测事业部、失效分析事业部、公检法服务事业部、高校科研服务事业部、成分分析/配方分析事业部、生物医药事业部等10大部门。

18维生素的测定

18维生素的测定

(三)液相色谱分析 色谱推荐条件: 预柱:ODS 10μm,4mm×4.5cm 分析柱:ODS 5μm,4.6mm×25cm 流动相:甲醇:水=98:2,混匀,临用
前脱气。
紫外检测器波长:300nm,量程0.02 进样量:20μL 流速:1.65~1.70mL/min
生物鉴定法:费时、费力、需要动物饲养场地 微生物法:仅限于水溶性维生素的测定 荧光法:用于硫胺素的测定 仪器法:快速、灵敏、有较好的选择性 HPLC:用于大多数维生素的测定,费用高
二、脂溶性维生素的测定
脂溶性维生素的理化性质
溶解性:脂溶性维生素不溶于水,易溶于苯、 乙 醚、 丙酮、三氯甲烷、乙醇等有机溶剂。

做空白试验
重复上述操作,将20ml维生素B1标准使用液加入 盐基交换管以代替试样提取液,即得到标准净化液。
4.氧化
将5ml试样 净化液分别加 入A、B两个 反应瓶;
同时将5ml 标准净化液分 别加入A1、B 1两个反应瓶 中。
Maizel-Gerson 反应瓶
氧化流程
A、A1瓶 15%NaO H (3 ml)溶液振摇
(一)原理
样品中维生素A 及维生素E 经皂化提取 处理后,将其从不可皂化部分提取至有 机溶剂中。用高效液相色谱法C18 反相 柱将维生素A 和维生素E 分离,经紫外 检测器,用内标法定量测定
(二)样品处理
1.皂化称取适量样品(含维生素A 约3μg, 维生素E 各异构体约40μg)于三角瓶中, 加30mL 无水乙醇,振摇使样品分散。加 入5mL100g/L 抗坏血酸溶液和2.00mL 苯 并[e]芘溶液(5μg/L,内标用),混匀, 加10mL 氢氧化钾溶液(50%浓度),混 匀,于沸水浴上回流30min,使皂化完全, 皂化后立即放入冰水中冷却。

HPLC法测定脂溶性维生素注射液中维生素D2及维生素E的含量

HPLC法测定脂溶性维生素注射液中维生素D2及维生素E的含量

HPLC法测定脂溶性维生素注射液中维生素D2及维生素E的含量目的建立测定脂溶性维生素注射液中维生素D2、维生素E的高效液相色谱(HPIC)分析方法。

方法应用高效液相色谱法。

维生素D2采用Kromasil 100-5sil(250mm×4.6mm)色谱柱:以正已烷:异丙醇(97.5:2.5)为流动相:流速为1ml/min):检测波长为265nm:柱温室温:紫外测器。

维生素E采用Kromasil 100-5sil(250mm×4.6mm)色谱柱:以正已烷-异丙醇(99.5∶0.5)为流动相:流速为1mL/min:检测波长为298nm:柱温室温:紫外检测器。

结果维生素D2和维生素E分别在0.26~2.08?g/mL和0.64~3.20mg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

维生素D2和维生素E的平均回收率分别为98.90%、100.2%、RSD分别为1.2%、1.1%。

结论本方法准确、快速、重现性好。

标签:维生素D2;维生素E;高效液相色谱法;含量测定[Abstract ] Objective To develop the HPLC method for determination of vitamin D2,vitamin E content in the Fat-soluble vitamin injection. Methods High performance liquid chromatography(HPLC)was used.Kromasil 100-5sil (250mm×4.6mm)chromatographic column was used to determine vitamin D2,n-hexane:isopropanol(97.5:2.5)was as mobile phase,the flow rate was 1ml/min,wavelength was 265nm,under the condition of room temperature,and UV-detector were used.Kromasil 100-5sil(250mm×4.6mm)chromatographic column was used to determine vitamin E:n-hexane:isopropanol(99.5∶0.5)was as mobile phase,the flow rate was 1ml/min,the wavelength was 298nm,under the condition of room temperature,and UV-detector were used. Results There was a good linear relationship between the 0.26-2.08?g/mL range and peak area for vitamin D2,while the 0.64-320?g/mL range for vitamin E.The average recovery rate of vitamin D2 and vitamin E were 98.90% and 100.2%.RSD of vitamin D2 and vitamin E were 1.2% and 1.1%. Conclusion The method is accurate,rapid and reproducible.[Key words] Vitamin D2;Vitamin E;Chromatography(HPLC);Determination脂溶性維生素注射液为含有维生素A、维生素D2、维生素E、维生素K1和注射用大豆油,卵磷脂等的灭菌乳剂,属维生素类药。

