实验室DNA提取方法(盐酸胍最终版)

实验室DNA提取方法

试剂准备：

1.红细胞裂解液：

NH4CL 8.26g

Na2EDTA 37mg

KHCO3 1.00g

去离子水至1L

过0.22um滤膜

2.SDS 1X TE（PH 8.0）

SDS: 10g ①PH 8.0 10mM Tris-CL 1.211g/1L水去离子水：至100ml ②PH 8.0 1mM EDTA 0.5M EDTA

2ml（0.326g）

把②加到①即可

3.盐酸胍

盐酸胍72g

1M Tris-HCL 10ml（1.21g）

去离子水至100ml

PH 8.0

4.蛋白酶K（每瓶100mg）

每瓶加去离子水10ml，终浓度为10mg/ml

5.无水乙醇，70%乙醇

DNA提取Protocol：

1、准备工作：准备三个试管架，其中一个放血样，其余两个标记待用，打开水浴箱，70℃；

2、血样拿出来溶解；

3、记下血样的号码到册子上；

4、血样溶化后，将血样转移到10ml试管中；

5、加RBC裂解液（10ml试管）至管口，封口，弹开沉淀（振荡）；（通常加两倍血样体积的

裂解液）；

或者：

1. 1. 5ml血液（EDTA抗凝），离心2500rpm，10min；

2. 弃上清，加RBC裂解液（10ml试管）至管口，封口，弹开沉淀；

6、室温放置 10min后离心，3000rpm，10min （接着做第二份）

7、弃上清液，加RBC裂解液（10ml试管）至管口，封口，弹开沉淀（剧烈振荡）；

8、室温放置 10min后离心，3000rpm，10min（可以适时放置5-7分钟）

9、弃上清液，加双蒸水 800ul，弹开管底沉淀（涡旋进行）；

10、依次加：蛋白酶K 60ul；SDS 300 ul（涡旋下）；盐酸胍 300 ul；

11、放入70℃水浴中1小时，前15min要充分振荡三次（即每隔五分钟振荡一次，涡旋）；

12、水浴过程中准备两份的EP管并标号；

13、从水浴中拿出试管，冷却，离心3500rpm，3min；

14、将上清液移至 1.5ml离心管中，离心13000rpm，10min

15、取上清液放置于10ml试管中，加2.5倍预冷的（-20度）无水乙醇（约3ml），振荡，

可见 DNA沉淀；

16、用吸管吸出DNA沉淀放置于1.5ml离心管中；

17、加预冷的（-20度）70%乙醇1.6ml左右，洗两次（第一次加950 ul，第二次加650 ul），

离心13000rpm，30s；

18、室温下晾干；

19、晾干后用适量容积的TE溶解（约300ul）；