第5章动物细胞制药分析
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第5章4节 动物细胞工程
贴壁型细胞实现悬浮培养
贴壁型细胞贴附在微载体上或者包裹在微囊中后可以接 种在适当生物反应器中实现悬浮培养
动物细胞小规模培养
悬滴培养法 灌注小室培养法 培养板培养 转管培养 培养瓶培养
（二）贴壁培养
贴壁培养
细胞贴附在一定的固相表面进行培养
优点：
容易更换培养液；容易采用灌注式培养、不需过滤系 统；同一设备可采用不同的培养液/细胞的比例、适用 于所有类型细胞。
模拟体内生理环境使分离的动物细胞在体外生存、增殖 的一门技术
哈里森
蛙胚延髓组织 培养在青蛙淋巴凝块内
培养瓶
1912年Carrel（美籍法国人）特别注意到了实验中 的无菌操作，并发现鸡胚胎抽提液有促进细胞生 长的作用，他改用血浆加鸡胚胎汁的培养方法， 培养了各种动物的组织块 1923年Carrel又设计了卡氏培养瓶，使人们可以进 一步研究细胞的营养问题。
第五章细胞与细胞工程
§5.4 动物细胞工程
一、动物细胞培养意义
生物制药 生产疫苗 细胞工程技术及产品生产的支撑技术
为新型药物筛选与研究提供模型 为细胞组成、结构与生物工程研究等提供材料 为组织工程体外构建人造组织、器官提供种子细胞 为胚胎工程、克隆动物提供技术支撑
二、 动物细胞培养的特点
动物细胞培养
特点：
形状上不规则，一般分胞体和胞突两部分，其中胞突为 细长型，类似丝状伪足；胞体略呈多角形
培养细胞生长特点
贴附：
贴附并伸展，是多数体外培养细胞的基本生长特点。虽然血 细胞如淋巴细胞在活体体内并无聚集的倾向并在体外可于悬 浮状态中生长，但是大多数的哺乳动物细胞在体内和体外均 附着于一定的底物而生长
世界卫生组织2009年4月30日在网站上 发布公告指出，从即日起，世卫组织在 谈到本次流感暴发时，将使用 “A/H1N1流感”的名称。
贴壁型细胞贴附在微载体上或者包裹在微囊中后可以接 种在适当生物反应器中实现悬浮培养
动物细胞小规模培养
悬滴培养法 灌注小室培养法 培养板培养 转管培养 培养瓶培养
（二）贴壁培养
贴壁培养
细胞贴附在一定的固相表面进行培养
优点：
容易更换培养液；容易采用灌注式培养、不需过滤系 统；同一设备可采用不同的培养液/细胞的比例、适用 于所有类型细胞。
模拟体内生理环境使分离的动物细胞在体外生存、增殖 的一门技术
哈里森
蛙胚延髓组织 培养在青蛙淋巴凝块内
培养瓶
1912年Carrel（美籍法国人）特别注意到了实验中 的无菌操作，并发现鸡胚胎抽提液有促进细胞生 长的作用，他改用血浆加鸡胚胎汁的培养方法， 培养了各种动物的组织块 1923年Carrel又设计了卡氏培养瓶，使人们可以进 一步研究细胞的营养问题。
第五章细胞与细胞工程
§5.4 动物细胞工程
一、动物细胞培养意义
生物制药 生产疫苗 细胞工程技术及产品生产的支撑技术
为新型药物筛选与研究提供模型 为细胞组成、结构与生物工程研究等提供材料 为组织工程体外构建人造组织、器官提供种子细胞 为胚胎工程、克隆动物提供技术支撑
二、 动物细胞培养的特点
动物细胞培养
特点：
形状上不规则，一般分胞体和胞突两部分，其中胞突为 细长型，类似丝状伪足；胞体略呈多角形
培养细胞生长特点
贴附：
贴附并伸展，是多数体外培养细胞的基本生长特点。虽然血 细胞如淋巴细胞在活体体内并无聚集的倾向并在体外可于悬 浮状态中生长，但是大多数的哺乳动物细胞在体内和体外均 附着于一定的底物而生长
