酶联免疫法测定蜂蜜中氯霉素残留量(二)

酶联免疫法测定蜂蜜中氯霉素残留量（二）

7.1 提取称取2g试样，精确到0.01g，置于25 mL具塞离心管中，加

入4 mL水和4 mL(4.2)，在液体混匀器上充分混匀2 min，使试样彻低溶解。在振荡器上振荡10 min，以4000r/min离心10 min,精确

吸取上层1 mL于10 mL具塞试管(5.7)中，用氮气吹干仪在50℃吹干。

加入0.5mL缓冲溶液(4.1.8)溶解残渣，供酶标仪测定。此溶液含试样量0.5g，稀释系数为1。 7.2 测定条件以下全部操作应在20℃～24℃室温下举行。 7.2.1 酶标仪测定条件：酶标仪测定波长为450 nm。

7.2.2 洗板条件如下： 7.2.2.1 洗板机洗板条件：采纳条式抽干和注

满，洗涤次数八次，每次注水量为250uL～350uL。 7.2.2.2 入工洗板条件：洗涤次数五次以上，每次注水量为250 uL。 7.2.3 氯霉素试剂盒中全部试剂的温度均应回升至室温(20℃～24℃)后方可用法。标准溶液(4.1.2),氯霉素酶标志物溶液(4.1.3)和氯霉素抗体溶液(4.1.4)等均按1份试剂＋10份缓冲溶液举行稀释与制备。每次测定所用的稀释液均应现配现用。 7.2.4 将测定需用的微孔板备齐并插入微孔架上，记录标准及样品等在微孔架上的位置(模板图)。 7.3 测定测定中吸取不同的试剂和样品溶液时应更换吸头。 7.3.l 分离吸取50uL稀释的酶标志物、氯霉素标准溶液、样品溶液和氯霉素抗体等按模板图位置，依次加入各自的微孔底部，然后，用封口膜密封孔条以防溶液挥发。持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀后，于20℃～24℃避光孵育2h。 7.3.2 将微孔架置于洗板机上，按设定的洗板程序洗板后，将微孔架反扣在吸水纸上并反复拍打。此步骤既要去除微孔中过多的残液，又不能使微孔干燥。 7.3.3 快速加入50uL酶基质和50uL发色剂于微孔底部，然后，持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀后，于20℃～24℃避光孵育30min。 7.3.4 快速加入100uL反应停止液于微孔底部。然后，持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀后，将微孔架置于酶标仪中，在450 nm处测量吸光度(加入反应停止液后应在60 min 内读取吸光度)。 7.4 平行实验按以上步骤，对同一标准、同一样品

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