酵母基因组DNA提取试剂盒使用说明
基因组DNA提取试剂盒 说明书
基因组DNA 提取试剂盒使用说明书此说明书仅适用于此说明书仅适用于基因组基因组DNA 提取试剂盒提取试剂盒，，使用前请务必仔细阅读说明书有关内容使用前请务必仔细阅读说明书有关内容，，若有任何疑问若有任何疑问，，欢迎致电厦门欢迎致电厦门致致善生物科技有限公司生物科技有限公司（（4006618810*************）进行咨询进行咨询，，您也可以登录我们公司的网站您也可以登录我们公司的网站（（ ）了解相关信息或者通过E-mail ( ****************) 与我们进行沟通与我们进行沟通。
一 产品简介基因组DNA 提取试剂盒采用本公司自行研制的磁珠，用于从抗凝全血、新鲜或冻存组织、培养细胞、石蜡包埋组织、唾液、培养细菌等一系列不同样品中分离、纯化高质量的基因组DNA。
我们根据磁珠的独特分离作用，提供了一个极其简便的操作程序：样品裂解、磁珠吸附、洗涤以及洗脱。
在最适的试剂及操作条件下，可获得高质量DNA。
该方法具有简便、快捷、高效等特点，整个提取过程无须使用苯酚、氯仿等有机溶剂。
品名规格 货号 基因组DNA 提取试剂盒100T 4hk001裂解液DL 120ml ×2 磁粒 40ml 洗涤液 50ml ×5 洗脱液 45ml 缓冲液HTL 20ml ×1 二硫苏糖醇（DTT ） 10管，0.18g/管 说明书 1份储存条件储存条件：：本试剂盒所有试剂（除DTT 外）均可以室温保存,应避免阳光直射。
当室温低于15℃时，裂解液中可能有结晶析出，38℃水浴加热几分钟，恢复澄清后即可使用，提取效率不受影响。
DTT 需要于冰箱4℃保存。
本试剂盒有效期为12个月， 请于有效期内使用。
安全信息：试剂中含刺激性化合物，操作时应小心，避免沾染皮肤，眼睛和衣服，若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
三 使用者自配试剂DTT 溶液使用浓度为1mol/L 。
酵母菌鉴定试剂盒(比色法)说明书
1.A 2KG 2-酮基葡萄糖酸钾
含量 (mg/杯)
0.70 0.014 0.66 0.64 0.64 0.70 0.66 2.34 0.70 0.66 1.09
培养基
API C 培养基 7ml
(NH4)2SO4 KH2PO4 K2HPO4 Na2HPO4 NaCl
5.0g 0.31g 0.45g 0.92g 0.1g
y 盖上试条的盖子。 y 29℃±2℃需氧培养 24-48 小时。 注意：有些通气式培养箱会挥发掉试验杯内所有的 菌悬液，遇此情况，将鉴定试条放在一个盛有少量 水的密封盒中，形成潮湿环境以避免干燥。
试条判读 y 使用 ATB ExpressionTM 仪或 miniAPI 仪自动判读：
− 检查试剂条中间部分是否干净，以保证读数 器可以 识别试条的代码。
该生化反应谱是经沙保弱培养基上分离到的菌株孵育４８小时后自动读取结果。按照当地相应的规定进行质 量控制是使用者的责任。
[检验方法的局限性] • ID 32 C 试条只能用于对含在该数据库以内的酵
母菌(菌名列表见本说明书的真菌鉴定表)进行自 动鉴定，超出其范围的细菌本试剂条不能鉴定。 • 此方法只能用于单个细菌的纯培养物的鉴定。
REF 32200
酵母菌鉴定试剂盒（比色法）说明书
IVD
[产品名称] 通用名称：酵母菌鉴定试剂盒（比色法） 英文名称：ID 32 C
[包装规格] 25 测试/盒
[预期用途] 该产品用于可导致阴道炎、口腔炎、败血症等的酵母 菌的鉴定，临床常见样本来源有泌尿生殖道标本、呼 吸道标本、血等。该系统能鉴定的真菌范围见使用说 明书后的真菌鉴定表。
接种试条 y 自动接种：
− 分别将鉴定试条、已接种好的 API C 安瓿和 Tip 头放在 ATB 接种器的架子上。
试剂盒DNA提取详细操作步骤
一、试剂盒打开后需要准备的工作1、ProteinaseK（蛋白酶K）的溶解①取4.5ml双蒸水加入蛋白酶K粉中使其充分溶解②将溶解好的蛋白酶K溶液分装进小离心管，每管100u l〜200ul③将分装好的ProteinaseK放入-20°C冰箱中保存，使用期限为12个月2、组织抑制剂（InhibitorRemovalbfer）的调配加入20ml无水乙醇（absoluteethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩3、洗液（washbuffer）的调配加入80ml无水乙醇（absoluteethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩二、组织DNA提取（试剂盒）1、组织样品处理与消化①将采集来的样品剪碎（WO.lcm）洗净保存液。
②加入组织破解液Tissue-lysis200ul蛋白酶K40ul然后放入55C水浴锅内3个小时使其充分消化。
2、DNA提取①在消化好的组织样品中加入结合液bindingbuffer200ul然后放入70°水浴锅中10分钟。
②再加异丙醇lOOul混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g—分钟。
③倒掉底液，加500ul组织抑制剂InhibitorRemoval然后离心倒掉底液④加洗液washingbuffer500ul离心（洗液加两次）⑤在70C预热ElutionBuffer，然后将洗好的柱体下部分丢掉，换新的离心管加入ElutionBuffer200ul溶解10分钟离心保留底液放-20C保存。
