平板菌落计数法操作步骤
菌落总数计数方法
菌落总数计数方法菌落总数计数是一种常见且重要的实验方法，用于评估菌落的数量和密度。
菌落总数计数方法有多种，常见的包括平板计数法、薄层计数法、过滤膜计数法等。
下面将详细介绍这几种方法的原理和步骤。
平板计数法是最常见的菌落总数计数方法之一。
它的原理是将待测菌液均匀涂布在含有固体营养培养基的平板上，通过菌落的生长扩散形成可见的单个菌落，再通过对菌落进行计数并乘以稀释倍数，最后得到待测菌液的菌落总数。
具体步骤如下：1. 准备固体培养基。
根据所要检测菌落的要求，选择适当的培养基并准备好。
固体培养基一般含有琼脂或明胶等物质，可以提供营养物质和支持菌落的生长。
2. 制备合适浓度的菌液。
将待测菌种培养在含有适宜营养物质的液体培养基中，利用培养箱或摇床进行恒温、恒湿的培养，待菌液呈现合适浓度时即可使用。
3. 稀释菌液。
根据待测菌液的预估浓度，将适量的菌液和无菌生理盐水按一定比例进行稀释，以获得合适浓度的菌液。
4. 涂布菌落。
取一定数量的稀释后的菌液，利用灌注器或鱼鳞划线法将菌液均匀涂布在固体培养基的平板上。
为了保证菌液的均匀分布，可以采取旋转、摇动等方法。
5. 培养菌落。
将涂布好的平板置于恒温、恒湿的培养箱中进行培养。
根据菌种的不同，一般在30-37的温度下培养24-48小时。
6. 计数菌落。
在培养好的平板上，通过肉眼或借助显微镜仔细观察菌落的形态、大小、颜色等特征，并使用菌落计数器或放大镜进行计数。
根据菌落的密度和分布情况，可以选择在整个平板上计数，或者在特定区域计数后进行推算。
7. 乘以稀释倍数。
由于菌液在进行稀释时常用不同倍数的生理盐水进行稀释，所以在计算菌落总数时需要将计数结果乘以稀释倍数，以获得准确的结果。
薄层计数法是另一种常见的菌落总数计数方法。
它的原理是将含有待测菌液的液体培养基均匀地倒入培养基皿中，使其能够覆盖整个底面。
待液体凝固后，菌落会在培养基表面生长，并且可以通过视觉或显微镜观察和计数菌落。
平板菌落计数法水中微生物的检测
2、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应 尽快倒培养基，立即摇匀；
3、倾注平板时的培养基温度冷却至45℃左右。 4、计数时，30―300个菌落的稀释度计算每毫升
的菌数最为合适 5、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊
菌落计数方法及原则：
1）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围 时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。
2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30~300之间，则视二者之比值来决定，若 其比值小于2应报告两者的平均数。若大于 或等于2则报告其中较小的菌落总数。
3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300， 则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释 倍数报告之
水中细菌总数的测定
——平板菌落计数法
一、细菌总数测定的意义
水中细菌总数往往同水中有机物污染的程度呈 正相关，它是评价水质污染程度重要指标之一
细菌总数：指水样在一定条件下培养后，1mL水样 所含菌落的总数。
我国生活饮用水标准（GB5749-85）规定，细 菌总数不得超过100个/ml
含细菌10-100个/ml的水体为极清洁
代表性：多采几个部位，液体样品需经过震摇，以 获得均匀稀释液。
2 水样的10倍稀释
第一步 稀释 水样 第二步： 接种平板
注意：稀释 度的选择
平板混合分离法： 将菌液分离样品摇匀，用无菌移液管取1 ml的
菌液移至无菌培养皿中，然后将融化，凉至45℃ 左右的培养基，在每个培养皿内各倒入约15 ml， 摇匀，凝固，制成平板。
4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀 释倍数报告之
平板菌落计数法实验报告
平板菌落计数法实验报告实验目的，通过平板菌落计数法，对水样中的细菌进行定量分析，了解水质的卫生状况。
实验原理，平板菌落计数法是一种常用的微生物计数方法，通过在富营养培养基上培养微生物，并对形成的菌落进行计数，从而得出水样中微生物的数量。
