水微生物检测.

检测意义。
学会对所Baidu Nhomakorabea测的水样作综合分析。
水微生物检测的意义
水体的微生物污染问题日趋严重。
在各种水体，特别是污染水体中存在有大量的有机物质，
适于各种微生物的生长。
水体中微生物污染的来源：土壤，以及人类、动物的排
泄物污染。
水体中少数致病微生物（主要来自人或动物的粪便污染）
可导致某些肠道传染病传播。
水微生物检测可用于评价水质情况，预报水
质的污染趋势，以保证水质的卫生安全。
在实际工作中，对水质卫生质量的评价和控制，
是无法对水体中各种可能存在的致病微生物一一
进行检测。
一般选择有代表性的一种或一类微生物作为指示
菌，通过对指示菌的检测，来了解水体是否受到
过的微生物污染，是否有肠道病原微生物存在的
可能。
水微生物的检测指标
菌落总数(aerobic bacterial count)
是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h
培养后，所生长的细菌菌落的总数。
检测意义：作为一般性污染的指标，即评价被检
样品的微生物污染程度和安全性。水样菌落总数 越多，说明水被微生物污染程度越严重，病原微 生物存在的可能性越大，但不能说明污染的来源。
活饮用水，国家标准规定每毫升不得超过100个，因此可以
直接吸取1毫升到平板进行培养）
各稀释管、相应平皿做好标记。包括：水样名称、
水微生物检测
南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心
教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生 实验课时：8学时 课程类型：专业实验课 课程要求：必修 每组人数：2人
实验目的与要求
掌握水样采集规则及注意事项。 熟悉常用水卫生细菌学指标。
熟悉菌落总数、大肠菌群的测定方法及
cfu：colony forming units
当检样的菌落数为l~100时，按实有数报告；大于100
时，采用二位有效数字报告。
国家标准（GB5749-2006）规定生活饮用水菌
落总数每毫升不得超过100个。
（二）水源水
[器材与试剂]
无菌1ml吸管6支/组，无菌10ml吸管1支/组。 无菌平皿9个/组，营养琼脂。 90ml灭菌盐水1瓶（内置适量玻璃珠），9ml
由表2可判定水质被污染的程度。
表2 一般水源水中菌落总数与水清洁程度的关系
最清洁 水 不太清洁 水 极不清洁 水
水的类别
清洁水
不清洁水
菌落总数 10~100 cfu／m1
100~ 1000
1000~ 10000
10000~ 100000
＞100000
[注意事项]
菌落总数测定中，应选择合适的稀释度进行。（生
注意事项
严格无菌操作。
做好标记：采得水样后应立即记录水样名称、
地点、时间等项目。
从速送检。水样从采集到检验不应超过2h，在
0～4℃下保存不应超过24h。
二、菌落总数的测定
— 平板菌落计数法
（一）生活饮用水
[器材与试剂]
无菌1ml吸管1支/组，无菌平皿3个/组，
营养琼脂。
[方法]
灭菌盐水管3支。
[方法]
稀释水样：
无菌吸10ml混匀水样注入90ml灭菌水瓶中,
混匀成1:10水样。
取1:10水样1ml注入9ml灭菌试管中混匀成
1:100水样。同法稀释成1:1000, 1:10000
水样。
[方法]
倾注培养：
用1ml无菌吸管吸取2~3个适当浓度的稀释液
表1 稀释度选择及菌落总数报告方式
不同稀释度的平均菌 例 落数 次 10-1 10-2 10-3
1 2 3 4 5 6 7 8 1365 2760 2890 150 多不可计 27 多不可计 0 164 295 271 30 4650 1l 305 0 20 46 60 8 513 5 12 0
两稀释 度菌落 总数之 比
水样摇匀20~25次，使细菌分散。 倾注培养：无菌吸取1ml水样分别置于2个空
平皿，另一个作空白对照。再倾注15ml琼脂 （约45℃）于平皿中旋转，混匀待琼脂凝固
后倒置37℃24h。
菌落计数：用肉眼或放大镜检查，计数平皿
内菌落数目。
[结果分析与报告]
计算平均菌落数： 报告方式：菌落总数(cfu/ml)。
水样采集；
菌落总数的测定； 总大肠菌群的测定。
一、水样采集
采样原则
所采集的样品具有代表性。 采样容器：选择硼硅玻璃瓶和聚乙烯塑料瓶。
不能是新的污染源；不吸收或吸附某些待测组分；
不与待测组分发生反应。保证从采样到分析期间， 样品各组分的浓度不发生改变。
必须按一般无菌操作的基本要求采集，并保证
水质微生物的检测指标
总大肠菌群(coliform bacteria)
是指一群需氧及兼性厌氧的，37℃生长时能使
乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽 胞杆菌。
检测意义：作为粪便污染的指标。水样总大肠
菌群数的含量，表明水被粪便污染的程度，而 且间接地表明有肠道致病菌存在的可能。
实验内容
— 1.6 2.2 2 — — — —
菌落总数 (cfu／ m1)
16400 37750 27100 1 500 513000 270 30500 <1×10
报告方式 (cfu／m1)
16000或1.6×104 38000或3.8×104 27000或2.7×104 1500或1.5×103 510000或5.1×105 270或2.7×102 31000或3.1×104 <10
在运送、贮存过程中不受污染。
自来水水样：先将自来水龙头用火焰烧灼
3min灭菌，再开放水龙头使水流5 min（经常用水 的水龙头放水1～3min）后，采集水样于无菌锥形 瓶，约占瓶容量80%，以便摇匀水样。
水源水水样：选有代表性的地点及可疑地方，
再从水中取出。
一般距水面下10～15cm采样。采样后，将瓶塞盖好，
1ml,分别注入无菌平皿中，每个稀释度应同时 做2个平皿，另取一平皿作空白对照。再做倾
注培养(方法同饮用水)。
菌落计数：方法同饮用水。
菌落总数测定
[结果分析与报告]
计算不同稀释度的平均菌落数：
稀释度的选择和菌落总数报告方式：
首先选择平均菌落在30～300之间者进行计
算。
计算方法和报告方式如表1所示。