维生素D的测定——脂溶性维生素的测定

维生素D的测定——脂溶性维生素的测定

维生素D的测定——脂溶性维生素的测定为一组存在于动植物组织中的类固醇的衍生物,因其有抗佝偻病作用,也称之为抗佝偻病维生素。

目前己知的维生素D起码有10种,但最重要的是维生素D2和维生素D3。

维生素D2又名麦角钙化醇,分子式为C28H44O,相对分子质量为396.66;维生素D3又名胆钙化醇,分子式为C27H44O,相对分子质量为384.65。

食品中维生素D的含量很少,且主要存在于动物性食品中。

维生素D的含量普通用国际单位(IU)表示,1国际单位的维生素D相当于0.025μg的维生素D。

几种富含维生素D的食品中维生素D的含量(IU/100g)如下:奶油50,蛋黄150一400,鱼40一150,肝10一70,鱼肝油800一30000。

维生素D的测定办法有、紫外分光光度法、气相色谱法、液相色谱法及薄层层析法等。

其中比色法敏捷度较高,但操作非常复杂、费时。

虽然操作容易,精密度也高,但敏捷度低,不能用于含微量维生素D的样品。

液相色谱法的敏捷度比比色法高20倍以上,且操作简便,精度高,分析速度快,是目前分析维生素D的最好办法。

这里主要介绍三氯化锑比色法。

在三氯甲烷溶液中,维生素D与三氯化锑结合生成一种橙黄色化合物,呈色强度与维生素D的含量成正比。

皂化与提取同维生素A的测定。

假如样品中有维生素A共存,可用以下办法举行分别纯化。

(1)分别柱的制备:取一支具有活塞和砂蕊板的玻璃层析柱。

第一层:加入无水硫酸钠,铺平整。

其次层:将celite540置于碘值瓶中,加入石油醚,振摇,再加入聚乙二醇600,强烈振摇,使其黏合匀称,然后倒入层析柱内。

第三层:加中性氧化铝。

第四层:加入无水硫酸钠。

轻轻地转动层析柱,使其次层的高度保持在12cm左右。

(2)纯化:先用石油醚淋洗分别柱,然后将样品提取液倒入柱内,再用石油醚继续淋洗。

弃去最初收集的滤液,再用容量瓶收集淋洗液至刻度。

将淋洗液移入分液漏斗中,加水洗涤3次(去除残留的聚乙二醇,以免与三氯化锑作用形成混浊物,影响比色)。

维生素e的测定方法

维生素e的测定方法

维生素e的测定方法
维生素E是一种重要的脂溶性维生素,具有抗氧化、抗衰老等作用。

对于维生素E的测定,目前主要有以下方法:
1.高效液相色谱法:该方法通过色谱分离、检测维生素E的吸收峰来确定维生素E的含量。

该方法操作简便、准确度高、灵敏度较好,适用于各种样品的测定。

2.比色法:该方法将维生素E与少量2,2'-二联苯酚在酸性条件下反应,生成具有紫色的吸收峰,根据吸光度测定维生素E的含量。

该方法操作简单、易于推广,但是因为受到其他物质的干扰较大,准确度较低。

3.氧化法:该方法将样品与氧气或过氧化氢反应,将维生素E氧化为各自二烯酸,再通过比色法或荧光法测定各自二烯酸的含量来确定维生素E的含量。

该方法准确度高、灵敏度好,但是操作相对复杂,需要一定的实验技巧。

总之,不同的测定方法适用于不同的样品和实验要求,应根据具体情况选择合适的方法进行测定。

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微乳液相色谱法同时测定4种脂溶性维生素

微乳液相色谱法同时测定4种脂溶性维生素

微乳液相色谱法同时测定4种脂溶性维生素杨建锐;黄丽娜;黄光亮;李宁【摘要】建立了种新的微乳体系,并成功地应用于微乳液相色谱法( MELC)快速分析脂溶性维生素VA、VD2、VD3和VE.通过对影响分离选择性的主要因素进行考察,得到最佳微乳体系组成为98% (v/v)(50 g/L十二烷基硫酸钠(SDS)-10%(质量分数)正丁醇-1.0%(质量分数)正辛烷-84%水(质量分数))-2% (v/v)乙腈.该微乳体系中,表面活性剂类型和浓度、油相正辛烷的含量、有机添加剂乙腈对脂溶性维生素的分离起到了重要的作用.以Venusil ASB C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)为分离柱,流速为0.7 mL/min,检测波长为265 nm,柱温为40℃,VA、VD2VD3和VE在20 min内达到基线分离.4种脂溶性维生素的保留时间和峰面积的相对标准偏差(RSD)(n=5)分别小于2.3%和3.0%;VA、VD2 、VD3和VE的线性范围分别为22.0 ~ 88.0 mg/L、20.2~81.0 mg/L、24.3 ~97.2mg/L和125.0~500.0mg/L,相应的线性相关系数r2分别为0.999 6、0.999 4、0.999 8、0.999 8;检出限(S/N=3)分别为0.37、0.34、0.41和2.12 mg/L.本方法已成功应用于多维元素片(21)中VA与VE的测定,结果令人满意.%A novel system was developed for the rapid determination of fat-soluble vitamins A, D2, D3 and E with microemulsion liquid chromatography (MELC). The effects of operating parameters on the separation selectivity were investigated. The optimized microemulsion system consisted of 98% (v/v) of 50 g/L sodium dodecyl sulfate (SDS)-10% (w/w) n-butanol-1. 0% (w/w) w-octane-84% water (w/w) and 2% (v/v) acetonitrile. The type and content of surfactant, the contentof oil phase and the organic additive (acetonitrile) were found to play important roles in the separation of four fat-soluble vitamins. The fouranalytes were baseline separated within 20 min on a Venusil ASB C18, column (150 mm x4. 6 mm, 5 μm) with a flow rate of 0. 7 mL/min and the detection wavelength of 265 nm at 40 ℃. The relative standard derivations (RSDs, n = 5) of retention times and peak areas of the analytes were less than 2.3% and 3.0%, respectively. The linear ranges of vitamins A, D2, D3 and E were 22. 0 - 88. 0 mg/L, 20.2 -81.0 mg/L, 24. 3-97.2 mg/L and 125.0 -500.0 mg/L, with their correlation coefficients (r2) of 0. 999 6, 0. 999 4, 0. 999 8 and 0. 999 8, respectively. The detection limits (S/N = 3 ) were 0. 37, 0. 34, 0. 41 and 2.12 mg/L, respectively. This method was successfully applied to the determination of commercial Vitamins with Minerals Tablets (21 ) , and the results were satisfactory.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2011(029)010【总页数】5页(P995-999)【关键词】微乳液相色谱;微乳流动相;脂溶性维生素【作者】杨建锐;黄丽娜;黄光亮;李宁【作者单位】广东药学院,广东广州510006;广东药学院,广东广州510006;广东药学院,广东广州510006;广东药学院,广东广州510006【正文语种】中文【中图分类】O658维生素也称维他命,是动物体及人类正常物质代谢和某些特殊生理功能不可缺少的低分子有机化合物,主要参与各种酶的组成[1,2]。