该方法适用于水质、食品等样品的微生物检测。
实验步骤：1. 准备工作，将所需培养基熔化并冷却至50℃左右，准备好平板培养皿和移液器等实验器材。
2. 取样，用无菌容器收集待检测水样。
3. 操作，将水样进行稀释，取适量的稀释液分别均匀涂布在不同的培养皿上，然后在培养箱中进行培养。
4. 计数，培养一定时间后，观察培养皿上形成的菌落数量，进行计数并记录。
实验结果：经过培养后，观察到水样中形成了多个菌落，根据计数结果，得出水样中微生物的数量为XXX CFU/mL（CFU，菌落形成单位）。
实验分析：根据实验结果，可以初步判断水样的卫生状况。
若菌落数量较少，说明水质较好；若菌落数量较多，可能存在污染或者不洁净的情况。
通过对不同水样的比较分析，可以进一步了解水质的情况，并采取相应的改善措施。
实验结论：通过平板菌落计数法的实验，我们成功地对水样中的微生物数量进行了定量分析，得出了初步的水质卫生状况。
这为我们提供了一种简便、有效的水质检测方法，对于监测和改善水质具有一定的指导意义。
实验注意事项：1. 实验中需要注意无菌操作，避免外界微生物的污染。
2. 培养皿在培养过程中需要避免受到外界的震动和振动。
3. 实验结束后，实验器材需要进行严格的消毒和清洁。
实验改进方向：1. 可以尝试不同的培养基和培养条件，以获得更准确的菌落计数结果。
2. 可以尝试将实验方法应用于其他样品的微生物检测，如食品、空气等。
总结：平板菌落计数法是一种简单、快速的微生物定量分析方法，对于水质、食品等样品的微生物检测具有重要的意义。
通过实验，我们可以更好地了解水样中微生物的数量，为保障公共卫生和食品安全提供有力的支持。
平板菌落计数法名词解释
平板菌落计数法名词解释
平板菌落计数法是一种常用的微生物计数方法，用于测定样品中微生物的数量。
下面将对每个步骤进行详细的名词解释：
1. 样品处理：在进行平板菌落计数前，需要对样品进行处理。
样品处理包括对样品的粉碎、研磨、匀浆等操作，以使样品中的微生物充分分散。
2. 培养基制备：平板菌落计数需要使用特殊的培养基，以便为微生物提供适宜的生长环境。
培养基制备包括按照一定的配方和比例将各种成分混合在一起，制备出适合微生物生长的培养基。
3. 接种：将处理过的样品接种到培养基上，以便使样品中的微生物在培养基上生长繁殖。
接种时需要保证样品均匀地分布在培养基上，并确保无菌操作以避免污染。
4. 培养：将接种后的培养基放置在适宜的温度和湿度条件下进行培养。
在培养过程中，微生物会在培养基上生长繁殖，形成肉眼可见的菌落。
5. 计数：在培养一定时间后，对培养基上的菌落进行计数。
计数时需要注意区分不同种类的菌落，并根据菌落的形态、大小、颜色等因素进行分类和统计。
6. 计算：最后，根据统计的菌落数量和稀释倍数，计算出样品中微生物的数量。
通过以上步骤，可以准确地测定样品中微生物的数量。
平板菌落计数法广泛应用于食品、药品、环境等领域的质量控制和卫生检测等方面。
细菌计数方法实验报告
一、实验目的1. 掌握细菌计数的基本原理和方法。
2. 了解不同细菌计数方法的优缺点。
3. 培养实验操作技能，提高实验数据处理和分析能力。
二、实验原理细菌计数是微生物学研究中的一项基本技能，常用的细菌计数方法有直接计数法、活菌计数法和间接计数法等。
本实验主要介绍平板菌落计数法（CFU法）和显微镜直接计数法。
1. 平板菌落计数法（CFU法）：将样品进行稀释，涂布在固体培养基上，培养一定时间后，根据培养皿上生长的菌落数来推算样品中的细菌数量。
2. 显微镜直接计数法：将样品进行稀释，用计数板或计数仪直接计数，根据计数室内的细菌数来推算样品中的细菌数量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：大肠杆菌菌液、牛肉膏蛋白胨培养基、生理盐水、计数板、显微镜、移液器、培养箱等。
2. 实验仪器：培养皿、移液器、酒精灯、镊子、无菌操作台、培养箱、显微镜等。
四、实验步骤1. 平板菌落计数法（CFU法）：（1）将牛肉膏蛋白胨培养基倒入培养皿，制成平板。
（2）用移液器吸取适量的大肠杆菌菌液，进行一系列的倍比稀释。
（3）用无菌镊子取适量稀释液，涂布在平板上。
（4）将平板倒置放入培养箱，培养一定时间。
（5）计算平板上生长的菌落数，根据稀释倍数计算样品中的细菌数量。
2. 显微镜直接计数法：（1）将牛肉膏蛋白胨培养基倒入计数板，制成涂片。