三、细胞DNA的提取（试剂盒）1、组织样品处理与消化①将带有培养基的样品用PBS清洗干净8000rpm/1min离心，倒掉上清②加PBS200ul振荡摇匀使之样品成为单个细胞的悬浊液③加200ulBindingBuffer，40ul蛋白酶K混合均匀放入70C水浴锅内消化10分钟。
2、DNA提取①加异丙醇lOOul混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g—分钟。
酵母阳性克隆快速检测试剂盒
酵母阳性克隆快速鉴定试剂盒使用说明书产品编号：SK2420保存条件：-20℃储存，有效期1年。
包装内容：产品内容SK2420-200T 酵母质粒快速提取缓冲液（SK2420-1）5×1mL2×PCR MasterMix（FSL2610）5×1mL说明书1份产品简介：使用本试剂盒能够快速提取的酵母质粒，大幅减少酵母阳性克隆的鉴定时间。
仅适用于通过PCR扩增的方法鉴定酵母阳性克隆或获得的PCR产物用于测序分析。
如想获得纯度高酵母质粒请选用酵母质粒提取试剂盒（SK2410）。
使用方法:一、酵母质粒提取1.吸取20μL的酵母质粒快速提取缓冲液放入1.5mL的离心管中。
2.用无菌枪头挑取长度1~2mm的酵母菌悬浮在装有缓冲液的离心管中。
3.在95°C的水浴锅或者金属浴中煮5min-10min。
4.冰上放置2min，常温条件下12,000rpm，离心5min，吸取上清移至新的离心管。
得到的质粒可用于PCR分析。
二、PCR扩增目的条带。
建议每10μL PCR反应体系加入1μL提取的酵母质粒，40个PCR循环数。
PCR反应体系:试剂20μl反应体系终浓度2×PCR MasterMix10μl1×Primer F,10µM0.5μl0.25μMPrimer R,10µM0.5μl0.25μMTemplate DNA2μl<1μg/reaction dd H2O up to20μl-PCR反应条件：2×Taq MasterMix反应温度反应条件循环94℃6min194℃30secTM℃30sec40 72℃1kb/min72℃7min14℃+∞1注意事项：1.建议提取酵母质粒前先把酵母克隆在平板上划1cm左右的短线，生长2-3天后，挑取1~2mm的酵母菌用做质粒提取。
2.可根据酵母菌的多少适当增加或减少酵母质粒提取缓冲液的使用量。
酵母基因组DNA提取试剂盒操作方法及步骤说明书
试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次酵母裂解液室温15 ml 30 ml 60 ml蛋白沉淀液室温 5 ml 10 ml 20 mlDNA溶解液室温 5 ml 5 ml 10 ml本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.环境温度低时酵母裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，轻轻旋摇，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：本试剂盒用于快速的从酵母中提取基因组DNA。
在针对酵母细胞特点配制的酵母裂解液作用下，酵母细胞被裂解释放出基因组DNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。
产品特点：1.不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂。
2.快速，简捷，整个过程可在1个小时内完成。
3.结果稳定，产量高（比离心柱型的产量高一倍以上），OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50Kb-150kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应以及文库构建。
操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）1.吸取1.5ml 酵母培养物到一个1.5ml离心管；12,000rpm离心2分钟，尽可能弃上清，必要时候可以用枪吸去。
2.高速涡旋振荡，打散重悬酵母细胞团。
3.加入300μl酵母裂解液，涡旋振荡混匀，或者用1毫升的枪头反复吹打混匀。
酵母细胞的重悬分散对下一步裂解非常重要，必须充分分散重悬。
4.将裂解物放置在70℃水浴15-30分钟。
如果产量低，可以适当提高水浴温度和延长水浴时间，中间可以涡旋振荡混匀几次帮助裂解。
5.冰上至少5分钟使回复到室温。
酵母质粒 DNA 小量提取试剂盒
注意事项-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------●
溶壁酶（N9031/N9032）需要客户另行购买。 100 ml 溶壁酶反应缓冲液：77.4 ml 0.1M Na2HPO4+22.6 ml 0.1M NaH2PO4+21.84 g 山梨醇（pH7.0）。 通常酵母质粒拷贝数都很低，一般通过电泳或者分光光度计法都很难检测到。提取的质粒 DNA 如用于下列实验，通常建议使用 量为： 用作 PCR 模板：1-5 μl 质粒 DNA。 转化大肠杆菌：5-10 μl 质粒 DNA。 所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心，速度为 12,000 rpm（约 13,400×g）。 溶液 Eluent（10 mM Tris-HCl, pH 8.5）中不含 EDTA，其收集的 DNA 片段可直接用于各种酶促反应等，不会影响后续试验。 为了保证回收效率，请不要使用未调整 pH 值的超纯水洗脱目的片段。
