小鼠染色体
小鼠染色体
二、实验目的Байду номын сангаас
• 学习并掌握小鼠骨髓细胞染色 体的制备方法。 • 观察小鼠染色体的形态特征,统 计细胞的染色体数目。
三、实验材料
• 小白鼠（2n=40）
四、实验器具和药品
• 1. 器具：注射器（ 1ml ， 5ml 各一支）、 托盘、解剖剪、镊子、吸管、离心管、 离心机、载片、滤纸、白纱布小块等。 • 2.药品： 0.15mg/ml 秋水仙素， 1% 柠檬酸三钠，固定液（3份甲醇，1份 冰乙酸，临用时现配），Giemsa染液， 2.2%柠檬酸钠，0.01M磷酸缓冲液 （PBS）pH6.8。
六、实验步骤
5. 固定（第2次）：沿离心管壁慢慢加入新配制的固定 液6ml，用吸管轻轻吹打均匀，室温下固定5min， 1000rpm/min 3min，弃去上清；如此反复固定两次 （共固定3次）。 6. 根据管底细胞量的多少，加入新配制 的固定液0.3~ 0.8ml，用吸管打均匀， 使其形成细胞悬液。
0.15mg/ml 秋水仙素：取秋水仙素15mg溶于100ml 0.85%生理盐水
中，混匀；
75%酒精：取375ml 95%乙醇，加入125ml馏蒸水；
六、实验步骤
• 1、处理：用1.5mg/kg秋水仙素腹腔 注射处理小鼠（注射量为0.1ml/10g 体重）。即用以上配制的秋水仙溶 液按每10g体重注射0.1ml。注射后324小时，可以取骨髓。
六、实验步骤
7. 滴片：将预冷的载玻片（0℃冰浴），水 平或倾斜45° 角放置，用吸管吸取细胞悬 液，从约0.5 -1m高处滴 1~2滴到片子上， 用口将其吹干，静置使其干燥。 8. 染色：将干燥的玻片放入2ml吉姆萨原液 加入40ml磷酸缓冲液（pH6.8）配成的染液 中染色20min，用磷酸缓冲液（pH6.8）冲 洗，晾干后镜检。
实验三、小鼠骨髓染色体制备与观察PPT课件
低渗液(5ml)冲洗至离心管内
收集骨髓细胞
注意：剪去少量骨质，避免骨髓细胞丢失；擦净血迹和肌 肉细胞以免影响观察；用0.075 mol/L KCl 收集足量细胞，反 复冲洗直到股骨发白。
颈椎脱臼法处死小鼠
3. 低渗：用吸管吹打骨髓细胞使其分散，加入预温
37℃的低渗液至8ml,将离心管至37℃水浴锅中， 保温至少30 min后取出，使细胞充分吸水膨胀。
5. 固定、制细胞悬液：加固定液5ml 吹打混匀 固定15min 离心1500r/min，5min 弃上清，加固定液 0.2~0.4ml 吹打成细胞悬液，准备制片使用。
制备细胞悬液时，根据具体情况加固定液，以悬液呈现 乳白色为宜。
6. 滴片：冰片倾斜30°, 细胞悬液距离玻片30cm高，在不重叠
位置滴1～2滴，用口吹散细胞，过火焰干燥。 注意：载玻片预冷、高度、吹散、不可使载玻片烫手。
用吸管吹打骨髓细胞使其分散加入预温37的低渗液至8ml将离心管至37水浴锅中保温至少30min后取出使细胞充分吸水膨胀
实验三、小鼠骨髓染色体制备与观察
一、实验目的
• 初步掌握（小鼠）骨髓细胞染色体标本的制备原理 和方法
• 巩固显微镜的操作技术 • 了解小鼠的染色体形态特征
二、实验原理
染色体是组成细胞核的基本物质，是基因的载体。 染色体异常也称染色体发育不全。目前已确认染色 体病综合征100余种，智力低下和生长发育迟滞是 染色体病的共同特征。
预固定：。
高距离滴片：使细胞膜易于破裂，获得中期染色 体标本，在显微镜下观察染色体的结构和数量。
三、实验器材和试剂
• 1.器材 蜡盘、手术剪、小镊子、平皿、注射
器、10ml离心管、吸管、量筒、预冷载玻片、试 管架、离心机、恒温水浴锅、显微镜、乙醚酒精 、擦镜纸
小鼠染色体染色观察
题目：小鼠细胞染色体染色观察一．O bjectives:1.Learn the method of preparation of mouse chromosome frommarrow.学习制备从骨髓中制备小鼠染色体的方法。
2.Understand the morphology and amount of mouse mitotic.了解小鼠有丝分裂期细胞染色体的形态和数量。
二．实验原理1.秋水仙碱，一种生物碱，因最初从百合科植物秋水仙中提取出来，故名，也称秋水仙素。
纯秋水仙碱呈黄色针状结晶，熔点157℃。
易溶于水、乙醇和氯仿。
味苦，有毒。