（2）用移液器吸取适量的大肠杆菌菌液，进行一系列的倍比稀释。
（3）用移液器吸取适量稀释液，滴加在计数板的计数室上。
（4）将计数板置于显微镜下，观察计数室内的细菌数。
（5）根据计数室内的细菌数和稀释倍数计算样品中的细菌数量。
五、实验结果与分析1. 平板菌落计数法（CFU法）：（1）稀释倍数：10^-4（2）菌落数：30（3）样品中的细菌数量：30 × 10^4 = 3 × 10^52. 显微镜直接计数法：（1）稀释倍数：10^-3（2）计数室内的细菌数：200（3）样品中的细菌数量：200 × 10^3 = 2 × 10^5实验结果表明，两种细菌计数方法得到的样品中的细菌数量基本一致，说明实验结果准确可靠。
平板菌落计数法
2．稀释
用1ml无菌吸管精确地吸取1mL原菌悬液放入10-2的三 角瓶中，注意吸管尖端不要碰到液面，以免吹出时，容 器内液体外溢。然后仍用此吸管将瓶内悬液来回吸吹三 次，吸时伸入管底，吹时离开水面，使其混合均匀。另 取一支吸管自10-2三角瓶中吸1mL放入10-3试管中，吸吹
三次，……其余依次类推。整个稀释过程如图。
灭菌:轮流值守 摆放斜面试管:
土壤及细菌原液稀释:土壤稀释分离
倒平板:每人3个,分离用2个,计数用1个.
接种:平板菌落计数每人一只平板.土壤稀释分离:
每人划2个平板,放线菌和霉菌各一个. 培养:细菌37℃;放线菌,霉菌28℃(分开放置) 观察,分离和计数:平板菌落计数48小时后;放线菌和霉
菌接种3天后开始 形态观察:一周后.
殊，如相差较大，表示试验不精确。
配制（每组400mL） 第一台:牛肉膏蛋白胨固体培养基: 平板菌落计数法
用.
第二台:高氏一号固体培养基: 分离放线菌 第三台:土豆蔗糖培养基: 分离霉菌
分装:三角瓶(装99mL水(加玻璃珠)，每台1只) 斜面试管(装土豆蔗糖培养基,每人2只) 稀释用试管(事先装无菌水4.5mL,每组3只) 相关材料.
3．取样
用4支1mL无菌吸管分别精确地吸取10-5、10-6、10-7、 10-8的稀释菌液1ml，对号放入编好号的无菌培养皿中。
4．倒平板
于上述盛有不同稀释度菌液的培养皿中，倒入溶化 后冷却至45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基约10— 15mL，置水平位置，迅速旋动混匀，待凝固后，倒 置于37℃温室中培养。
一、目的要求
学习平板菌落计数的基本原理和方法。
二、基本原理
平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基 上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成 的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个 单细胞。计数时，先将待测样品作一系列稀释， 再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其 均匀分布于平皿中的培养基内，经培养后，由 单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目， 即可换算出样品中的含菌数。
显微镜直接计数和平板菌落计数
测定结果误差较大、操作比较烦琐、需要的时间较长。
三、主要器材
1. 活材料：啤酒酵母（S6） 、 解脂假丝酵 母（S5）
2. 染色液：复红染色液（或结晶紫，美兰） 3. 器材：显微镜、血球计数板、载玻片、 盖玻片 、擦镜纸、吸水纸、计数器、滴管、 无菌吸管、无菌培养皿、马铃薯葡萄糖培养 基。
实验八 微生物显微镜直接计数
和平板菌落计数
一. 实验目的
1. 学习、掌握显微镜直接计数法和平板菌 落计数法； 2. 了解血球计数板的构造、计数原理和计 数方法，掌握显微镜下直接计数的技能。
二、实验原理
测定微生物细胞数量的方法很多，通 常采用的有显微镜直接计数法和平板菌落 计数法。
（一）显微镜直接计数法
后要尽快倒入冷至45℃左右的培养基15 ml ，并迅速旋转混匀。否则，菌体会 吸附在皿底，不易分散形成单菌落。
（二）平板菌落计数法 1. 编号 将平皿和试管分别标记浓度。 2. 稀释样品 将酵母菌样品进行适当稀释。 3. 取样 用无菌吸管准确吸取10-4、 10-5、 10-6稀释菌液各1 ml，放0.2 ml 于无菌平皿。 4. 倒平板 于上述平皿中尽快倒入融化并 冷却到45℃左右的培养基15 ml ，旋转混匀。 5. 计数 培养48 h后取出培养皿，算出同一 稀释度的三个平皿中平均菌落数，再按公 式计算每毫升样品中活菌数。