核酸纯化系列
酵母质粒 DNA 小量提取试剂盒
产品组分 组分 RNaseA 溶液 YⅠ 溶液 YⅡ 溶液 YⅢ 溶液 PB 溶液 W 溶液 Eluent DNA 纯化柱 说明书
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产品说明 N1061 150 μl 15 ml 15 ml 20 ml 30ml 30 ml 5 ml 50 个 1份 N1062 300 μl 30 ml 30 ml 40 ml 50ml 30 ml×2 10 ml 100 个 1份 N1063 600 μl 60 ml 60 ml 80 ml 100 ml 40 ml×3 20 ml 200 个 1份 质量控制 从酵母中提取 pBI121 质粒 DNA。提取的质粒 DNA 质 量通过琼脂糖凝胶电泳、限制性酶切和序列测定分析。 保存条件 RNase A：可室温保存 1 年以上。RNase A 为浑浊溶液。初 次使用本试剂盒时，请将 RNase A 全部加入到溶液Ⅰ中，均 匀混合后于 4℃保存。可保存 6 个月。 其他试剂：室温保存。 若溶液Ⅱ出现沉淀，请于 37℃保温溶解。待恢复至室温后使 用。沉淀的出现不会影响质粒 DNA 的纯化结果。 本产品采用了经典的硅胶膜及碱裂法技术，用于酵母质粒 DNA 小量纯化。纯化原理是用溶壁酶消化酵母细胞的细胞 壁，碱裂解酵母细胞后，硅胶膜柱高效可逆地吸附体系中的 质粒 DNA（高盐、低pH 值），蛋白及其它杂质不被吸附而被 除去，被吸附的DNA 在低盐、高pH 值条件下再被洗脱纯化。 一次可从 1-5 ml（不超过 5×107 个）的过夜培养的酵母菌液 中纯化高纯度质粒 DNA（OD260/280 = 1.7-1.9）， 此质粒 DNA 可直接用于 DNA 序列分析以及各种酶促反应等。
细菌基因组DNA提取试剂盒(溶液型)操作方法及步骤说明书
细菌基因组DNA提取试剂盒目录号：DN12目录编号包装单位DN1201 50次DN1202 100次DN1203 200次❖适用范围：适用于快速提取各种细菌基因组DNA❖试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次细胞核裂解液室温30 ml 60 ml 120 ml蛋白沉淀液室温10 ml 20 ml 40 mlDNA溶解液室温10 ml 15ml 30 mlRNase A(10mg/ml) -20℃150μl250μl400μl本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，轻轻旋摇，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
❖产品介绍：本试剂盒用于快速的从各种细菌中提取基因组DNA。
细菌样品加入细胞核裂解液(或者通过溶菌酶或者其它一些酶帮助裂解细胞壁后)，首先在强去污剂作用下裂解细胞释放出基因组DNA，接着加入RNase A去除RNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。
❖产品特点：1.不需要使用有毒的苯酚等试剂。
2.快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。
3.结果稳定，产量高，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50 kb -150kb，可直接用于构建文库，PCR，Southern-blot和各种酶切反应。
❖注意事项1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2.用户需自备异丙醇、70％乙醇、0.5M EDTA和Lysozyme（溶菌酶）(用于革兰氏阳性菌)、lysostaphin(用于某些难裂解的革兰氏阳性菌)、水浴箱。
细菌基因组DNA大量提取试剂盒使用说明
细菌基因组DNA大量提取试剂盒使用说明一、试剂盒的组成和保存1. 试剂盒通常包含以下试剂：细菌裂解液、蛋白酶K、RNase A、乙酰乙酸钠、异丙醇、异待戊酸酒精和洗涤缓冲液等。
所有试剂均应在4℃保存，并避免光照。
2.打开试剂盒后，应将所有试剂恢复至室温后再进行实验。
二、细菌样品的准备1. 选择要提取DNA的细菌菌株，并以合适的培养基进行预培养，至菌液浓度达到0.5-1.0 McFarland标准。
通常需要提取500μl菌液。
2.将细菌菌液用低速离心（1,500×g，10分钟），倒掉上清液。
3. 用无菌PBS洗涤细菌沉淀物，将其转移到1.5ml离心管中，并用PBS以适量体积使菌液悬浮。
三、DNA提取1.加入500μl裂解液到离心管中，并充分混匀，然后孵育于65℃恒温水浴中30分钟。
期间轻轻摇荡离心管。
**注意：**为了最大限度地保证DNA提取效果，裂解液应充分混合，可以通过轻轻翻转离心管或用手轻轻转动溶液达到混匀的目的。
2. 在65℃恒温水浴中孵育结束后，加入50μl蛋白酶K和5μl RNase A，轻轻颠倒离心管以混匀。
3.再次将离心管放回65℃恒温水浴中孵育60分钟。
4.取出离心管，加入300μl异酸醇，轻轻颠倒离心管以混匀，然后在冰上静置5分钟。
5.离心管离心（12,000×g，5分钟，4℃），将上清液转移到新的离心管中。
6. 加入1ml异待戊酸酒精，轻轻颠倒离心管以混匀。