世界卫生组织2009年4月30日在网站上 发布公告指出，从即日起，世卫组织在 谈到本次流感暴发时，将使用 “A/H1N1流感”的名称。
动物细胞工程制药
动物细胞工程制药导语动物细胞工程制药是一种利用动物细胞进行生物制药的技术。
该技术已经取得了显著的进展，并在医药领域发挥着重要作用。
本文将介绍动物细胞工程制药的原理、应用和前景。
一、动物细胞工程制药的原理动物细胞工程制药是利用动物细胞系统表达和生产药物的一种技术。
其主要原理包括以下几个步骤：1.动物细胞培养：首先需要选择合适的动物细胞系，并进行培养。
常见的动物细胞系包括CHO细胞、HEK293细胞等。
细胞培养的条件包括培养基、培养温度、培养时间等。
2.基因克隆和转染：将药物的基因通过基因克隆技术导入到动物细胞中，使其具有产生目标药物的能力。
转染的方式包括质粒转染、病毒转染等。
3.细胞培养和增殖：转染后的细胞需要在培养条件下进行生长和增殖。
通常会添加适当的生长因子和培养基来促进细胞的生长。
4.产物分离和提纯：最后，通过适当的方法分离和提纯目标药物，可以使用离心、超滤、层析等技术进行分离纯化。
二、动物细胞工程制药的应用动物细胞工程制药已经广泛应用于医药领域，为药物的研发和生产提供了重要的技术支持。
其主要应用包括以下几个方面：1.蛋白质药物生产：利用动物细胞工程制药技术可以生产多种重要的蛋白质药物，如抗体、细胞因子等。
这些蛋白质药物在治疗癌症、免疫性疾病等方面具有重要作用。
2.疫苗生产：动物细胞工程制药技术也可以用于疫苗的生产。
通过导入相应的病原体基因到动物细胞中，使其产生病原体相关的抗原，从而制备疫苗。
3.基因治疗：动物细胞工程制药技术还可以用于基因治疗。
通过将目标基因导入到患者的细胞中，实现对基因相关疾病的治疗。
4.抗病毒药物：某些动物细胞工程技术还可以用于抗病毒药物的生产。
通过将抗病毒基因导入到动物细胞中，使其产生抗病毒蛋白，从而对抗病毒感染。
三、动物细胞工程制药的前景随着基因工程和生物技术的不断发展，动物细胞工程制药在未来的前景十分广阔。
以下是动物细胞工程制药的一些未来发展趋势：1.技术的进一步成熟：随着技术的不断发展，动物细胞工程制药技术将变得更加成熟，能够更准确、高效地生产药物。
《动物细胞工程制药》课件
利用动物细胞生产生长因子和蛋白质药物案例
总结词
利用动物细胞生产生长因子和蛋白质药物是动物细胞工程制药领域的另一个重要应用。
详细描述
生长因子是一类能够刺激细胞生长和增殖的蛋白质，可以用于治疗某些疾病，如烧伤、 溃疡等。例如，碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）是一种重要的生长因子，可以通过 动物细胞培养技术生产。此外，许多蛋白质药物也是通过动物细胞培养技术生产的，如
关键突破
未来展望
随着技术的不断进步和应用领域的拓 展，动物细胞工程制药将有望成为未 来药物生产的主流技术，为人类健康 事业做出更大的贡献。
进入21世纪后，随着基因工程技术的 发展和成熟，动物细胞工程制药取得 了关键性突破，实现了大规模生产。
01
动物细胞工程制药 技术
动物细胞培养技术
动物细胞培养技术是指将动物细胞置于适宜的培养条件下，使其在体外生长繁殖的 技术。
培养基是动物细胞培养的核心要素，为细胞提供必要的营养物质、生长因子和激素 等。