平板菌落计数法示意图
五、实验报告
（一）实验结果 1. 将直接计数结果记录于表中。 2. 将平板菌落计数结果记录于表中。
（二）思考题 某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌
存活率，请设计1-2种可行的检测方法。
六．注意事项
1．计数器必须洗干净，勿刷 ； 2. 千万注意勿损坏计数器 。 3. 平板菌落计数时，测定样品移入培养皿
cas 琼脂平板法
cas 琼脂平板法CAS琼脂平板法概述CAS琼脂平板法是一种常用的微生物菌落计数方法，用于检测食品、药品、环境等样品中的微生物污染情况。
本文将介绍CAS琼脂平板法的原理、操作步骤以及注意事项。
一、原理CAS琼脂平板法是基于琼脂平板法发展起来的一种微生物菌落计数方法。
其原理是利用CAS琼脂培养基中的柠檬酸铁盐与细菌产生的外源性胞内酶反应，形成深蓝色或黑色菌落。
通过计数菌落的数量，可以确定样品中的微生物数量。
二、操作步骤1. 准备琼脂培养基：将CAS琼脂培养基按照说明书配制好，煮沸消毒后冷却至50℃左右。
2. 样品处理：将待检样品进行适当稀释，以确保菌落的数量在可计数范围内。
一般建议进行10倍到100倍的稀释。
3. 平板接种：将稀释好的样品取1ml接种于CAS琼脂平板上，均匀涂布。
4. 培养：将接种好的平板倒置放置于恒温培养箱中，温度为30-37℃，培养时间一般为24-48小时。
5. 计数：在培养箱中观察平板上的菌落，选择典型的单个菌落进行计数。
根据菌落的形状、颜色和大小等特征，可以初步判断菌落的种类。
6. 计算：根据所选菌落的数量以及稀释倍数，计算出样品中的微生物数量。
三、注意事项1. 操作环境要清洁，避免外界微生物污染样品。
2. 每个样品都应进行平板对照，以便排除背景菌落的干扰。
3. 在接种平板时要注意均匀涂布，避免菌落过于密集。
4. 培养箱的温度和时间要根据所检测的微生物种类进行调整，确保菌落的生长。
5. 在计数时要仔细观察，排除菌落重叠或异常的情况。
6. 根据实际情况，可以选择不同的稀释倍数，以确保菌落数量在可计数范围内。
结论CAS琼脂平板法是一种简单、快速、可靠的微生物菌落计数方法。
通过该方法，可以准确地检测样品中的微生物污染情况，为食品、药品、环境等领域的质量控制提供科学依据。
在实际应用中，我们还应结合其他检测方法和标准，综合评估样品的微生物质量，并采取相应的控制措施，确保产品的安全性和卫生质量。
菌落总数cfu计算方法例子
菌落总数cfu计算方法例子菌落总数(CFU)计算方法本文将介绍常用的菌落总数(CFU)计算方法，并提供一些例子供参考。
1. 简介菌落总数是微生物检测中常用的指标之一，用于评估样品中的微生物数量。
一般使用平板计数法来进行菌落总数的计算。
2. 平板计数法平板计数法是通过将待测样品均匀涂布在富养液固化培养基的培养皿上，然后在适宜的条件下进行培养，最后通过观察和计数培养皿上的菌落来确定菌落总数。
实验操作步骤1.准备所需培养基和培养皿。
2.将待测样品进行适当稀释，以确保菌落数量适中。
3.取一定体积的待测样品并均匀涂布在培养皿上。
4.将培养皿倒置放置在恒温培养箱中，进行培养。
5.培养一定时间后，取出培养皿进行菌落观察和计数。
CFU计算方法菌落形成单位(CFU)是指每个培养皿上所观察到的独立典型菌落的数量。
根据菌落的数量和所取样品的稀释倍数，可以计算出菌落总数。
计算公式为：CFU/mL = (菌落计数 × 稀释倍数) / 取样体积3. 示例下面是一些菌落总数计算的示例：示例 1假设某实验室对某种食品中的大肠杆菌进行菌落总数检测。
首先，从食品中取出1 mL的样品，然后稀释100倍。
在培养皿上观察到的菌落数量为180个。
根据上述计算公式，可以进行如下计算：CFU/mL = (180 × 100) / 1 = 18000 CFU/mL因此，该食品中的大肠杆菌菌落总数为18000 CFU/mL。
示例 2假设某实验室对某种水样进行菌落总数检测。
首先，从水样中取出1 mL进行10倍的稀释。
在培养皿上观察到的菌落数量为25个。
根据上述计算公式，可以进行如下计算：CFU/mL = (25 × 10) / 1 = 250 CFU/mL因此，该水样中的菌落总数为250 CFU/mL。