7.离心管离心（12,000×g，5分钟，4℃），将上清液倒掉。
8. 加入1ml 75%乙醇洗涤缓冲液，轻轻颠倒离心管以混匀。
9.离心管离心（12,000×g，5分钟，4℃），将上清液倒掉。
10.将离心管放置在80℃干燥箱中，使DNA片段溶于无菌水中。
四、DNA质量检测和存储1.使用比色计或荧光检测仪检测提取的DNA浓度和纯度。
2.将DNA保存在-20℃冷冻保存。
**注意事项：**1.实验操作过程中请严格遵守无菌操作规范，避免污染。
酵母基因组DNA快速提取试剂盒(离心柱型)操作方法及步骤说明书
酵母基因组DNA 快速提取试剂盒目录号：DN20适用范围：适用于快速提取各种酵母基因组DNA试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成 保存50次 平衡液 室温 5 ml 缓冲液YB 室温20 ml 结合液CB 室温11 ml 抑制物去除液IR 室温25 ml 漂洗液WB 室温15 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液EB 室温 15 ml Lytic Enzyme -20℃2.5 ml 蛋白酶K 粉（可选）20mg/ml -20℃20mg 吸附柱AC 室温50个 收集管（2ml ） 室温 50个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:目录编号包装单位 DN200150次 DN2031 50次（带蛋白酶K ，带Lytic Enzyme ）1.结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.为避免降低活性，方便运输，提供蛋白酶K为冻干粉状（20mg），收到后，可短暂离心后，加入1毫升灭菌水溶解配制成20mg/ml溶液，因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量分装冻存，－20℃保存。
3.Lytic Enzyme为蜗牛酶甘油储液，因此比较粘稠，请小心取用，－20℃保存。
蜗牛酶是从蜗牛的嗦囊和消化道中制备的混合酶，它含有纤维素酶，果胶酶，淀粉酶，蛋白酶等20多种酶。
适合破碎溶解各种酵母的细胞壁。
4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：该试剂盒采用DNA吸附柱和独有的溶液系统，适合于从多种来源的酵母培养物中快速简单地提取基因组DNA。
约3ml处于指数生长期的酵母培养液一般一次抽提可纯化出10-15μg的高质量的基因组DNA。
纯化DNA产物可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。
酵母细胞经lytic Enzyme处理去除细胞壁后，独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
酵母DNA的提取
酵母DNA的提取一．细胞培养及其DNA的抽提1．用10毫升YPD培养基培养酵母。
将培养物在30度中地振荡条件下培养过夜。
2．取5毫升培养细胞置于离心管中。
2000g（Sorvall SS-34转头,4100r/min）离心5分钟，去除上清液。
3．0.5毫升山梨糖醇缓冲液重新悬浮细胞，将细胞悬液转移到一只微量离心管中。
4．入20微升酶解酶100T的溶液（用山梨糖醇缓冲液配成2.5mg/ml浓度）。
将细胞悬液在37度下温育1小时。
5．微量离心机离心1分钟，去除上清液。
6．0.5毫升酵母重悬缓冲液重新悬浮细胞。
7．入50微升10%的SDS。
盖紧管口，将离心管快速翻转数次，混匀后将离心管在65度下温育才30分钟。
8．入0.2毫升5mol/L的醋酸钾，冰育才1小时。
二．DNA的分离9．在微量离心机中以最大转速4度离心5分钟，使细胞碎片沉积下来。
10．小心吸取上清液到一新的微量离心管中。
11．在室温下加入等体积异丙醇混匀，放置5分钟。
12．在微量离心机中以最大转速离心10秒，去除上清液，将沉淀在空气中干燥10分钟。
13．用300微升含20ug/ml胰RNase的TE（pH8.0）溶解沉淀。
将混合物在37度温育30分钟。
14．加入30微升3mol/L的醋酸钠（pH7.0）。
混匀后加入0.2毫升的异丙醇。
再次混匀。
在微量离心机中以最大转速离心20秒。
15．去除上清液，将沉淀在空气中干燥10分钟，用150微升TE（pH7.0）溶解DNA。
备注：SDS(10%,m/V)TE(pH7.4)转头用Sorvall SS-34转头,4100r/min或同类产品。
酵母菌DNA提取方法
1.将种子液接入100mL液体YPD培养基中培养48h。
2.离心获取湿菌体，用蒸馏水多次洗涤，放在60℃烘箱中烘干备用。
3.选用Eeup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒对DNA进行提取。
（1）取50-100mg新鲜大型真菌（如蘑菇）或20mg干燥的子实体或菌丝用液氮研磨成粉末，加入1.5mL离心管中。
加入200µL Buffer Digestion 和2µLβ-巯基乙醇，再加入20µL Proteinase K液体，震荡混匀。
56℃水浴1h至细胞完全裂解。
（2）加入100µL Buffer PF，充分颠倒混匀，-20℃冰箱放置5min。
（3）室温10000rpm离心5min，将上清转移到新的1.5mL离心管中。
（4）加入200µL Buffer BD，充分颠倒混匀。
（5）加入200µL的无水乙醇，充分颠倒混匀。