动物细胞培养技术可用于生产疫苗、单克隆抗体等生物药物，以及进行药物筛选和 毒理学研究等。
动物细胞基因编辑技术
动物细胞基因编辑技术是指通过基因 工程技术对动物细胞的基因进行精确 的改造和修饰。
动物细胞基因编辑技术可用于研究基 因功能、疾病治疗和生物育种等领域 。
目前最常用的基因编辑技术是 CRISPR-Cas9系统，它能够高效地实 现对特定基因的敲除、敲入和点突变 等操作。
动物细胞大规模培养技术
动物细胞大规模培养技术是指通 过一定的生物反应器系统，实现 动物细胞在体外的大规模培养和
扩增。
生物反应器是动物细胞大规模培 养的核心设备，根据不同的培养 条件和应用需求，可选择不同类
(完整版)生物技术制药习题答案(夏焕章版)
第一章绪论填空题1. 生物技术制药的特征高技术、高投入、高风险、高收益、长周期。
2. 生物药物广泛应用于医学各领域，按功能用途可分为三类，分别是治疗药物、预防药物、诊断药物。
3.现代生物药物已形成四大类型：一是应用DNA重组技术制造的基因重组多肽、蛋白质类治疗剂；二是基因药物；三是来自动物植物和微生物的天然生物药物；四是合成与部分合成的生物药物；4.生物技术的发展按其技术特征来看，可分为三个不同的发展阶段，传统生物技术阶段；近代生物技术阶段；现代生物技术阶段。
5.生物技术所含的主要技术范畴有基因工程；细胞工程；酶工程；发酵工程；蛋白质核酸工程和生化工程；选择题1.生物技术的核心和关键是（A ）A 细胞工程B 蛋白质工程C 酶工程D 基因工程2. 第三代生物技术（ A ）的出现，大大扩大了现在生物技术的研究范围A 基因工程技术B 蛋白质工程技术C 海洋生物技术D细胞工程技术3.下列哪个产品不是用生物技术生产的（D ）A 青霉素B 淀粉酶C 乙醇D 氯化钠4. 下列哪组描述（A ）符合是生物技术制药的特征A高技术、高投入、高风险、高收益、长周期B高技术、高投入、低风险、高收益、长周期C高技术、低投入、高风险、高收益、长周期D高技术、高投入、高风险、低收益、短周期5. 我国科学家承担了人类基因组计划（C ）的测序工作A10% B5% C 1% D 7%名词解释1.生物技术制药采用现代生物技术可以人为的创造一些条件，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医学药品，称为生物技术制药。
2.生物技术药物一般说来，采用DNA重组技术或其它生物新技术研制的蛋白质或核酸来药物称为生物技术药物。
3.生物药物生物技术药物是重组产品概念在医药领域的扩大应用，并与天然药物、微生物药物、海洋药物和生物制品一起归类为生物生物药物。
简答题1.生物技术药物的特性是什么？生物技术药物的特征是：（1）分子结构复杂（2）具有种属差异特异性（3）治疗针对性强、疗效高（4）稳定性差（5）免疫原性（6）基因稳定性（7）体内半衰期短（8）受体效应（9）多效应和网络效应（10）检验特殊性2.简述生物技术发展的不同阶段的技术特征和代表产品？（1）传统生物技术的技术特征是酿造技术，所得产品的结构较为简单，属于微生物的初级代谢产物。
《动物细胞制药》课件
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THE FIRST LESSON OF THE SCHOOL YEAR
《动物细胞制药》 ppt课件
THE FIRST LESSON OF THE SCHOOL YEAR
目CONTENTS