秋水仙碱能抑制有丝分裂，破坏纺锤体，使染色体停滞在分裂中期。
这种由秋水仙碱引起的不正常分裂，称为秋水仙碱有丝分裂。
在这样的有丝分裂中，染色体虽然纵裂，但细胞不分裂，不能形成两个子细胞，因而使染色体加倍。
2.现今微丝标记方法分为在细胞中标记微丝和活体细胞中标记微丝。
固定细胞中的微丝主要是用带荧光探针的抗体或鬼笔环肽标记，需要对样品进行化学固定和膜的通透。
活体标记常采用荧光类似物标记的方法和GFP标记方法。
三．实验材料及设备1.实验材料：a)秋水仙素稀释液b)小鼠一只c)75mM KCl低渗溶液d)固定液e)Giemas染液2.实验设备：a)普通光学显微镜b)载玻片若干，注射器。
c)酒精灯d)离心管若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等四．实验方法及步骤1.提前3-4h向小鼠腹腔中注射秋水仙素，然后用引颈法处死小鼠。
2.完整取出小鼠股骨（胫骨），取出骨骼表面肌肉和其他结缔组织。
3.将胫骨两端剪开，用注射器吸取适量75mM KCI将骨髓冲洗到离心管中。
4.低渗处理：用约6ml的75mM KCI在37℃下低渗骨髓细胞20min。
5.预固定：加入1-2ml新配制的固定液，用吸管混合均匀，1000r/min离心8分钟6.固定：吸去上清液，沿离心管壁缓缓加入6ml固定液，立即用吸管吹打成细胞悬液，在室温下静置固定15min。
小鼠骨髓染色体制备及观察
小鼠骨髓染色体制备及观察许多化学毒物具有遗传毒性基因突变：碱基置换和移码突变。
染色体畸变（structural chromosome aberration)：是指由于染色体或染色单体断裂，造成染色体或染色单体缺失或引起各种重排，从而出现染色体结构异常颜色体数目异常：整倍性和非整倍性改变。
染色体损伤的类型：☐染色体数目的改变①非整倍体：亚二倍体或超二倍体。
②整倍性改变：染色体成倍增加。
☐染色体结构的改变1.断裂和裂隙：2.微小体；较断片小而呈圆形。
3.有着丝点环：带有着丝点部分，两端形成环状结构并伴有一双无着丝点断片。
4.无着丝点环：成环状结构。
5.插入/重复8 非特定性型变化：如粉碎化、着丝点细长化、粘着等整倍性畸变非整倍性畸变如何评价化合物的遗传毒性？鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）：是最常用的检查基因突变的方法。
检测受试物诱发鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株(his-)回复突变成野生型(his+)的能力☐评价染色体损伤的试验方法包括：常用啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE) 微核试验 体外培养细胞或者体内染色体畸变试验2、实验原理☐有丝分裂：真核细胞的染色质凝集成染色体，复制的姐妹染色单体在纺锤丝的牵拉下分向细胞的两极，从而产生两个染色体数目和遗传性相同的子细胞的一种细胞分裂的类型。
☐细胞周期：从一次有丝分裂完成时开始，到下一次有丝分裂结束时为止，成为一个细胞周期。
G1：从有丝分裂结束到DNA 复制之前；S: DNA 合成；G2：DNA 复制结束到有丝分裂开始；M ：有丝分裂期✓增殖群细胞，细胞始终保持分裂能力，持续进入分裂循环；✓不再增殖细胞，比如神经细胞；✓暂不增殖细胞，比如肝脏细胞。
端着丝粒染色体。
实验十四小鼠骨髓细胞染色体制片
小鼠骨髓细胞染色体 制片
实验目的
• 掌握制作动物骨髓细胞染色体标本的方 法，练习染色体制片技术。
• 了解小鼠染色体的形态和数目。
实验原理
• 染色体（chromosome）在间期细胞中见 不到，它只在分裂细胞中出现。因此从 理论上讲，任何处于分裂状态的细胞都 可以作为染色体标本制备的材料。染色 体在分裂中期是最典型的。用适量的秋 水仙素溶液注入动物体内，可抑制分裂 细胞纺锤体的形成，使分裂终止在中期， 积累大量的中期细胞，再通过常规的制 片方法，可获得动物染色体标本。
• 收集细胞：将股骨放入培养皿中（加入生理盐 水）用止血钳夹碎，吸取上清夜，移入离心管， 1500rpm离心8分钟，留沉淀。
• 低渗处理：用预热氯化钾溶液6毫升，轻轻混 匀，37°C保温20分钟，加入新鲜固定液1毫升， 预固定。
实验方法