（6）将吸附柱放入收集管中，用移液器将溶液和半透明纤维状悬浮物全部加入吸附柱中，静置2min，再10000rpm温室离心1min，倒掉收集管中的废液。
（7）将吸附柱放回收集管，加入500µL PW Solution，10000rpm离心30s倒掉收集管中的废液。
（8）将吸附柱放回收集管，加入500µL Wash Solution，10000rpm离心30s倒掉收集管中的废液。
（9）将吸附柱重新放回收集管中，于12000rpm室温离心2min，离去残留的Wash Solution。
（10）取出吸附柱，放入一个新的1.5mL离心管中，加入50µL TE Buffer静置3min，12000rpm室温离心2min，收集DNA溶液。
提取的DNA可立即进行下一步实验或-20℃保存。
4.对提取的DNA进行PCR扩增。
5.对提取到的DNA进行琼脂糖凝胶电泳实验，检测DNA的提取情况。
细菌基因组 DNA 快速提取试剂盒 说明书
细菌基因组DNA快速提取试剂盒（溶液型）GK1061 50 次GK1062 100次一、试剂盒组成Components GK1061 GK1062Digestion Solution(a)Proteinase K(b)NaCl Solution CTAB/NaCl Solution(c) Boiled RNase A (10mg/ml)TE (pH8.0)Lysozyme（d）SP Buffer 18ml3mg6ml6ml240µl18ml30mg0.5ml36ml6mg12ml12ml480µl36ml60mg1.0ml二、实验前的准备(a) Digestion Solution低温时可能出现沉淀，请于55℃适当加温溶解后使用，不会影响实验结果。
首次使用时，将Boiled RNase A全部加入到Digestion Solution中，充分混匀备用，加完Boiled RNase A的Digestion Solution，请于4℃保存。
(b) Proteinase K使用前加入300µl (GK1061) 、600µl (GK1062)灭菌双蒸水，分装-20℃冻存。
不得将ProteinaseK直接加入到Digestion Solution中，以免酶失活。
(c) CTAB/NaCl Solution使用前需要65℃预热，便于溶解和取液。
(d) Lysozyme使用前加入500µl (GK1061) 或1ml (GK1062) SP Buffer，使Lysozyme全部溶解。
分装后-20℃冻存。
三、试剂盒说明本试剂盒用于快速的从各种细菌中提取基因组DNA。
细菌样品加入细胞核裂解液(或者通过溶菌酶或者其它一些酶帮助裂解细胞壁后)，首先在强去污剂作用下裂解细胞释放出基因组DNA，接着加入RNase A去除RNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重新溶解于DNA溶解液中。
酵母质粒快速提取试剂盒说明书
一般实验室使用，仅用于体外一步法酵母质粒快速提取试剂盒一步法快速提取酵母质粒目录号：DP5001（50次）DP5002（100次）使用手册2007年4月，第1版Bioteke Corporation一、试剂盒组成、储存、稳定性本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
注意事项1．裂解液YE低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2．避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
3．操作过程请带手套，一旦有试剂接触到皮肤请立即用水冲洗。
二、原理简介本试剂盒提供了一种简单快捷的提取酵母质粒的方法，不需要任何破壁酶和玻璃珠，能大大的缩短操作时间，在30分钟左右的时间提取高纯度的酵母质粒DNA。
三、试剂盒特点1．不需要破壁酶。
2．不需要借助玻璃珠破壁。
3．时间短，方便快捷。
四、注意事项（实验前必须首先阅读这部分！）1．所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到14，000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2．开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。
3．为了最佳效果，最好使用新鲜标本，否则会严重降低产量。
五、操作步骤1.用1.5ml的离心管收集菌体，14000rpm离心20秒沉淀菌体(菌液1.5ml培养24小时左右至OD260达到1-1.5)，倒掉上层液体。
2.加入100ul的裂解液YE重悬菌体，加入等体积的酚/氯仿（1：1），激烈旋涡震荡10分钟。
3.65℃水浴5分钟，期间保持静置，不要摇动。
4.14000rpm离心5分钟收集上清液。
5.转移上清（注意不要触动界面物质），并加入2倍体积的95%乙醇，室温放置5 min后，以12,000 rpm离心5 min，弃尽上清，沉淀用70％无水乙醇洗涤2次，放置真空浓缩仪抽干5 min（或者常温晾干）。
6.100μl洗脱缓冲液EB溶解沉淀物，于-20℃保存。
酵母基因组DNA大量提取试剂盒使用说明
酵母基因组DNA大量提取试剂盒使用说明货号：D1910规格：10T保存：室温(15℃-25℃)干燥保存，复检期12个月，2℃-8℃保存时间更长。