• 动物细胞制药概述 • 动物细胞制药技术 • 动物细胞制药的挑战与解决方案 • 动物细胞制药的未来展望 • 案例研究：成功利用动物细胞制药
的实例
01
动物细胞制药概述
动物细胞制药的定义与特点
伦理问题总结
动物细胞制药涉及到伦理方面的考量，如尊重动物生命、避免不必要的伤害和 痛苦等。
解决方案
制定严格的伦理规范和审查机制，确保动物细胞制药的研究和开发符合道德标 准，同时鼓励寻找替代方法或减少动物使用。
动物细胞制药的安全性问题
安全问题总结
动物细胞制药的安全性是首要考虑的因素，包括药物的疗效、副作用以及潜在的 长期影响等。
动物细胞药物生产技术
01
动物细胞药物生产技术是指利用动物细胞大规模培养技术生产 药物的过程。
02
生产过程包括细胞培养、药物合成、产物分离纯化等环节。
在动物细胞药物生产中，需要选择适合的药物生产细胞系，优
03
化培养条件和药物合成途径，以提高药物的产量和质量。
01
动物细胞制药的挑 战与解决方案
动物细胞制药的伦理问题
动物细胞制药的法规与监管问题
法规与监管问题总结
动物细胞制药涉及复杂的法规和监管要求，需要遵守相关法律法规，确保药物研发和生产的合规性。
解决方案
加强与监管机构的沟通和合作，了解并遵守相关法规和指导原则，同时推动法规和监管体系的完善和 创新。
01
动物细胞制药的未 来展望
《动物细胞制药》课件
1 挑战
动物细胞培养的成本较高，细胞污染和变异性是制约其应用的主要问题。
2 机遇
随着技术的进步，细胞培养和基因工程的发展给动物细胞制药带来了创新机遇。
动物细胞制药的未来发展趋势
个性化药物
动物细胞制药将越来越多地 用于个体化治疗，根据患者 的基因组信息生产定制药物。
细胞工程技术
细胞工程技术的发展将为动 物细胞制药提供更多的途径 和方法，不断拓展其应用领 域。
纳米技术
纳米技术的应用将改变药物 的传输和释放方式，提高药 物的疗效和安全性。
动物细胞制药的潜在风险和监管措施
1
风险
动物细胞制药可能存在风险，如免疫
监管措施
2
原性、感染风险等，需加强监测和安 全评估。
相关监管机构应加强动物细胞制药的
监管，确保其质量和安全性。
3
关键因素
成功的动物细胞培养需要控制细胞密度、培养基组分、培养温度、培养pH值等 多个关键因素。
动物细胞制药的应用领域
生物药物
动物细胞制药在生物药物生产中起着重要作用，包括抗体、疫苗、生长因子等。
诊断试剂
动物细胞制药广泛应用于制备各种诊断试剂，如血清学试剂、酶联免疫吸附试剂等。
基因工程产品
动物细胞制药在基因工程产品的生产中具有重要意义，如重组蛋白、基因治疗等。
பைடு நூலகம்
常见的动物细胞制药产品
单克隆抗体
单克隆抗体是一类重要的生物 药物，常用于治疗癌症、自身 免疫性疾病等。
重组蛋白
重组蛋白是通过基因工程技术 制备的蛋白质，用于治疗多种 疾病，如糖尿病、血友病等。
疫苗
疫苗是预防传染病的重要手段， 动物细胞制药可用于生产多种 疫苗，如流感疫苗、乙肝疫苗 等。
动物细胞培养的成本较高，细胞污染和变异性是制约其应用的主要问题。
2 机遇
随着技术的进步，细胞培养和基因工程的发展给动物细胞制药带来了创新机遇。
动物细胞制药的未来发展趋势
个性化药物
动物细胞制药将越来越多地 用于个体化治疗，根据患者 的基因组信息生产定制药物。
细胞工程技术
细胞工程技术的发展将为动 物细胞制药提供更多的途径 和方法，不断拓展其应用领 域。
纳米技术