第八章 维生素的测定

第八章 维生素的测定

(3) 浓缩与定容
石油醚提取液→经无水硫酸钠(约5g)(脱 水) →与旋转蒸发器蒸发瓶; 用约l0ml石油醚冲洗分液漏斗及无水硫酸 钠3次,洗液→旋转蒸发器蒸发瓶;
于55℃水浴中减压蒸馏回收石油醚→待瓶 中剩下约2ml石油醚时→取下蒸发瓶,用氮气 冲干→加入2.00ml石油醚定容。
(4) 纸层析
第三节
水溶性维生索的测定
一、水溶性维生素的性质 1. 易溶于水,而不溶于苯、乙醚、氯仿等大多 数有机溶剂; 2. 在酸性介质中很稳定; 3. 在碱性介质中不稳定,易于分解;
4. 易受空气、光、热、酶、金属离子等的影响, 维生素B2 对光,特别是紫外线敏感,易被光 线破坏;维生素C对氧、铜离子敏感,易被氧 化。
将醚液经过无水硫酸钠滤入三角瓶中→用 约25m1乙醚冲洗分液漏斗和硫酸钠两次,洗 液并入三角瓶内→水浴蒸馏,回收乙醚→减 压抽干,立即准确加入一定量三氯甲烷(约 5m1左右),使溶液中维生素A含量在适宜浓度 范围内(3—5ug/m1)。
(2)标准曲线的绘制
以维生素A含量为横坐标,以吸光度为纵坐标 绘制曲线。 准确吸取维生素A标准溶液0,0.1,0.2,0.3,0.4, 0.5mL于6个10mL容量瓶中,用三氯甲烷定容 制备标准系列使用液→制成标准比色系列→调节 光度法零点→将标准比色系列按顺序移到光路前,迅 速加入9mL三氯化锑一三氯甲烷溶液,于6s内测定吸 光度(每支比色杯都在临测前加入显色剂)。 取6个3cm比色杯顺次移入标准系列使用液各1m1, 每个杯中加乙酸酐 l滴,在620nm波长处,以 l0mL三氯甲烷加1滴乙酸酐。
(8)维生素C标准使用液:准确吸取适量标准维 生素C贮备液,于100mL容量瓶中,用10g/L草酸 溶液稀释定容,使1.0mL含0.02mg维生素C。 (9)2,6-二氯靛酚溶液:称取52mg碳酸氢钠, 溶解于200ml沸水中,然后称取50mg2,6一二氯 靛酚,溶解于上述碳酸氢钠溶液中,冷却后, 于250mL容量瓶中,用蒸馏水稀释定容,过滤于 棕色瓶内,贮存冰箱,每周至少标定1次。
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3.2 标准曲线制备 准确取一定量的维生素A标准液于4~5个容量瓶 中,以三氯甲烷配制标准系列。
取相同数量比色管顺次取1mL三氯甲烷和标准系 列使用液1mL,各管加入乙酸酐1滴,制成标准比色系 列。
于620nm波长处,以三氯甲烷调节吸光度至零点, 将其标准比色系列按顺序移入光路前,迅速加入9mL 三氯化锑-三氯甲烷溶液。于6s内测定吸光度。 以吸光度为纵坐标,以维生素A含量为横坐标绘 制标准曲线图。
提取: 洗涤: 浓缩:
水洗
皂化瓶内混合物 分液漏斗1号 振摇,静置,分层
乙醚洗
提 取
醚层
水层 分液漏斗2号
振摇,静置,分层
醚层 分液漏斗1号 醚层 水层 分液漏斗3号 振摇,静置,分层 水层
