果蝇唾腺染色体的制备和观察
果蝇唾腺染色体标本的制备与观察实验报告
果蝇唾腺染色体标本的制备与观察实验报告果蝇唾腺染色体标本的制备与观察实验报告一、实验原理双翅目昆虫(摇蚊、果蝇等)幼虫期的唾腺细胞很大，其中的染色体称为唾腺染色体。
这种染色体比普通染色体大得多，宽约5um，长约400um，相当于普通染色体的100—150倍，因而又称为巨大染色体。
唾腺染色体处于体细胞染色体联会配对状态。
并且唾腺染色体经过多次复制而并不分开，每条染色体大约有1000—4000根染色体丝的拷贝，所以又称多线染色体。
多线染色体经染色后，出现深浅不同、密疏各别的横纹，这些横纹的数目和位置往往是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征；如染色体有缺失、重复、倒位．易位等，很容易在唾腺染色体上识别出来。
各染色体的异染色质的着丝粒部分互相靠拢形成染色中心；横纹有深浅、疏密的不同，各自对应排列，这意味着基因的排列。
唾腺染色体广泛应用于细胞遗传学、发生遗传学、进化遗传学及分子遗传学的研究中。
二、实验材料果蝇的三龄幼虫三、实验器材双目解剖镜，生物显微镜，解剖针，载玻片，盖玻片，滤纸条，废物缸，托盘等。
四、实验试剂生理盐水，盐酸，蒸馏水，改良苯酚品红染色液等。
五、实验步骤1.剥离唾腺：在一干净的载玻片上滴一滴生理盐水，选择行动迟缓、肥大、爬在瓶壁上即将化蛹的三龄幼虫，或者选择经低温处理的果蝇三龄幼虫置于载玻片上。
每只手各持一个解剖针，在解剖镜下进行操作。
由于果蝇的唾腺位于幼虫体前1/3-1/4处，所以左手持解剖针按压住虫体前端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫头部口器部位，适当用力向右拉唾腺腺体随之而出。
剔除脂肪体并弃除无关物质。
2.解离：加一滴45%乙酸溶液于腺体上，作用5-7s。
用滤纸吸干溶液。
在唾腺组织上滴一滴1mol/lLHCl，解离30-40s，以松软组织，利于染色体的分散。
3.吸去 HCl，用水冲洗2-3次.4.染色：滴加改良苯酚品红染液染色30min,染色时间不可过长，否则背景也着色。
果蝇唾腺染色体的制备与观察
实验方法
把载玻片置于解剖镜下。载玻片上滴水一滴， 取三龄幼虫放在其中，操作者两手各握一枚解 剖针，左手的解剖针压住幼虫后端１/３处， 固定幼虫。右手解剖针按住幼虫头部，用力向 右拉，把头部从身体拉开，唾腺随之而出，唾 腺是一对透明的棒状腺体
在载玻片上除去幼虫其他组织部分，还要把 唾腺周围的白色脂肪剥离干净，再滴上改良 苯酚品红染色。
4.横纹结构：每条染色体的染色线在不同的 区段螺旋化程度不一，出现一系列宽窄不 同、染色深浅不一或明暗相间的横纹。
5.Puff结构：幼虫 的不同发育期，浓 缩的染色质纤维会 成群解旋、松开， 形成泡状松散结构， 这种泡状结构称 Puff结构，亦称染 色体的疏松。
三、实验用品
实验材料 果蝇的三龄幼虫 用品 解剖镜、显微镜、镊子、解剖针、载玻片、 盖玻片、吸水纸等
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普通果蝇（2n=8）唾腺染色体的形态：各染色体 着丝点附近异染色质区相互结合形成染色很深的 染色中心，第Ⅱ、Ⅲ对染色体呈Ｖ形（中着丝 粒），各有两臂，Ｘ染色体呈棒状，第Ⅳ对染色 体呈粒状，观察时可见五条臂由染色中心向外蜿 蜒伸展。
果蝇唾腺染色体的特点：
1.巨大染色体：这种染色体比普通染色体大 得多，宽约5μm，长约400μm，相当于普通 染色体的100—150倍，因而又称为巨大染色 体。
果蝇唾腺染色体的制 备与观察
一、实验目的
练习取出果蝇幼虫唾腺的技术和制作唾腺 染色体标本的方法；������
了解体细胞染色体联会现象，观察果蝇唾 腺染色体的形态特征，并根据唾腺染色体 上横纹的形态和排列，识别不同的染色体 识别染色体结构变异的细胞学表现。 练习绘制多线染色体图Βιβλιοθήκη 二、实验原理
果蝇唾腺染色体的制片与观察
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第1页
一、试验目标
1.了解唾腺CS特点 2. 学习分离唾腺技术 3. 掌握唾腺CS制片方法
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第2页
二、试验原理
• 永久间期CS • 复制而不分开 与观察