• 沉淀加5毫升固定液1500rpm离心8分钟，留沉 淀。（反复2次）
实验结果
实验报告与思考题
• 根据实验过程分析实验结果，分析原因， 总结经验。
• 制备染色体标本时，为什么用秋水仙素， 作用是什么？
• 制片过程中，为什么要进行固定？
实验材料与试剂
• 材料：小白鼠 • 试剂：秋水仙素，氯化钠低渗液，甲醇-
冰乙酸（固定液）生理盐水，姬姆萨染 色液。
实验方法
• 选择体重18-20克的健康小白鼠，在实验前3-4 小时注射秋水仙素（2ug/g体重）。
• 用颈椎脱臼法处死小白鼠，从背部剪开肢体皮 肤和肌肉，取出完整的股骨，用生理盐水洗净。
• 制备细胞悬液：沉淀加入0.5毫升新鲜固定液， 混匀制成细胞悬液。
• 滴片：用吸管吸取少量悬液，在离载玻片30cm 高度滴2滴于载玻片上，沿斜面吹散，再酒精 灯上微烤，晾干。
简述小鼠骨髓染色体制备流程及注意形象
简述小鼠骨髓染色体制备流程及注意形象下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!小鼠骨髓染色体制备流程如下：1. 选取实验动物：选择健康、生长状况良好、年龄适宜的小鼠作为实验对象。
实验小鼠骨髓染色体制备和观察
8.小鼠染色体观察： 低倍镜、高倍镜下寻找染色体分散的中
期分裂相.
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小鼠骨髓染色体 10 ×10
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小鼠骨髓染色体 10 ×40
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➢ 数目观察：小鼠2倍体细胞染色
体，数目2n=40条。其中19对为常染 色体，一对为性染色体，染色体的核 型分为4组。雄性 XY, 雌性XX,Y染 色体最小。
➢形态特征观察：端着丝粒染色体
“U”“V”。
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五、注意事项
1．掌握好秋水仙素的浓度和处理时间； 2．离心前需要配平； 3. 小鼠骨髓要冲洗干净，以收集足够的骨髓细胞； 3．低渗处理是实验成败的关键，注意低渗时间； 4．固定液要现配现用，固定要充分； 5．载玻片要洁净并预冷，滴片要有一定的高度； 6. 细胞悬液不能太稀，要呈乳白色； 7. 烤片时温度不能太高。 8. 冲洗染液时水流要缓慢，以免细胞流失过多。
放出来。
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秋水仙素处理：秋水仙素溶液可抑制纺锤体的形 成，使正在分裂的骨髓细胞停止在细胞分裂中期， 积累大量中期分裂相细胞。
低渗作用: 使细胞充分膨胀，减少染色体间的相互 缠绕和重叠。
预固定：终止低渗作用，使细胞离心时不易破裂 ，固定维持细胞形态结构。
高距离滴片：使细胞膜易于破裂，获得中期染色 体标本，在显微镜下观察染色体的结构和数量。
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三、实验器材和试剂
• 1.器材 蜡盘、手术剪、小镊子、平皿、注射
简述小鼠骨髓染色体制备流程及注意形象
简述小鼠骨髓染色体制备流程及注意形象下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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7.滴片：将预冷的载玻片（0℃冰浴），水平或倾斜45°角放置，用吸管吸取细胞悬液，从约0.5 -1m高处滴1~2滴到片子上，用口将其吹干，静置使其干燥。
8.染色：将干燥的玻片放入2ml吉姆萨原液加入40ml磷酸缓冲液（pH6.8）配成的染液中染色20min，用磷酸缓冲液（pH6.8）冲洗高倍镜和油镜观察染色体形态，统计染色体数目。可见小鼠的40条染色体呈紫红色。
三、实验小结
四、
（一）思考题
1、统计小鼠2N染色体数目，仔细观察其形态特征。
答：小鼠体内2n染色体数目为40条，形态上多为中部着丝粒染色体。
2.低渗液起什么作用，在使用过程中应注意什么问题？