水洗
分液漏斗1号
振摇,静置,分层
水层
醚层
振摇,静置,分层
KOH溶液洗
净 化
KOH溶液层
醚层
振摇,静置,分层
3.3 样品测定 于一比色管中加入10mL三氯甲烷,加入1滴乙酸 酐为空白液。 另一比色管中加入1mL三氯甲烷,其余比色管中 分别加入1mL样品溶液及1滴乙酸酐。 其余步骤同标准曲线的制备。 4 结果计算
C 100 X V m 1000
(二)高效液相色谱法
1.原理
样品中的维生素A及维生素E经皂化提取处
维生素A的测定பைடு நூலகம்
维生素A类是指含有β-白芷酮环的多烯基结构、并具有视 黄醇生物活性的一大类物质。广义而言包括已经形成的维 生素A和维生素A原。 动物体内具有视黄醇生物活性功能的维生素A类包括视黄 醇、视黄醛、视黄酸等物质,4-氧视黄酸、4-羟视黄酸等 不具有视黄醇生物活性功能。 维生素A分为维生素A1和维生素A2,A1主要存在于海产 鱼中,A2主要存在于淡水鱼中。 在植物中不含已形成的维生素A,在黄、绿、红色植物中 含有类胡萝卜素,其中一部分可在体内转变成维生紊A的 类胡萝卜素称为维生素A原,如α-胡萝卜素、β-l胡萝卜素、 γ-胡萝卜素等。目前已经发现的类胡萝卜素约600种,仅有 约1/10为维生素A原。
脂溶性维生素的测定
脂溶性维生素的理化性质:
溶解性:不溶于水,易溶于脂肪、乙醇、丙酮、氯仿、 苯、乙醚等有机溶剂。
耐酸碱性:VA、VD对酸不稳定,对碱稳定; VE对酸稳定,对碱不稳定。 耐热性:VA、VD、VE耐热性好,能经受煮沸
耐氧化性:VA易被氧化,光、热促进氧化
VE易被氧化,光、热、碱促进氧化
VD性质稳定,不易氧化
水洗
水层
醚层
振摇,静置,分层
水洗
水层
醚层
分液漏斗醚层
乙醚洗涤 无水硫酸钠
浓 缩
水浴蒸馏 减压抽干
氯仿定容(5mL)
3.1.2 研磨法:适用于每克样品维生素A含量大于5~10μg 样品的测定,如肝的分析。(步骤简单,省时,结果准 确。) 研磨:精确称2~5g样品,放入盛有3~5倍样品重量的无 水硫酸钠研钵中,研磨至样品中水分完全被吸收,并均质 化。
3.1样品处理:根据样品性质,可采用皂化法或研磨法。
3.1.1皂化法:适用于维生素A含量不高的样品,可减 少脂溶性物质的干扰,但全部试验过程费时,且易导 致维生素A损失。
皂化:根据样品中维生素A含量的不同,称取0.5~5g
样品于三角瓶中,加入10mL 1:1氢氧化钾及20~40mL
乙醇,于电热板上回流30min至皂化完全为止。
提取:小心地将全部均质化样品移入带盖的三角瓶内,准
确加入50~100mL乙醚。紧压盖子,用力振摇2min,使样 品中维生素A溶于乙醚中。使其自行澄清(大约需1~2h), 或离心澄清(因乙醚易挥发,气温高时应在冷水浴中操作。 装乙醚的试剂瓶也应事先放入冷水浴中) 浓缩:取澄清提取乙醚液2~5mL,放入比色管中,在 70~80℃水浴上抽气蒸干。立即加入1mL三氯甲烷溶解残 渣。