第3页
果蝇唾腺染色体特点：
• 剥离唾腺置载片中央,加一滴HCl,解离23
• 吸去HCl,冲洗23次,吸干;加1d染液,染色5
果蝇唾腺染色体的制片与观察
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4. 压片及观察
• 载片置平整处,加盖 片,轻敲;压片
• 低倍至高倍镜检
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第19页
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第20页
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第21页
五、注意事项
1. 水不可太多,不然幼虫会漂浮而且活跃 2. 一定加生理盐水,不然唾腺易干 3. 将脂肪组织去除洁净 4. 吸水时勿将唾腺一起吸走 5. 染色时间不可过长,不然背景也着色 6. 压片时要揉,用力要均匀
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第22页
六、作业
1. 制效果很好唾腺CS暂时片1-2张 2. 真实绘制观察到唾腺CS绘图 3. 思索题P66 1-2
4.Puff结构：幼虫不一样发育期，浓缩染色质纤维会成群解 旋、松开，形成泡状涣散结构，使对应基因得以表示，这 种泡状结构称Puff结构，亦称染色体疏松。
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第7页
三、试验材料、器具、药品试剂
• 大果蝇(D. virilis)活体三龄幼虫 • 解剖镜,显微镜,培养箱;培养瓶,
1.巨大染色体：这种染色体比普通染色体大得多，宽约5um， 长约400um，相当于普通染色体100—150倍，因而又称为巨 大染色体。
遗传学实验实验九果蝇唾腺染色体标本的制备与观察
将涂片放入盛有胃酶的 容器中，用吸管或滴管 滴加适量的胃酶溶液， 使涂片完全浸没在溶液 中。在适宜的温度下处 理一定时间，使唾腺细 胞分离。
将经过胃酶处理的涂片 取出，用吸管或滴管滴 加适量的胰酶溶液，再 次放入适宜温度下处理 一定时间，使染色体逐 渐分离出来。
将涂片用清水冲洗干净 ，用吸水纸吸干水分， 然后进行染色。
通过观察果蝇唾腺染色体标本的次级 结构，可以发现染色体的精细结构， 如染色粒、染色带等特征，有助于研 究染色体的功能和基因定位。
染色体交叉互换
在某些情况下，果蝇唾腺染色体标本 中可能会出现染色体交叉互换的现象 ，这种现象可能与基因重组和遗传变 异有关。
05
实验结论
实验结果总结
成功制备了果蝇唾腺 染色体标本，观察到 了清晰的染色体结构。
掌握果蝇唾腺染色体的观察技术
学习并掌握显微镜观察技术，包括显 微镜的基本操作、调节焦距、观察视 野等。
学习并掌握染色体标本的制备和染色 技术，了解其原理和方法步骤。
分析果蝇唾腺染色体的特点
观察并记录果蝇唾腺染色体的形 态、大小、着丝粒位置等信息，
分析其特点。
比较不同种类的果蝇唾腺染色体 的差异，分析其与物种进化的关
3. 准备载玻片和盖玻片
将载玻片和盖玻片清洗干净，晾干备用。
安全须知
实验过程中应注意安全，避免直接接触染色液和化学试 剂，如需使用手套等防护措施。
唾腺染色体的制备
制备涂片
胃酶处理
胰酶处理
冲洗涂片
安全须知
用镊子小心地从果蝇头 部取下唾腺，将其放在 干净的载玻片上，用另 一片载玻片将其轻轻压 平，形成一层均匀的涂 片。
通过实验，深入了解 了果蝇唾腺染色体的 形态和结构特点。
果蝇唾液腺染色体标本的制备与观察
果蝇唾液腺染色体标本的制备与观察一.实验目的通过实验掌握果蝇唾腺染色体的制片方法，了解果蝇唾腺染色体的形态结构特点并练习解剖果蝇幼虫的技术。
二.实验原理唾腺染色体是一类存在于双翅目昆虫的幼虫唾液腺内的巨大染色体。
果蝇的唾腺染色体是典型的巨大染色体，它的巨大性的成因是核内有丝分裂造成的。
由于其染色体DNA经过多次复制（可达210～215次），但并未发生细胞核分裂，同时唾腺细胞中的染色体总是处在配对状态即体细胞联会，重复复制后的染色体聚集在一起，所以在显微镜下看到唾腺染色体要比一般的染色体大得多，又称多线染色体。
三.实验用品1.实验材料：普通果蝇的三龄幼虫、生理盐水2.实验器材和试剂：双筒解剖镜、显微镜、解剖针、改良苯酚品红溶液、HCI四.实验方法和步骤1. 幼虫的培养为了在解剖镜下便于操作，使用的幼虫应发育充分而且个体较大。
