实验三、MS培养基的配制

实验三、MS培养基的配制

一、目的要求

使学生掌握MS培养基配制、灭菌的基本程序。

二、材料与用具

配制MS培养基所需要的母液、药品、生长调节物质、天平、烧杯、量筒、蒸馏水、95%的酒精或0.1mol/L的NaOH、0.1mol/LHCL、三角瓶、培养瓶。

三、实验内容每组配制MS + 6-BA 1.0 mg/L 培养基1升

四、方法步骤

1. 准备工作：准备所需的母液、烧杯、量筒、移液管、玻棒、三角瓶（或其它容器）、橡皮筋、盖膜纸等物品。

2. 配制：

①称取琼脂（6~10g/L）加入总量80%的水中，置小铝锅中加热，边加热边搅拌，防止糊底。旺火煮开，再用文火加热，直至琼脂全部融化即清澈见底为度。

②称取蔗糖（30g/L），待琼脂完全溶解后加入。

③按需要量用移液管分别吸取各种母液及生长物质，在蔗糖后加入。（大量元素母液50ml、微量元素母液1ml、铁盐母液10ml、有机物母液10ml。

④按配方移取6-BA母液）

⑤定容至设定量

⑥调PH值为5.8（用0.1N NaOH或0.1N HCl）

3. 分装与封口

配好的培养基要趁热分装，100ml的容器每瓶约装入30~40ml培养基，（占培养容器的1/4~1/3）。分装时不要把培养基弄到管壁上，以免日后污染。

分装完成后及时用聚丙烯薄膜封口，并做好标记，写上培养基种类。

4、高压灭菌

（1）打开锅盖，加水至水位线；

（2）将已装好培养基的三角瓶装入锅内，然后盖上锅盖，对角旋紧螺丝（不能漏气）；

（3）接通电源加热，加压前打开放气阀，放尽锅内的冷空气；

（4）加压至压力达到1.1~1.4Mpa（121℃以上）保持20分钟后，停止加热；（5）切断电源使压力锅内的压力降至“0”时，打开放气阀排除剩余蒸汽，然后打开锅盖，取出培养基，放于平台上冷凝，待用。

四、作业

(1) 培养基包括哪些成分?各有什么作用?

(2) 简要说明MS培养基的基本组成?

(3) 配制培养基时，为什么要先配母液?如何配制母液?