结论菌落总数(CFU)计算方法是一种常用的微生物数量评估方法，通过平板计数法及相关计算公式可以得出准确的菌落总数。
在实际检测中，应根据样品的特点选择适当的稀释倍数和取样体积，以保证计算结果的准确性。
平板菌落计数法操作步骤
平板菌落计数法操作步骤平板菌落计数法⼀、⽬的要求学习平板菌落计数的基本原理和⽅法。
⼆、基本原理平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后，其中的微⽣物充分分散为单个细胞，取⼀定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞⽣长繁殖⽽形成的⾁眼可见的菌落，即⼀个单菌落应代表原样品中的⼀个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的⼀个单菌落也可能来⾃样品中的2~3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
现在常使⽤菌落形成单位。
该计数法的缺点是操作较繁，结果需要培养⼀段时间才能取得，⽽且测定结果易受多种因素的影响，但是这种计数⽅法最⼤的优点是可以获得活菌的信息，所以被⼴泛⽤于⽣物制品检验，以及⾷品、饮料和⽔等含菌指数或污染度的检测。
三、器材⼤肠杆菌悬液，LB琼脂培养基，1mL、5mL⽆菌吸管，⽆菌平⽫，⽆菌⽔，⽆菌试管，试管架和记号笔等。
四、操作步骤1、编号取⽆菌平⽫9套，分别标明为10-4、10-5、10-6各三套，另取6⽀⽆菌试管分别标记为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
2、稀释⽤1mL⽆菌吸管吸取1mL已充分混匀的⼤肠杆菌菌悬液，精确地放0.5mL⾄10-1的试管中，此即为10倍稀释，将多余的菌液放回原菌液中。
将10-1试管充分振荡、混匀。
另取⼀⽀1ml吸管插⼊10-1试管中来回吹吸菌液三次，进⼀步将菌体分散、混匀。
动作不要太猛太快，吸时插⼊，吹时提出，再⽤此吸管吸取10-1菌液1mL，精确地放0.5mL⾄10-2试管中，此即为100倍稀释，依次类推，3、取样⽤三⽀1ml⽆菌吸定分别吸取10-4、10-5、10-6的稀释菌悬液各1mL，对号放⼊编好号的⽆菌平⽫中，每个平⽫放0.2mL4、倒平板尽快向上述盛有不同稀释菌液的平⽫中倒⼊融化后冷却⾄45度的LB培养基约15-20ml，置⽔平位置迅速旋动平⽫，使培养基与菌液混合均匀。
平板计数的实验原理
平板计数的实验原理
平板计数法是一种实验室中常用的微生物计数方法，其原理是将待测微生物悬液均匀地铺在已知面积的平板上，通过培养基培养和观察，计算出在平板上生长的微生物菌落的数量。
平板计数法的具体操作步骤如下：
1.准备好含有适当营养物质的培养基，如大肠杆菌专用营养琼脂（LB）培养基。
2.将待测微生物悬液通过适当的稀释方法，制备出不同浓度的悬液。
一般要制备出大约3个数量级的浓度，即10^-5、10^-6和10^-7等。
3.将每一个稀释液用吸管吸取一定量，滴在分别标号好的平板上。
然后用灭菌的玻璃棒将悬液铺平，使液体均匀分布在平板上，使得每个平板上菌落的大小和形态的变化均匀。
4.将培养皿倒置放在培养箱中，进行恰当的孵育，使其在适宜的环境中生长繁殖。
具体的条件由不同微生物的生长需求而定。
5.观察每个平板上的微生物的生长情况，计算出每个平板上菌落的数量。
6.利用平均数等方法，计算出每毫升原液中微生物的数量。
平板计数法的优点是简单易行，操作方便，能直接观察和计数微生物的数量，结果比较准确。
不过，平板计数法并不适用于细胞形态、大小、生长速度和密度不同的微生物。
此外，平板计数法所得到的是可生长的菌落形式和数量，不能反映微生物在液体中的真实数量。
菌落总数测定实验步骤
菌落总数测定实验步骤
菌落总数测定实验的步骤如下：
1. 准备所需材料和试剂：琼脂培养基、试管、乳酸菌平板、移液器、消毒液等。
2. 将琼脂培养基溶解并熔化，待稍微冷却至37℃左右。
3. 取一定量的菌液，一般可采用10倍稀释法，将菌液加入含有适量琼脂培养基的试管中，彻底混合均匀。
4. 将加有菌液的琼脂培养基倒入乳酸菌平板中，待凝固。
5. 将已经凝固的乳酸菌平板倒置，放入孵化箱中，以37℃恒温培养。
6. 培养时间通常为24-48小时，视具体菌种而定。
7. 从孵化箱中取出培养好的乳酸菌平板，将菌落数目较多且分散的平板选取，以避免菌落过于密集而无法清楚计数。
8. 使用显微镜或肉眼观察，使用计数板或计数器，对菌落进行计数，记录下每个平板上的菌落总数。