在实验中，人们通常采用两个措施控制幼虫的生长。
A.良好的培养基提供了果蝇生长发育的必需营养，因此在培养瓶内放置的亲本不易过多，否则将产生过多的卵而造成养分不足。
B.培养果蝇的环境温度应比正常培养时略低一些，一般可控制在16～20℃范围内，低温下生长的果蝇个体较大。
果蝇属于完全变态的昆虫，成虫交尾后将卵产在培养基内。
在适宜的温度下，卵发育为幼虫并经过一、二龄幼虫的发育后，三龄幼虫要爬到瓶壁上化蛹，为了能够在实验时获得较多的幼虫，可以分批将亲本放入培养瓶。
实验时从培养瓶的瓶壁上挑选那些发育良好的、个体较大的幼虫。
2. 剖取唾腺用解剖针从培养瓶内挑取1只三龄幼虫置于载片上，并滴加1滴生理盐水。
将载片放在载物台上，用解剖镜进行观察。
首先将幼虫的头尾分清，果蝇的头部有一黑点（口器），头部不断作伸缩状。
解剖时，双手各持一个解剖针，一支针先压在幼虫身体的前1/3处，另一支针压住果蝇头部并向前轻轻移动，即可将头部与身体拉开，仔细观察可看见一对透明做白的囊状体即为唾腺。
在唾腺前端各伸出一条细管在前面汇合成一总管。
实验二、果蝇唾液腺染色体的制备与观察
实验二：果蝇唾液腺染色体的制备与观察一、实验目的1、练习果蝇唾液腺的分离方法2、掌握唾液腺染色体的制片技术3、观察了解果蝇唾液腺染色体的形态特征二、实验原理1、双翅目昆虫（果蝇）幼虫期的唾液腺细胞很大，其中的染色体称唾液腺染色体，相当于一般普通染色体的100－150倍，又称巨大染色体。
2、在幼虫发育过程中，唾液腺染色体仍进行复制，但细胞只生长不分裂，从而产生多线染色体。
多线染色体经染色后，出现深浅不一、宽窄不同的横纹，这些横纹的数目和位置是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征。
如果染色体缺失、重复、倒位、易位等结构变异时，很容易在唾腺染色体上识别出来。
3、多线染色体的特征：a 巨大；b体细胞配对，所以染色体只有半数（n=4）；c 各染色体的异染色质多份额着丝粒部分相互靠拢形成染色中心；d 横纹有深浅、疏密的不同，各自相应排列，这意味着基因的排列。
三、实验材料和用品实验材料：黑腹果蝇的三龄幼虫（选择行动迟缓、肥大、爬上管壁、就要化蛹了的三龄幼虫观察最佳）实验用品：显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、滤纸。
0.9%生理盐水、1％醋酸洋红。
四、实验步骤1、载玻片置于显微镜下，上面滴加一滴生理盐水，放上果蝇幼虫（有一钝尾和带黑色口器的尖头，可根据其在盐水中爬行方向确定头部），两手各拿一枚解剖针，左手解剖针按住幼虫的后端1/3, 右手解剖针按住头部(尽量靠近口器)用力后拉，把头部从身体拉出，唾液腺随之而出。
（一对双叉形透明的囊状腺体）。
2、除去幼虫其他组织部分，把唾液腺周围脂肪组织（不透明）剥离干净，然后将多余生理盐水吸走，滴一滴醋酸洋红在载玻片上。
3、染色10 分钟，盖上盖玻片，用滤纸轻压一下吸去多余的染色液，然后平放在桌子上，用大拇指适当均匀用力压住，并横向揉几次（勿使盖玻片移动，用力和揉动是一个方向，不能来回揉！）。
4、显微镜观察，先在低倍镜下观察，找到分散好的染色体图像，再高倍镜观察。
用显微镜可以看到四对染色体，第一对染色体（X-）组成一个长条，第二和第三对各自组成了具有左右两臂的染色体对，它们都以中部的着丝区聚集，而第四对染色体很小，分布在着丝区呈点状或盘状。
果蝇唾液腺染色体制片与观察
同源染色体的两条臂紧密结合，自由伸展。因 此唾液腺细胞染色体数看不出2n的染色体数， 只能观察到从染色中心向空间伸展的染色体臂。 与其它细胞染色体相比的另一个特点是，唾液 腺染色体上有深浅不同、宽窄不一的带纹，这 些带纹的数目和位置是恒定的，代表着种的特 征和一些基因的位置。
由于这些带纹的存在，染色体上发生缺失、重 复、倒位、易位等很容易在唾液腺染色体上识 别出来。
三、实验材料
野生果蝇
四、实验步骤
1、剥离果蝇幼虫的唾液腺
取一洁净的载玻片，滴上1滴0.75%生理盐水。在瓶壁 上挑选肥大的充分发育的三龄幼虫放在的生理盐水中，唾 液腺位于幼虫食道的两侧，长度约占身体总长的1/3—— 1/4左右。