试剂盒内容：D1910-10T保存RNase A1m1×5-20℃蛋白酶K1ml×5-20℃酵母破壁酶 1.25m1×5-20℃β-巯基乙醇 1.5m12-8℃山梨醇Buffer125m1RT溶液YA50ml RT溶液YB50ml RT漂洗液15ml×2RT洗脱液20m1RT吸附柱10个RT收集管20个RT说明书1份产品简介：酵母基因组DNA大量提取试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取酵母基因组DNA。
离心吸附柱中采用的硅基质材料，能够高效专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。
提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。
使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
操作步骤：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。
所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、在离心管中收集酵母细胞20-40ml(不超过109ce l1s)，10000rpm离心1min，尽量吸除上清。
2、酵母细胞壁的破除：向酵母菌体中加入9ml山梨醇Buffer。
充分悬浮菌体，加入600ul 酵母破壁酶和100ulβ-巯基乙醇，充分混匀。
30℃处理1-2h，期间可颠倒离心管混匀数次。
3、10000rpm离心lmin，弃上清，收集沉淀。
4、向沉淀中加入5ml溶液YA，充分悬浮沉淀，向悬浮液中加入500ul的RNase A(10mg/ml)，充分颠倒混匀，室温放置10min。
5、加入500ul的蛋白酶K(10mg/ml)，充分颠倒混匀。
65℃水浴消化30-60min，消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止。
酵母菌落pcr流程
酵母菌落pcr流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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材料:酵母菌落。
酵母菌 DNA 提取试剂盒。
酵母转化试剂盒使用说明书第二版
酵母转化试剂盒使用说明书（第二版）储存条件：Carrier DNA-20℃保存，其它组分可室温保存，有效期1年。
产品内容：Components SK2400-200PEG Solution50mlLiAc Solution50mlCarrier DNA2×1ml说明书1份酵母感受态细胞的制备：1.活化菌种。
-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基（YPDA加20g Agar/L）上划线，在30℃培养2-4天。
2.挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基上划3-5mm的短线，在30℃培养2-4天。
待酵母单菌落长至2mm长时，接种。
3.首先把酵母细胞接种到3ml液体YPDA培养基中，30℃过夜培养。
4.第二天转接到含有30ml液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养，待OD600到0.4-0.5范围内。
收集细胞，1000g，离心5min,去上清。
5.沉淀用30-50ml的无菌的去离子水悬浮。
1000g，离心5min，去上清。
6.沉淀用合适体积的1/10浓度的LiAc悬浮（30ml的酵母菌最多用不超过1mL的1/10浓度的LiAc悬浮，通常100μl的酵母细胞用于转化一个质粒，即一个反应）。
1/10浓度的LiAc稀释方法：100μl LiAc Solution+900μl无菌水。
7.把酵母细胞的悬浮液分装到1.5ml的离心管中，每管分装100μl，用于转化一个质粒即一个反应。
1000g，离心5min，去上清。
制备好的感受态细胞备用。
酵母转化：1.配制预混液，每转化一个质粒即一个反应需要360μl的预混液。
PEG Solution240μlLiAc Solution36μlCarrier DNA10μl质粒（大约200ng/μl）5μl（根据质粒的浓度加入相应的体积）总体积360μl（不足体积用ddH2O补充）2.吸取360μl的预混液加入到感受态细胞中，用枪头反复吹吸沉淀，使离心管底的酵母细胞彻底地悬浮在含有PEG的预混液中。
DNA提取试剂盒步骤--最新
组织基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）储存条件该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。
2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀。
注意事项1．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇。
2．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
3．若缓冲液GA或GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。
4．所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。