纳米技术的应用将改变药物 的传输和释放方式，提高药 物的疗效和安全性。
动物细胞制药的潜在风险和监管措施
1
风险
动物细胞制药可能存在风险，如免疫
监管措施
2
原性、感染风险等，需加强监测和安 全评估。
相关监管机构应加强动物细胞制药的
监管，确保其质量和安全性。
3
关键因素
成功的动物细胞培养需要控制细胞密度、培养基组分、培养温度、培养pH值等 多个关键因素。
动物细胞制药的应用领域
生物药物
动物细胞制药在生物药物生产中起着重要作用，包括抗体、疫苗、生长因子等。
诊断试剂
动物细胞制药广泛应用于制备各种诊断试剂，如血清学试剂、酶联免疫吸附试剂等。
基因工程产品
动物细胞制药在基因工程产品的生产中具有重要意义，如重组蛋白、基因治疗等。
பைடு நூலகம்
常见的动物细胞制药产品
单克隆抗体
单克隆抗体是一类重要的生物 药物，常用于治疗癌症、自身 免疫性疾病等。
重组蛋白
重组蛋白是通过基因工程技术 制备的蛋白质，用于治疗多种 疾病，如糖尿病、血友病等。
疫苗
疫苗是预防传染病的重要手段， 动物细胞制药可用于生产多种 疫苗，如流感疫苗、乙肝疫苗 等。
动物细胞制药课件
一、 动物细胞制药
概述
（1）发现细胞和细胞学说创立。1665年英国物理学家 Hooke通过自制的显微镜观察切成薄片的软木时看到死 细胞的细胞壁。
（2）组织培养或细胞培养。1885年德国生理盐水培养 鸡胚组织，至1907年，细胞体外培养宣布进入一个新时 代。
（3）细胞工程学时代。对细胞进行人工改造及培养以 使其为人类服务的时代，包括真核细胞的基因重组、导 入、扩增和表达的理论和技术，细胞融合的理论和技术， 细胞器特别是细胞核移植的理论和技术，染色体改造的 理论和技术，转基因动、植物的理论和技术，细胞大量 培养的理论和技术，以及产物分离纯化的理论和技术。
另一种是先将细胞和培养基加入反应器，待细胞 生长至一定密度后，向反应器内加入诱导剂或病 毒等，经一端时间作用后，将反应物取出，如产 生Namalwa干扰素和疫苗等。
二、动物细胞培养的操作方式
2、半连续式操作
该方式是当细胞和培养基一起加入反应器后，在细胞增长和 产物形成过程中，每间隔一段时间，取出部分培养物，或单 纯是条件培养基，或连同细胞、载体一起，然后补充同样数 量的新鲜培养基，或另加新鲜载体，继续培养。该操作方式 在动物细胞培养和药品生产中被广泛采用，它的优点是操作 简便，生产效率高，可长期进行生产，反复收获产品，而且 可使细胞密度和产品产量一直保持在较高的水平。
二、动物细胞的生理特点
1、细胞的分裂周期长 一般为12~48h，细胞分裂周期=间期（G1期+S期
+G2期）+分裂期（M期） G1期：凡细胞无增殖活动时皆滞留在G1期 S 期：DNA的合成，一般为6~8小时 G2期：DNA量加倍，RNA合成和染色体螺旋化，
持续时间短，一般为2~5h。 M期：一般持续时间很短，仅0.5~1h。相当于有
概述
（1）发现细胞和细胞学说创立。1665年英国物理学家 Hooke通过自制的显微镜观察切成薄片的软木时看到死 细胞的细胞壁。
（2）组织培养或细胞培养。1885年德国生理盐水培养 鸡胚组织，至1907年，细胞体外培养宣布进入一个新时 代。
（3）细胞工程学时代。对细胞进行人工改造及培养以 使其为人类服务的时代，包括真核细胞的基因重组、导 入、扩增和表达的理论和技术，细胞融合的理论和技术， 细胞器特别是细胞核移植的理论和技术，染色体改造的 理论和技术，转基因动、植物的理论和技术，细胞大量 培养的理论和技术，以及产物分离纯化的理论和技术。