解剖时把载玻片放在解剖镜或放大镜下,一手用解剖针压住头部 (外型似一个黑色小点)，压住的地方越小越好，同时，用镊子夹住幼 虫身体1/2处， 轻轻地将幼虫的头部自身体拉开。唾液腺随同内脏一 起拉出。如果头部拉断,腺体没有拉出,可以用解剖针从镊子附近的腹 部缓缓地向头端挤压,也可压出唾液腺。然后在镜下细心分离，理出双 叉形半透明的囊状腺体即为唾液腺，在生理盐水中无论怎样触动它都 不会发生形状改变。
在显微镜下观察，由单层细胞构成，细胞形状不规则，细胞轮廓 清晰，细胞大，细胞核也大，甚至可以看清细胞核是由染色体卷缩在 一起形成的。唾液腺拉出后，剔除腺体周围乳白色的脂肪组织和身体 的残留部分，只留唾液腺在载玻片上。
2、解离 用滤纸条吸净唾液腺周围的其它物质，然后将唾 液腺放入1N HCl，解离2—3分钟，以松软组织利于 细胞破裂，使染色体散开。 3、水洗 解离后的唾液腺用蒸馏水洗3—4次（或0.4%的 生理盐水），水洗时要注意不要把唾液腺弄丢，水洗 要彻底，目的是洗去盐酸，以免影响染色效果。另外 水洗过程也是细胞低渗过程，使唾液腺细胞膨胀。
遗传学实验-果蝇唾腺染色体
绘制你所观察到的清晰的果蝇唾腺染色体的图像。
利用果蝇唾腺染色体可以进行哪些遗传学研究？
制备果蝇唾腺染色体需注意哪几个关键步骤？
根据实验的观察可以确定果蝇的染色体数目吗？
C
B
A
八、实验分析与讨论
张贵友，普通遗传学实验指导，
北京：清华大学出版社，2003
2014
卢龙斗、常重杰，遗传学实验技术，
唾腺细胞中同源染色体互相靠拢呈现联会状态－体联会；
各染色体的异染色质多的着丝粒部分互相靠拢形成染色中心(chromocenter)；
如果染色体有缺失、重复、倒位、易位等畸变，很容易在唾腺染色体上识别出来，因此唾腺染色体是研究染色体畸变的好材料。
黑腹果蝇的三龄幼虫 为了得到更好的染色体标本，需要在20—25℃和营养良好的条件下饲养幼虫。选择行动迟缓、肥大，爬上管壁的三龄幼虫（化蛹之前）做标本最佳。
三龄幼虫照片
1
2
三、实验材料
器具： 双筒体视解剖镜、显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、培养皿、吸水纸等。
试剂： 改良苯酚品红溶液、生理盐水、1N盐酸。
01
02
四、实验仪器与试剂
五、实验步骤
（点击图片观察放大图）
实验前知识准备： 果蝇三龄幼虫的唾腺位于幼虫的头部附近，可以看看显微照片中的位置
果蝇唾腺染色体的制备与观察
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遗传学实验二
一、实验目的
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1.练习剖取果蝇三龄幼虫唾腺的方法； 2.掌握制作果蝇唾腺染色体标本的技术； 3.观察果蝇唾腺染色体的形态特征。
双翅类昆虫(摇蚊、果蝇等)幼虫期的唾腺细胞很大，其中的染色体称为唾腺染色体(salivary chromosome)；
实验七 果蝇唾液腺染色体的制备
8、永久片的制作
① 使盖片向下放入盛有45%醋酸+95%酒精（1：1）
的培养皿中。一端垫上一玻棒，使玻片稍为倾
斜，约过5—10分钟，可见盖片与载片分离。用
镊子轻轻取出盖片于吸水纸上。
② 有材料的一面向上，放入盛有95%酒精+叔丁醇
（1：1）的培养皿中三分钟。
③ 换入纯叔丁醇中三分钟
④ 用中性树胶封片
解剖针
3、染色前处理
清除残体，使载片上只留下唾腺。
4、酸解：
把腺体放入1N HCl中浸泡2-3分钟，dH2O洗3次。
5、染色
滴上几滴醋酸洋红于唾腺上，染色30分钟。
6、压片
在载片上加盖玻片，盖片上覆盖一吸水纸，然后以拇 指适当用力压片，要求将唾腺细胞核压破，染色体伸 展开来而不破碎为好。
7、显微镜下观察
3. 总结讨论获得理想制片的要点。
Thanks!
实验七
果蝇唾腺染色体标本的制作和观察
一、 实验目的
观察果蝇的唾腺染色体，练习果蝇幼虫唾
腺分离技术及唾腺染色体的制片方法。
二、 实验原理
果蝇幼虫唾腺的染色体比其他细胞染色体大200 多倍。
核内重复有丝分裂后的众多染色线没有分开形成
的多线染色体，一条染色体内含有染色体线多达千
条以上。
多线染色体永久性处于前期体细胞染色体配对形 式。普遍存在于双翅目昆虫某些物种的幼虫唾腺细 胞内，是研究唾腺染色体常用的材料。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
备化蛹前，即为三龄幼虫，此时虫体肥大，
便于解剖，是制备唾腺染色体的最理想时期。
2、幼虫的解剖