操作步骤使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1. 处理材料用干烤过的镊子和剪刀剪取一定量的冰冻组织，体积约两个绿豆大小，放入DNAase-free的1.5ml EP中。
向EP管中加入等体积的磁珠，以及加入200 μl缓冲液GA，振荡悬浮。
置于组织破碎仪中运行5mins/次，共3次。
每破碎一次，需将含组织的EP管放入离心机中短暂离心来沉淀组织和磁珠，使其在下次破碎时更好的接触。
可根据观察匀浆的效果来决定匀浆的次数，目标是“碾磨均匀”，不能有较大体积的组织块（>2mm的组织块）。
如果需要去除RNA，需加入4 μl RNaseA（100 mg/ml）溶液（客户自备，目录号：RT405-12），振荡15 sec，室温放置5 min。
2. 加入20 μl Proteinase K溶液，混匀。
提取组织基因组时，加入Proteinase K混匀后，在56℃放置1~3 h，直至组织溶解，每小时颠倒混合样品2-3次，用水浴振荡器也可。
放入10,000rpm (~11,500×g) 的离心力高速离心1mins来沉淀未碾碎的组织和磁珠。
将上清转移至新的EP管中。
3. 加入200 μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10 min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
酵母转化试剂盒使用说明书（第二版）
酵母转化试剂盒使用说明书（第二版）储存条件：Carrier DNA短期4℃，长期-20℃保存，其它组分可室温或4℃保存，有效期1年。
产品内容：Components SK2400-200PEG Solution50mlLiAc Solution50mlCarrier DNA2×1ml说明书1份酵母感受态细胞的制备：1.活化菌种。
-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基（YPDA加20g Agar/L）上划线，在30℃培养2-4天。
2.挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基上划3-5mm的短线，在30℃培养2-4天。
待酵母单菌落长至2mm长时，接种。
3.首先把酵母细胞接种到3ml液体YPDA培养基中，30℃过夜培养。
4.第二天转接到含有30ml液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养，待OD600到0.4-0.5范围内。
收集细胞，1000g，离心5min,去上清。
5.沉淀用30-50ml的无菌的去离子水悬浮。
1000g，离心5min，去上清。
6.沉淀用合适体积的1/10浓度的LiAc悬浮（30ml的酵母菌最多用不超过1mL的1/10浓度的LiAc悬浮，通常100μl的酵母细胞用于转化一个质粒，即一个反应）。
1/10浓度的LiAc稀释方法：100μl LiAc Solution+900μl无菌水。
7.把酵母细胞的悬浮液分装到1.5ml的离心管中，每管分装100μl，用于转化一个质粒即一个反应。
1000g，离心5min，去上清。
制备好的感受态细胞备用。
酵母转化：1.配制预混液，每转化一个质粒即一个反应需要360μl的预混液。
PEG Solution240μlLiAc Solution36μlCarrier DNA10μl质粒（大约200ng/μl）5μl（根据质粒的浓度加入相应的体积）O补充）总体积360μl（不足体积用ddH22.吸取360μl的预混液加入到感受态细胞中，用枪头反复吹吸沉淀，使离心管底的酵母细胞彻底地悬浮在含有PEG的预混液中。
新型植物基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
新型植物基因组DNA快速提取试剂盒目录号：DN15目录编号包装单位DN1501 50次DN1502 100次DN1503 200次适用范围：适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNA试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次RNase A(10mg/ml) -20℃250 μl500 μl 1 ml 缓冲液AP1 室温25 ml 50 ml 100 ml 缓冲液AP2 室温10 ml 20 ml 40 ml缓冲液AP3/E 室温15 ml 25 ml 50 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温15 ml 25ml 50ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15 ml 20 ml 40 ml 吸附柱AC 室温50个100个200个收集管（2ml）室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀，可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解（AP3加入乙醇前可加热，加入乙醇后不可加热），恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。
可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。
