全血DNA提取步骤

从全血中抽提基因组DNA的方法

1、取全血700µL离心，5000rpm，5min，弃去上清液。

2、沉淀物用1mL的红细胞裂解液洗涤3次，5000rpm，5min，弃去上清液，倒干。

3、加入450µL细胞裂解液和6µL蛋白酶K（20mg/mL），55℃～66℃水浴4小时。

4、用等体积的酚、氯仿、异戊醇（25︰24︰1）抽提2次，12000rpm，5min。

5、用2倍体积冰预冷的无水乙醇沉淀（无水乙醇），有絮状沉淀后置于―20℃，沉淀30min。

6、沉淀结束后，12000rpm，5min，弃上清液。

7、用800µlL70%的乙醇洗涤沉淀，12000rpm，3min。

8、弃上清液，干燥。

9、加入50µL 1×TE缓冲液溶解，―20℃保存备用。

附：DNA提取相关试剂配制

1、红细胞裂解液（PH 7.4）

配制量：1L

配制方法：（1）、称量NH4CL 0.802g、NaHCO3 0.84g、Na2EDTA·2H2O

37.22g，置于1L烧杯中。

（2）、向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅

拌溶解。

（3）、加去离子水将溶液定容至1L后，高压灭菌。

（4）、室温保存。

2、细胞裂解液（PH 8.0）

配制量：500Ml

配制方法：（1）、称量NaCL 2.92g、SDS 5g、Tris 0.61g，置于

1L烧杯中。

（2）、向烧杯中加入约300ml的去离子水，搅拌溶解，

在溶解过程中用1mL移液器加入10mL的

TriTon-100。

（3）、溶解后加入20mg/mL的蛋白酶K 3µL.

（4）、加去离子水将溶液定容至500mL后，高压灭菌。

（5）、室温保存。