9. 根据实验设计的需要，可以进行平均数的计算和数据的统计分析。
10. 实验结束后，用消毒液彻底清洗实验器材，并正确处置菌
液和培养平板。
注意事项：
- 操作过程中应注意无菌操作，避免外部污染。
- 实验室内需要保持清洁卫生，定期消毒工作台和实验室器材。
- 孵化过程中需要注意温度和时间的控制，避免过渡时间或温
度过高导致菌落生长异常。
- 菌落计数时需要仔细观察，避免漏计或重复计数。
- 实验结束后，遵守实验室规定的废弃物处理要求，确保安全
环保。
微生物的平板菌落计数法
<实验十三微生物的平板菌落计数法>一、实验目的学习微生物的平板计数法。
二、原理概述微生物的稀释平板计数是根据在固体培养基上所形成的一个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成，且肉眼可见的子细胞群体这一生理及培养特征进行的。
也就是说一个菌落即代表一个单细胞。
计数时，首先将待测样品制成均匀的一系列不同稀释液，并尽量使样品中的微生物细胞分散开来，使成单个细胞存在( 否则一个菌落就不只是代表一个菌 ) ，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。
经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数，一般用于某些成品检定 ( 如食品等 ) 、生物制品检定、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检定。
三、实验器材1 、待测样品、所需各类培养基2 、天平、称样瓶、记号笔、容量瓶、无菌生理盐水、 1ml 和 5ml 无菌移液管、无菌平板、无菌试管四、操作步骤和内容1 、样品稀释液的制备准确称取待测样品 10g 或 10ml ，放入装有 90ml 无菌水并放有小玻璃珠的 250mL 三角瓶中，用手或置摇床上振荡 20min ，使微生物细胞分散，静置约 20-30s ，即成 10 -1 稀释液；再用 1ml 无菌吸管，吸取 10 -1 稀释液 1ml 移入装有 9ml 无菌水的试管中，吹吸 3 次，让菌液混合均匀，即成 10 -2 稀释液；再换一支无菌吸管吸取 10 -2 菌液 1mL 移入装有 9ml 无菌水试管中，即成 10 -3 稀释液；以此类推，一定要每次更换吸管，连续稀释，制成 10 -4 、 10 -5 、 10 -6 、 10 -7 、 10 -8 等一系列稀释度的菌液，供平板计数使用 ( 如图 13 － 1) 。
图 13 － 1 平板计数法中样品的稀释和稀释液的取样用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。
平板菌落计数法实验报告
平板菌落计数法实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过平板菌落计数法，对某一样本中的细菌菌落进行计数，从而了解样本中细菌的数量及种类，为后续的实验研究提供数据支持。
二、实验原理。
平板菌落计数法是一种常用的微生物计数方法，其原理是将待测样品均匀涂布在富含营养物质的琼脂平板上，培养一定时间后，观察并计数菌落形成的数量，进而推算出原始样品中微生物的数量。
三、实验步骤。
1. 准备工作，将琼脂平板均匀加热至液态，然后冷却至45-50摄氏度；2. 取样，使用无菌技术取得待测样本；3. 涂布，将待测样本均匀涂布在琼脂平板表面；4. 培养，将涂布好的琼脂平板放置在恒温培养箱中，以适当的温度和时间进行培养；5. 计数，观察培养后的琼脂平板上的菌落情况，使用计数器进行菌落计数；6. 结果记录，记录菌落数量，并进行数据统计和分析。
四、实验数据。
经过实验观察和计数，得出样本中细菌菌落数量为XXX个/平板。
五、实验结果分析。
通过本次实验，我们得出了样本中细菌菌落的数量，这将有助于我们对该样本的微生物特性进行进一步研究。
同时，通过对不同样本进行平板菌落计数法的比较，还可以了解不同样本中微生物的差异，为微生物学研究提供更多的数据支持。
六、实验注意事项。
1. 实验过程中需严格遵守无菌操作规范，以避免外部细菌的污染；2. 涂布样本时，需确保样本的均匀涂布，避免出现局部过多或过少的情况；3. 培养过程中，需保持恒温箱的恒温和湿度，避免对细菌生长的影响；4. 实验结束后，需对实验器材进行消毒处理，以防止实验后的交叉污染。
七、实验结论。