将载玻片置于解剖镜下，滴一滴生理盐水。 将幼虫置于生理盐水内，一手持解剖针按住 幼虫前端的1/3处，固定幼虫。另一手持针揿 住幼虫头部正中，用力向前拉，把头部从身 体拉开，腺体即随之而出。
果蝇唾腺染色体标本的制备及观察
果蝇唾腺染色体标本的制备和观察摘要本实验通过用黑腹果蝇的三龄幼虫的唾腺，来观察果蝇的唾腺染色体。
目的在于学会辨认果蝇的唾腺的特征和识别各条不同的染色体以及掌握其基本的特征。
了解唾腺染色体的作用和意义。
１．引言果绳唾睬染色休为多线染色休,形成原因是由于染色休不断复制,但细胞不分裂从而形成了多线染色休,其上每一横纹相当于一个顺反子,横纹的形态特征有着种的特异性和稳定性。
因此果蝇唾睬染色休成为了研究染色休结构、基因定位、基因功能的重要实验材料。
1881年Ba}biani首次在摇蚊幼虫的唾腺细胞中发现多线染色体.20世纪30年代Painter首先用果蝇唾腺体作为遗传学数据在细胞学上的验证材料,他研究了多线染色体上的横纹跟基因的关联性以及染色体的物种特异性。
Bridges也对果蝇唾腺体进行了广泛详细的研究,制成一系列与已有的基因连锁图相对应的果蝇细胞学图。
２．实验材料和方法２．１实验材料受精的雌果蝇、盖玻片和载玻片、镊子、解剖针解剖镜和显微镜、醋酸地衣红染液、指甲油生理盐水、香柏油、镜头纸。
２．２实验方法２．２．１实验材料的获取和处理（1）三龄幼虫的培养：取20-30只受精的雌果蝇于培养基中，在22摄氏度的恒温冰箱中饲养7天得到肥大的果蝇三龄幼虫。
（2）唾腺的剥取和制片：取果蝇三龄幼虫于一滴加了生理盐水的载玻片上，用两根解剖针，一根扎住口器，一根扎住体前1/3处像两端拉唾腺腺体随之而出。
唾腺是一对透明的茄子状腺体，外有白色的脂肪组织（不透明）在腺体的前端各延伸出一细管汇合在一起与口器相连，相对于其他组织唾腺最为透明因此在黑色背景下其他组织呈白色,而唾腺是半透明的,辨别时应在明亮的光源下进行，果蝇的唾腺细胞很大，在解剖镜下可以看见其轮廓。
幼虫被拉断时唾腺也可能随之被拉出,也可能仍连在口器上,这时可用解剖针轻轻将其挤压出来。
拉出的腺体有可能仍为完整的左右对称的长茄状囊体,也可能分开、断裂。
去除幼虫其它组织部分，并把唾腺周围的白色脂肪剥离干净。
果蝇唾腺染色体的制片与观察
果蝇唾腺染色体的制片与观察果蝇唾腺染色体的制片与观察一、实验目的1、练习果蝇幼虫唾腺分离技术及唾腺染色体的制片方法；2、观察果蝇的唾腺染色体。
二、实验原理1、唾腺染色体：唾腺染色体是双翅类昆虫唾腺细胞的间期核中所看到的巨型染色体。
唾腺染色体的显著特征是：（1）形状为带状，宽达5微米，长达2000微米它相当于普通染色体的100～200倍；（2）核不分裂，由于染色体不断复制，形成了多线性染色体，宽度增加，同时长度也增加，成为巨型染色体；（3）带的全长几乎都有明显的嗜碱性的横纹，横纹的宽度有大有小，密度有疏有密，但是它的数目，位置等等对于同源染色体来说却都是同样的。
唾腺染色体的DNA含量达4，000—8，000c。
横纹被认为是染色小粒横向排列而成的。
横纹是详细研究染色体的部分缺失、倒位、重复、反复、易位等现象的标记；（4）由于2条同源体细胞染色体联会，在黑腹果蝇（2n= 8）中，V形的第二染色体和第三染色体各有两条臂，又各条染色体在异染色质多的着丝粒附近互相靠拢，与核仁一起在核的中央形成一个染色中心。
唾腺染色体的一条或几条横纹常显著膨起，这部分称为Bal- biani 环。
一般把多线性的巨大染色体中的这种膨大起称为疏松结构。
许多双翅类以及二、三种脉翅类昆虫的食道、肠、马氏管和神经细胞中，以及在植物界的Rhinanthus（胡麻科）的胚盘细胞、虞美人草的反足细胞等都能看到具有这样特征的染色体（巨大染色体或多线染色体）。
果蝇唾液腺：2、果蝇三龄幼虫的唾腺发育到一定阶段后，细胞的有丝分裂停留在间期，构成一个永久间期系统。
唾腺细胞数目不增加，但体积增大，其中每条染色体的常染色质区的核蛋白纤维（染色质纤维）不断复制，多则可达2的10次方至15次方次复制，其复制产物不分开，成千上万条染色质纤维平行而精巧地排列形成一大束宽而长的带状物，称为多线染色体。
由于细胞分裂停止在间期，核物质螺旋化程度低而充分伸展，这种染色体比普通染色体大得多，宽约5um，长约2000um，是其体细胞中期染色体长度的100—200倍。
实验六果蝇唾液腺染色体的观察及制备
实验六果蝇唾液腺染⾊体的观察及制备实验五果蝇唾液腺染⾊体的观察及制备⼀．⽬的1．了解果蝇唾液腺染⾊体的形态学及遗传学特征。
2．习分离果蝇幼⾍唾液腺的技术。