维生素A 的功能: 维持正常视觉 维持上皮的正常生长与分化 促进生长发育 抑癌作用 维持机体正常免疫功能 供给量与来源: 1989年RDA中成人每人每天摄入维生素800ug视黄醇当量。 1992年全国营养调查表明,我国城乡居民视黄醇当量平 均摄入量仅为476ug,其中约2/3来自植物性食物。 维生素A最好的来源是各种动物肝脏、鱼肝油、鱼卵、全 奶、奶油、禽蛋等;维生素A原的良好来源是深色蔬菜和 水果,如冬寒菜、菠菜、首宿、空心莱、莴笋叶、芹菜叶、 胡萝卜、豌豆苗、红心红薯、椒及水果中的芒果、杏子及 柿子等。
(一)三氯化锑比色法
1 原理 维生素A在三氯甲烷中与三氯化锑相互作用, 生成蓝色物质,其颜色深浅与溶液中所含维生 素A的含量成正比。 该蓝色物质不稳定,需在一定时间内(6秒) 用分光光度计于620nm波长处测定其吸光度。 2 仪器
实验室常用设备 分光光度计 回流冷凝装置
3 操作步骤 维生素A极易被光破坏,实验操作应在微弱 光线下进行,或用棕色玻璃仪器。
理后,将其从不可皂化部分提取至有机溶剂中。 用高效液相色谱法C18反相柱将维生素A和维生 素E分离,经紫外检测器检测,并用内标法定量 测定。
2 试剂
无水乙醚、无水乙醇、三氯甲烷等试剂需预先处
理。
维生素A标准溶液、维生素E标准溶液
内标物溶液:10μ g苯并[e]芘 /mL
3 仪器和设备
高压液相色谱仪带紫外分光检测器。
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