提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。
新鲜或干燥的植物组织（细胞）磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 进一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
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酵母基因组DNA提取试剂盒使用说明
货号:D1900
规格:50T/100T
保存:室温(15℃-25℃)干燥保存，复检期12个月，2℃-8℃保存时间更长。
试剂盒内容：50T100T
RNase A1m11ml×2
蛋白酶1m11ml×2
酵母破壁酶 1.25m1 2.5m1
β-巯基乙醇300ul600ul
山梨醇Buffer25m150m1
溶液A10ml20ml
溶液B10ml20ml
漂洗液15m115ml×2
洗脱液10ml20ml
吸附柱50个100个
收集管50个100个
说明书1份1份
产品简介:
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取酵母基因组DNA。
离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。
提取的基因组DNA片段大，纯度高，
质量稳定可靠。
使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
操作步骤:
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。
所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、取酵母细胞(不超过5×107ce l1s)，12000rpm离心1min.，尽量吸除上清。
2、酵母细胞壁的破除：向酵母菌体中加入470ul山梨醇Buffer。
充分悬浮菌休，加入25ul酵母破壁酶和5ulβ-巯基乙醇，充分混匀。
30℃处理1-2h.，期间可颠倒离心管混匀数次。
3、12000rpm离心lmin，弃上清，收集沉淀。
4、向沉淀中加入200ul溶液A，充分悬浮沉淀，向悬浮液中加入20ul(10mg/ml)的RNase A，充分颠倒混匀，室温放置10min。
5、加入20ul(10mg/ml)的蛋白酶K，充分颠倒混匀。
65℃水浴消化15-30min，消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止。
6、加入200ul溶液B，再加入200ul无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响DNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，室温放置2min。
7、12000rpm离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
8、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前请先检查是否己加入无水乙醇)。
12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
9、向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm离心l min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
10、12000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR等。
11、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心l min。
12、离心所得洗脱液再加入吸附柱中，12000rpm离心2min，即可得到高质量的基因组DNA。
注意事项:
1、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
2、若试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响提取效果。
3、如果实验中的离心步骤出现柱子堵塞的情况，可适当延长离心时间。
4、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul，体积过小会影响回收效率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
DNA产物应保存在-20℃，以防DNA 降解。
5、DNA浓度及纯度检测：得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。
回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为 1.0相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。
OD260/0D280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
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