3．掌握唾液腺染⾊体制⽚⽅法。
⼆、原理蝇、摇蚊幼⾍唾液腺细胞中的巨⼤染⾊体。
双翅⽬昆⾍的唾液腺细胞发育到⼀定阶段之后就不再进⾏有丝分裂，⽽永久停留在分裂间期。
但随着幼⾍的⽣长，唾液腺染⾊体仍不断地进⾏⾃我复制⽽且不分开，经过许多次的复制形成约1 000—4 000拷贝的染⾊体丝，合起来直径达5µm，长度达400µm，⽐普通细胞中期染⾊体约⼤100～150倍，所以⼜称为多线染⾊体（polytene chromosome）或巨⼤染⾊体（giant chromosome）。
唾液腺染⾊体的另⼀特点是体细胞中同源染⾊体处于紧密配对状态，这种状态称为“体细胞联会”。
在以后不断的复制中仍不分开，由此成千上万条核蛋⽩纤维丝唾液腺染⾊体（salivary gland chromosome）是⼀类存在于双翅⽬昆⾍，如果结合在⼀起，紧密盘绕。
所以细胞中染⾊体只呈单倍数。
⿊腹果蝇的染⾊体数⽬2n=8其中第Ⅱ、第Ⅲ染⾊体为中部着丝粒染⾊体，第Ⅳ染⾊体和第IX染⾊体为端着丝粒染⾊体。
唾液腺染⾊体形成时，染⾊体着丝粒和近着丝粒的异染⾊质区聚于⼀起形成⼀个染⾊中⼼（chromo-center），所以在光学显微镜下可见从染⾊中⼼处伸出6条配对的染⾊体臂，其中5条为长臂，l条为紧靠染⾊中⼼的很短的臂。
唾液腺染⾊体经染⾊后，呈现深浅不同，疏密各异的横纹（band）。
这些横纹的数⽬，位置，宽窄及排列顺序都具有物种的特异性。
研究认为这些横纹与染⾊体的基因是有⼀定关系的。
通过⼀定的实验⽅法使果蝇唾液腺染⾊体各臂分散开，并且使带纹、膨突等特征不受杂质影响清晰地显⽰出来，是进⾏果蝇遗传学研究的很重要的⼀个环节．果蝇唾液腺染⾊体在不同种间的共同点是染⾊体的着丝点位于⼀个染⾊区域，但不同的种类往往其染⾊体臂数⽬不同．每条染⾊体臂上分布着染⾊深浅不同、粗细各异的磺纹(band)，这些横纹的宽窄疏密程度以及排列顺序和数⽬⼜都有种的特异性和种内的差异．由此，果蝇唾液腺染⾊体近⼏⼗年来，已⼴泛⽤于种内系统发⽣和种间亲缘关系的研究中，因为种间及种内不同品系和近缘种中的遗传差异经常反映在唾液腺染⾊体的不联会、形成泡(puff)、缢虞(constriction)和间带区的伸缩性以及顶体(telomere)的形态等多⽅⾯的差异，⽽特别重要的是研究它的基因序列的差异(观察是否产⽣了例位以及染⾊体的断裂、融合和重排)．因此，⽆论从细胞遗传学的⾓度研究基因与突变性状之间的联系，还是从进化遗传遗传学⽅⾯研究染⾊体的系统发⽣，探讨种间以及近缘种间的遗传差异和⽣殖隔离的机制等，唾液腺染⾊体的分析研究都是⼗分重要的．从其横纹分布特征可对物种的进化特征进⾏⽐较分析，⽽⼀旦染⾊体上发⽣了缺失，重复，倒位。
果蝇唾液腺染色体制备和观察
实验八果蝇唾液腺染色体制备和观察
一、实验目的
1．学习剖取果蝇三龄幼虫唾液腺并制作果蝇唾液腺染色体玻片标本；
2．观察唾液腺染色体结构特征并绘制染色体图；
3．分析果蝇唾液腺染色体结构变化动态。
二、实验准备
（按每实验小组2人准备）
1．仪器
显微镜1台、解剖镜1台、培养箱1台（通用）、消毒锅1台（通用）、冰箱1（通用）、干燥箱1（通用）
2．器械均放在小磁盘内）
镊子2、解剖针2、玻片架1、广口瓶2、玻璃板（10×10cm）2、
3．药品（2人一套）
醋酸洋红、1mol HCl、生理盐水、二甲苯（通用）[均分装在60ml滴瓶]、蒸馏水10L（通用）
4．耗材
载玻片4、盖玻片6、滤纸2、擦镜纸1本（通用）、棉花、纱布、果蝇培养基
5．材料
大果蝇（常年培养）
三、实验原理
果蝇唾液腺染色体特征：
1．同源染色体在体细胞联会配对，
2．染色体只复制，不分裂，导致染色体非常大。
3．染色体上有许多带纹（螺旋紧密区）
4．所有的染色体着丝粒都聚集在一起。
四、实验步骤
大果蝇低温高糖饲养→三龄幼虫→生理盐水洗涤→在玻片上滴半滴水放果蝇幼虫→拉唾液腺→在解剖镜下辨认唾液腺→清除杂质→洋红染色30min（搅拌）→盖盖片→覆盖滤纸→带液速压→吸余液→低倍观察→高倍绘图
五、作业
1．绘果蝇唾液腺染色体图。
遗传学实验实验九 果蝇唾腺染色体标本的制备与观察
三. 实验材料、器具及试剂 黑腹果蝇的三龄幼虫； 显微镜、培养皿、载玻片、盖玻片、镊子、大
头针、刀片、擦镜纸、吸水纸； 生理盐水、改良苯酚品红染液、1mol/L盐酸。
四. 步骤和方法 1．幼虫的培养
（1）配制良好的培养基：含水量较高，营养丰富，发 酵良好。 （2）补加酵母液 （3）控制幼虫的密度：一般要求每cm2培养基表面20～ 40只幼虫左右。 （4）控制培养的温度：一般15℃～18℃较为合适。