答：低渗液的作用是使细胞充分吸水膨胀而不破裂，从而一直保持在胀得很大而又没有破裂的状态。进而使得细胞内的中期染色体就能够足够分散开来，从而使得经固定等步骤后仍然处于膨胀状态。之后经过滴片时的摔打和骤降温过程，使细胞及其核很快破碎，染色体进一步分散开。在滴片的时候就能够获得一团仅属于一个细胞的分散的中期染色体的片子，易于在显微镜下观察和对染色体进行计数。使用时应该十分注意适当的低渗时间和温度，以及低渗液的浓度。
（二）注意事项
1、处死小鼠的时候要果断。这次实验采用断颈法杀死小鼠，按住头部后要用力拉。出于人道主义和对实验对象的尊重，我们都应该让小鼠在最少的折磨中死去。
2、取骨后要清理干净。
3、注射低渗液的时候要注意看，如果液体从针头入口出来，说明头没有剪开，应该再剪一次。
4、低渗液处理时间可以长一点。
5、第二次加固定液是1ml而不是书上写的5ml，实验结果，加1ml和加5ml区别不大，但从节约的角度，选取1ml。
三、实验方法步骤
1、处理：用1.5mg/kg秋水仙素腹腔注射处理小鼠（注射量为0.1ml/10g体重）。即用以上配制的秋水仙溶液按每10g体重注射0.1ml。注射后24小时，可以取骨髓。
处死：断颈法处死小鼠。剪刀剪开腿部的皮肤，用镊子夹住小鼠的股骨，剪去股骨周围的肌肉，将小鼠的两股骨取出，擦净股骨上的肌肉。去股骨的髋面，将吸有2.2%柠檬酸三钠溶液的小注射器的针头插入，反复几次吹出骨髓细胞，反复吹打直至股骨呈白色，制成细胞悬液。
生科院实验楼遗传学实验室
一、实验预习
1、实验目的
（1）学习并掌握小鼠骨髓细胞染色体的制备方法。
（2）观察小鼠染色体的形态特征,统计细胞的染色体数目。
2、实验设备及材料
（1）器具：注射器（1ml，5ml各一支）、托盘、解剖剪、镊子、吸管、离心管、离心机、载片、滤纸、白纱布小块等。
（2）药品：0.15mg/ml秋水仙素，1%柠檬酸三钠，固定液（3份甲醇，1份冰乙酸，临用时现配），Giemsa染液，2.2%柠檬酸钠，0.01M磷酸缓冲液（PBS）pH6.8。
低渗：将细胞悬液在1000rpm/min离心5min，弃除上清液，留0.5ml摇匀。向细胞液中再加入1%的柠檬酸三钠溶液5ml用吸管轻吹打均匀，在室温低渗30min。低渗期间，配制固定液，即甲醇：冰醋酸为3:1（v/v)，置4℃冰箱中备用。
4.预固定(1次)：低渗处理后的细胞悬液离心5分钟，留1ml原液，摇匀。加入新配制的固定液至6ml，吹打均匀，固定5分钟，再在1000rpm/min离心3-5min，去掉上清液。固定（2次）：沿离心管壁慢慢加入新配制的固定液6ml，用吸管轻轻吹打均匀，室温下固定5min，1000rpm/min 3min，弃去上清；如此反复固定两次（共固定3次）。
（3）购买小鼠（体重30克最佳；尽量雌雄各半）
（4）溶液配制：
2.2%柠檬酸三钠：称11g柠檬酸三钠到500ml蒸馏水中，充分溶解；
1%柠檬酸三钠：取5g柠檬酸三钠溶解到500ml蒸馏水中，充分溶解；
PBS（pH6.8): A液：取Na2HPO4 12g溶于500ml蒸水中，充分溶解；
B液：取KH2PO4 4.55g溶于500ml蒸水中，充分溶解；使用时A、B液等体积混合，即为pH6.8的PBS；
0.15mg/ml秋水仙素：取秋水仙素15mg溶于100ml 0.85%生理盐水中，混匀；
75%酒精：取375ml 95%乙醇，加入125ml馏蒸水；
二、实验原理
骨髓细胞具有高度的分裂增殖能力。因此可以直接得到中期细胞而不必象血淋巴细胞或组织那样要经过体外培养。经秋水仙素处理后，分裂增殖中的骨髓细胞由于纺缍体的形成受到抑制，染色体不能正常趋向两极而使之停留于中期，同时染色体缩短，轮廓清晰，把收获的细胞进行低渗，固定处理，使细胞处于膨胀状态，再将细胞悬液滴在载片上，使细胞破裂，染色体散开，染色后即可观察到染色体。
本科学生实验报告
姓名＿许丽珍104120236＿＿学院＿生命科学学院＿＿＿
专业＿应用生物教育技术＿＿＿班级＿10级A班＿＿
实验课程名称＿遗传学实验＿＿＿＿＿＿＿＿＿
指导教师及职称郭锡汉＿＿＿＿＿
开课时间2012至＿2013学年＿二＿学期
云南师范大学教务处编印
实验名称：小鼠骨髓制备与观察细胞染色体
实验时间：21021年11月9号
6、滴片要高。
7、找到好的视野后要记住它的位置，方便显微摄像。
指导老师评语及得分：
签名：年月日