通过本次实验，我们成功地利用平板菌落计数法对样本中的细菌菌落进行了计数，并得出了相应的数据结果。
这为我们后续的微生物学研究提供了重要的数据支持，也为我们对样本中微生物特性的了解提供了有力的依据。
八、参考文献。
1. XXX，XXX. 微生物学实验指导. 北京，科学出版社，20XX.2. XXX，XXX. 微生物学实验技术手册. 上海，上海科学技术出版社，20XX.以上就是本次实验的实验报告，谢谢阅读。
平板菌落计数法操作步骤(精)
平板菌落计数法操作步骤(精)
平板菌落计数法是一种可以用来测定悬浮液中的菌落总数以及形成菌落的种类的微生物学分析方法。
它通常被用来评估牛奶、酒精发酵物、汤、和其它类似的系统的微生物活性的估计。
平板菌落计数法的步骤一般为：
1、准备样品：将根据样品的类型，制定合适浓度、保存适宜的培养基；
2、消耗样品：根据下联试验结果，将样品消耗在培养基中；
3、载体准备：准备一个混合培养剂载体，在此载体上种植样品，以便能够有效进行培养；
4、培养：将种植好的平板载体放入带有适宜温度的培养箱中培养，按照适定的培养时间培养；
5、观察计数：将培养好的载体放入显微镜底座下进行显微观察，根据观察结果，对形成的菌落进行计数；
6、计算：根据样品的量，和所观察的菌落总数，对每升份的大菌落进行计算，以求出平板菌落总数。
7、结果分析：根据测得的平板菌落总数，进行比较测试及结果分析，从而判断样品微生物活性情况。
平板计数法的具体步骤
细菌培养的具体步骤（1个水槽计）1、灭菌：将包扎好的培养皿和试管在0.1MPa，121°C，20分钟高压蒸汽灭菌；将海水和配制好的培养基灭菌；将移液器和枪头一同放入高压蒸汽锅内灭菌。
全程要在无菌室内操作，再倒入培养基时要瓶口保持对着火焰。
2、编号：取无菌培养皿15套，分别用记号笔标明10 -4，10-5,10-6,10-7,10-8,10-9（稀释度）各3套。
另取9支盛有9.0mL无菌水的试管，依次标有10-1~10-9。
3、稀释：用移液枪取1.0mL样品液加入标有10 -1字样的试管中，此为10倍稀释，并用此溶液多次冲洗此枪头，使之充分混匀。
再从 10 -1溶液中吸取1.0mL溶液准确放入标有10 -2试管中此为稀释100倍……其余以此类推。
每操作一次换一个枪头。
4、取样：用5个枪头分别吸取标有 10-5,10-6,10-7,10-8,10-9稀释液各0.2mL。
加入相应的培养皿中间。
每个梯度设置3个平行实验组。
5、倒平板：尽快向上述盛有不同稀释度菌液的培养皿中倒入熔化后冷却至45°C左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基约15mL，静置水平位置迅速转动培养皿，使培养基和菌液混合均匀（转动时不宜用力过度，否则会使培养基荡出培养皿或是溅到培养皿盖上）。
待培养基凝固后，将平板倒置于30℃恒温培养箱中培养。
注意：由于细菌易吸附在玻璃器皿表面，所以菌液加入到培养皿后，应尽快倒入熔化后冷却至45°C左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，立即摇匀。
否则，细菌将不易分散或长成菌落连在一起，不易计数。
6、计数：培养48小时后取出培养皿，根据统计的菌落数，计算出同一稀释度3个平板上的菌落平均数，按下列公式计算：每毫升样品中菌落形成的单位数（CFU）=同一稀释度3次重复的平均菌落数×稀释倍数×50 一般选取平板上长有30—300个菌落的培养皿计算每毫升含菌量较为合适，同一稀释度的3个重复平板上菌落数应相差不大，否则标明不准确。
平板菌落计数法
平板菌落计数法(一)目得要求学习平板菌落计数得基本原理与方法。
(二)基本原理平板菌落计数法就是将待测样品经适当稀释之后,其中得微生物充分分散成单个细胞,取一定量得稀释样液接种到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见得菌落,即一个单菌落应代表原样品中得一个单细胞、统计菌落数,根据其稀释倍数与取样接种量即可换算出样品中得含菌数。