2．唾腺的解剖 选取三龄幼虫放在盛有生理盐水小培养皿中，洗
去虫体身上杂物，再将幼虫转到载玻片上，加半滴生理 盐水。在双目解剖镜下，左手持大头针按住幼虫的后 1/3处，右手持大头针压住幼虫头部并向外拉，这样可 将一对半透明的袋状唾腺拉出。
3．酸处理 剥离唾腺周围的脂肪体，加一滴1mol/L盐酸处理
2-3分钟，目的在于松软组织和有利于着色。
解剖腺 脂肪体
4．染色 吸掉多余的盐酸，用水洗净后，滴加染料，染
色10分钟左右。当腺体被染成红色后，即可盖上盖片 进行压片。
5．观察 果蝇的染色体2n=8。其中2对V型，1对点状，
X染色体呈棒状，Y染色体J型。由于在体联会的同时， 所有染色体的着丝点区连在一起，构成染色中心。所 以，在良好的制片中，可以看到5条长臂（X，2L， 2R，3L，3R）和1条短臂从中央向四周伸展的图象。
•
果 蝇 唾 腺 染 色 体
六. 作业 绘出你所看到的果蝇唾腺染色体图像。
实验八 果蝇唾腺染色体标本 的制备与观察
一. 实验目的 1. 练习剖离果蝇三龄幼虫的唾
腺，压制唾腺染色体玻片标本的 方法
2.了解果蝇唾腺染色体的形态 学及遗传学特征
二. 实验原理 果蝇唾腺染色体是处于体细胞同源染色体的配对
2. 果蝇唾腺染色体的制备与观察
实验果蝇唾腺染色体的制备与观察一、实验目的1. 练习分离果蝇幼虫唾腺的技术，学习唾腺染色体的制片方法2. 观察了解果蝇唾腺染色体的形态学及遗传学特征二、实验原理1．果蝇是双翅目昆虫，幼虫期具有很大的唾腺细胞，其中的染色体是巨大的唾液腺染色体；2．唾液腺染色体不断地进行自我复制而不分开，经过许多次的复制形成约1000～4000拷贝的染色体丝，合起来达5mm宽，400mm长，比普通中期相染色体大得多（约100～150倍），所以又称为多线染色体；3．唾液腺染色体具有许多重要特征，为遗传学研究的许多方面，如染色体结构、化学组成、基因差别表达等提供了独特的研究材料。
三、实验材料与器具•三龄幼虫•0.9%生理盐水•改良苯酚品红 1N盐酸•解剖镜解剖针吸水纸四、实验步骤(1)剥离唾腺在一干净的载玻片上滴一滴生理盐水，选择行动迟缓、肥大、爬在瓶壁上即将化蛹的三龄幼虫，或者选择经低温处理的果蝇三龄幼虫置于载玻片上。
每只手各持一个解剖针，在解剖镜下进行操作。
果蝇的唾腺位于幼虫体前1/3-1/4处，左手持解剖针按压住虫体后端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫头部口器部位，适当用力向右拉唾腺腺体随之而出。
唾腺是一对透明的棒状腺体，外有白色的脂肪组织（不透明）。
去除幼虫其它组织部分，并把唾腺周围的白色脂肪剥离干净。
(2)染色：吸去生理盐水，注意操作时要边观察边吸湿，最好用解剖针轻压，防止连同唾腺一起吸走；滴加胭脂红染色液，染色20-30min(3)压片：染色完成后，盖上干净的盖片，并覆一层滤纸。
将片子放在实验台上，用大拇指均匀用力压片。
（注意不要使盖片移动。
）(4)观察：1、将制片置低倍镜下找到分散好的标本，移至视野中心，然后转到高倍镜下观察。
2、对分散良好、染色体臂充分伸展的片子，应仔细观察染色体的横纹数量、形状和排列顺序，对照模式照片辨认出不同的染色体臂五、注意事项1. 一定加生理盐水，否则唾腺易干。
2. 将脂肪组织清除干净3. 水不可太多，否则幼虫会漂浮而且活跃4. 染色时间不可过长，否则背景也着色5. 压片时要揉，用力要均匀6. 染色完以后，将旧的染色液吸去，加新的染色液，再压片7. 吸水时勿将唾腺一起吸走六、实验结果七、分析讨论1.请画一个有代表性的果蝇唾腺染色体图。
果蝇唾腺染色体的标本制备和观察
果蝇唾腺染色体的标本制备和观察果蝇(Drosophila melanogaster)是生物学研究中常见的模式生物之一，其唾腺染色体是生物学中经常使用的标本之一。
本文将介绍如何制备果蝇唾腺染色体标本，并展示如何观察这些标本。
制备标本材料制备果蝇唾腺染色体标本需要的材料如下：•果蝇成虫•酒精•醋酸•乙醇•0.5% 的乙酸-洋红溶液•1% 的氧化铬酸钾溶液•100% 的甘油•盖片•显微镜步骤1.将成虫放入酒精中，浸泡5分钟至失去活性。
2.用镊子将成虫头部部分取下，然后将其剪开，将唾液腺取出。
3.将唾液腺置于醋酸中浸泡2分钟，然后转移到乙醇中浸泡2分钟，最后放入1%的氧化铬酸钾溶液中浸泡1-2分钟。
4.从氧化铬酸钾溶液中将唾液腺转移到100%的甘油中浸泡1-2分钟，以使其变色，然后将其取出，并放入盖片上。
5.加入0.5%的乙酸-洋红溶液，然后用另一个盖片覆盖，压扁唾液腺。
6.将盖片放入显微镜，用40倍或100倍放大倍数观察。
观察标本染色体结构果蝇唾腺染色体呈现为极细线状，可根据其结构分为两类：•染色体较长的一端为钩状，称为钩端。
•另一端较短，称为非钩端。
染色体数量成虫染色体数目为8条，如下：•一对#1染色体•一对#2染色体•一对#3染色体•两对#4染色体染色体组成果蝇唾腺染色体由DNA和蛋白质组成，其中蛋白质主要为组蛋白和非组蛋白。
通过以上步骤，我们可以轻松制备果蝇唾腺染色体标本，并通过显微镜观察其结构和数量。
这对于生物学研究和遗传学研究具有重要意义。
果蝇唾腺染色体的标本制备和观实验报告
果蝇唾腺染色体的标本制备和观实验报告
实验目的：
通过制备果蝇唾腺染色体标本，观察果蝇的染色体结构，了解染色体的基本性质和遗
传学规律。
实验材料：
果蝇幼虫、0.5% KCl溶液、氯仿、乙醇、木棒、荧光显微镜。
实验步骤：
1、将果蝇幼虫放入酒精中，使其身体僵硬；
2、用木棒将其身体对称裂开，取出唾腺进行制片；
3、将唾腺放入0.5% KCl溶液中，加热至65℃，使细胞膜破裂；
4、倒入等量的氯仿，轻轻摇匀，放置5-10分钟；
5、离心，移去上层液体，加入冰醋酸铅，固定标本；
6、取出标本，放入70%、95%和绝对乙醇中，依次脱水；
7、将脱水后的标本放在载玻片上，滴上染色液，加热至70℃，并静置5分钟；
8、冲洗并抽干，加入透明胶进行封片；
9、通过荧光显微镜观察唾腺染色体的结构。
实验结果：
在进行染色体标本制备后，通过荧光显微镜观察，果蝇唾腺染色体呈现出沿着中心轴
对称排列、长度相等的形态。
每个染色体被分为两个亚单元，其中有着明显的染色体节间。
每个亚单元又被分成数个不同长度的染色体节，节与节之间也有着清晰可见的连接。
实验结论：
染色体是生物遗传信息的主要携带者，表现出其特定的形态和结构。
通过制备果蝇唾
腺染色体标本，观察了果蝇染色体的基本结构和形态，了解了染色体的基本性质和遗传学
规律。
对于研究生物遗传学以及进行基因工程，染色体的结构和功能有着重要的意义。
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每只手各持一个解剖针，在解剖镜下进行操作。果蝇 的唾腺位于幼虫体前1/3-1/4处，左手持解剖针按压住虫体 后端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫 头部口器部位，适当用力向右拉唾腺腺体随之而出。
唾腺是一对透明的棒状腺体，外有白色的脂肪组织 （不透明）。去除幼虫其它组织部分，并把唾腺周围的白 色脂肪剥离干净。
果蝇唾腺剥离示意图
四、实验步骤(2)
(2)染色： 吸去生理盐水，注意操作时要边观察边吸湿， 最好用解剖针轻压，防止连同唾腺一起吸走；滴加胭 脂红染色液，染色20-30min
(3)压片： 染色完成后，盖上干净的盖片，并覆一层滤纸。 将片子放在实验台上，用大拇指均匀用力压片。（注 意不要使盖片移动。）
一、实验目的
1. 练习分离果蝇幼虫唾腺的技术，学习唾腺染 色体的制片方法
2. 观察了解果蝇唾腺染色体的形态学及遗传学 特征
二、实验原理
果蝇是双翅目昆虫，幼虫期具有很大的唾腺细胞，其 中的染色体是巨大的唾液腺染色体
唾液腺染色体不断地进行自我复制而不分开，经过许 多次的复制形成约1000～4000拷贝的染色体丝，合起 来达5mm宽，400mm长，比普通中期相染色体大得多 （约100～150倍），所以又称为多线染色体
画出所制染色体的形态，大小，并标出明显的横纹特 点。
果 蝇 的 唾 腺 染 色 体
唾液腺染色体具有许多重要特征，为遗传学研究的许 多方面，如染色体结构、化学组成、基因差别表达等 提供了独特的研究材%生理盐水 • 胭脂红染色液 • 解剖镜 解剖针 吸水纸
四、实验步骤(1)
(1)剥离唾腺 在一干净的载玻片上滴一滴生理盐水，选择行动迟缓、
五、注意事项
1. 一定加生理盐水，否则唾腺易干。 2. 将脂肪组织清除干净 3. 水不可太多，否则幼虫会漂浮而且活跃 4. 染色时间不可过长，否则背景也着色 5. 压片时要揉，用力要均匀 6. 染色完以后，将旧的染色液吸去，加新的染色
液，再压片 7. 吸水时勿将唾腺一起吸走
六、实验结果观察
检查你制作的制片，寻找形态良好、分散适中的图象 仔细观察各条臂的特点。