但就是,由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞,所以,长成得一个单菌落也可来自样品中得2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数得结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数得结果,现在已倾向使用菌落形成单位(cｏlony－ｆormiｎg uｎits,ｃfu)而不以绝对菌落数来表示样品得活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁,结果需要培养一段时间才能取得,而且测定结果易受多种因素得影响,但就是,由于该计数方法得最大优点就是可以获得活菌得信息,所以被广泛用于生物制品检验(如活菌制剂),以及食品、饮料与水(包括水源水)等得含菌指数或污染程度得检测、(三)器材1.菌种大肠杆菌菌悬液、2、培养基牛肉膏蛋白陈培养基、３.仪器或其她用具１mL无菌吸管,无菌平皿,盛有4.5ml无菌水得试管,试管架,恒温培养箱等、(四)操作步骤ｌ.编号取无菌平皿9套,分别用记号笔标明10—4、10—5、10－6。
(稀释度)各3套。
另取6支盛有4。
5mL无菌水得试管,依次标就是１０-1、10-2、10－3、10－４、10—5、1０—6。
2.稀释用lmL无菌吸管吸取ｌmL已充分混匀得大肠杆菌菌县液(待测样品),精确地放０、5mL至10-1得试管中,此即为1０倍稀释。
将多余得菌液放回原菌液中。
将10－1试管置试管振荡器上振荡,使菌液充分混匀。
另取一支ｌmｌ吸管插入10 1试管中来回吹吸菌悬液三次,进一步将菌体分散、混匀、吹吸菌液时不要太猛太快,吸时吸管伸人管底,吹时离开液面,以免将吸管中得过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢。
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平板菌落计数法
一、目的要求
学习平板菌落计数的基本原理和方法。
二、基本原理
平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后,其中的微生物充分分散为单个细胞,取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞,所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2~3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
现在常使用菌落形成单位。
该计数法的缺点是操作较繁,结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响,但是这种计数方法最大的优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验,以及食品、饮料和水等含菌指数或污染度的检测。
三、器材
大肠杆菌悬液,LB琼脂培养基,1mL、5mL无菌吸管，无菌平皿,无菌水,无菌试管,试管架和记号笔等。
四、操作步骤
1、编号
取无菌平皿9套，分别标明为１0－4、10－５、1０－6各三套，另取6支无菌试管分别标记为10－1、10－2、10－３、１0-4、10-５、10-６。
2、稀释
用１mL无菌吸管吸取1mＬ已充分混匀的大肠杆菌菌悬液,精确地放0.５mＬ至
10-1的试管中,此即为10倍稀释,将多余的菌液放回原菌液中。
将10-1试管充分振荡、混匀。
另取一支１ｍl吸管插入１0-1试管中来回吹吸菌液三次,进一步将菌体分散、混匀。
动作不要太猛太快,吸时插入,吹时提出，再用此吸管吸取１0-１菌液1mＬ，精确地放0.５ｍL至1０-２试管中,此即为100倍稀释，依次类推，
3、取样
用三支1ml无菌吸定分别吸取10-4、10-5、１０-6的稀释菌悬液各1mL,对号放入编好号的无菌平皿中，每个平皿放0.2mＬ
4、倒平板
尽快向上述盛有不同稀释菌液的平皿中倒入融化后冷却至4５度的LB培养基约1５－２０ml,置水平位置迅速旋动平皿，使培养基与菌液混合均匀。
5、培养
倒置于37度培养箱中培养48小时，
6、计数
算出同一稀释度三个平板上的菌落平均数,并按下列公式进行计算；
每毫升中菌落形成单位（cfｕ)＝同一稀释度三次重复的平均菌落数×稀释倍数×5
五、实验报告
1、结果
将培养后菌落计数结果填入下表:
2、思考题
(1）为什么溶化后的培养基要冷却至４5℃左右才能倒平板？
(２)要使平板菌落计数准确,需要掌握哪几个关键?为什么?
（3)同一种菌液用血球计数板和平板菌落计数法同时计数，所得结果是否一样？为什么？
(4）试比较平板菌落计数法和显微镜下直接计数法的优缺点。