另一种是先将细胞和培养基加入反应器，待细胞 生长至一定密度后，向反应器内加入诱导剂或病 毒等，经一端时间作用后，将反应物取出，如产 生Namalwa干扰素和疫苗等。
二、动物细胞培养的操作方式
2、半连续式操作
该方式是当细胞和培养基一起加入反应器后，在细胞增长和 产物形成过程中，每间隔一段时间，取出部分培养物，或单 纯是条件培养基，或连同细胞、载体一起，然后补充同样数 量的新鲜培养基，或另加新鲜载体，继续培养。该操作方式 在动物细胞培养和药品生产中被广泛采用，它的优点是操作 简便，生产效率高，可长期进行生产，反复收获产品，而且 可使细胞密度和产品产量一直保持在较高的水平。
二、动物细胞的生理特点
1、细胞的分裂周期长 一般为12~48h，细胞分裂周期=间期（G1期+S期
+G2期）+分裂期（M期） G1期：凡细胞无增殖活动时皆滞留在G1期 S 期：DNA的合成，一般为6~8小时 G2期：DNA量加倍，RNA合成和染色体螺旋化，
持续时间短，一般为2~5h。 M期：一般持续时间很短，仅0.5~1h。相当于有
《动物细胞制药》课件
法规执行
监管机构负责监督和检查 动物细胞制药的生产和销 售，确保企业遵守相关法 规。
动物细胞制药的伦理问题
尊重动物权益
动物细胞制药过程中应尊重动物 的福利和权益，避免不必要的伤
害和痛苦。
人类健康与安全
确保动物细胞制药的安全性和有效 性，避免对人类健康造成危害。
伦理审查
对动物细胞制药的研究和开发进行 伦理审查，确保符合伦理原则。
《动物细胞制药》课件
目录 Contents
• 动物细胞制药概述 • 动物细胞制药技术 • 动物细胞制药的法规与伦理 • 动物细胞制药的案例研究
01
动物细胞制药概述
动物细胞制药的定义与特点
定义
动物细胞制药是指利用动物细胞 作为生物反应器，通过大规模培 养技术生产具有医疗价值的蛋白 质或细胞产物的过程。
供了新的治疗手段。
案例二：预防禽流感的动物细胞疫苗
总结词
利用动物细胞制药技术生产的疫苗，可以有 效预防禽流感的发生，保障公共卫生安全。
详细描述
禽流感是一种由禽类流感病毒引起的人畜共 患病。为了有效预防禽流感的发生，科学家 们利用动物细胞制药技术生产出了针对禽流 感病毒的疫苗。这些疫苗通过激发人体免疫 系统产生针对禽流感病毒的抗体，从而达到 预防疾病的目的。在疫苗上市后，全球范围
动物细胞制药的应用前景
疾病治疗
生物材料与组织工程
动物细胞制药可用于生产治疗各种疾 病的蛋白质药物，如肿瘤免疫治疗药 物、血液制品等。
动物细胞制药生产的细胞产物可作为 生物材料或组织工程种子细胞，用于 再生医学领域。
药物筛选与研发
动物细胞制药可用于药物筛选和研发 ，通过体外药物试验，加速新药研发 进程。
案例四：用于生物材料开发的动物细胞
动物与植物细胞制药课件
植物细胞制药的应用领域
要点一
总结词
植物细胞制药在药物研发、生产及治疗等领域具有广泛的 应用前景。它可以用于生产传统药材的有效成分，也可以 用于开发新型药物和疫苗。
要点二
详细描述
植物细胞制药在药物研发中发挥着重要作用，通过大规模 培养植物细胞，可以快速获得大量药物样本，加速新药的 研发进程。此外，植物细胞制药还可以用于生产传统药材 的有效成分，提高药材的产量和质量，满足市场需求。在 疫苗开发方面，植物细胞制药可以用于生产病毒样颗粒（ VLP）疫苗，具有广阔的应用前景。
药物种类的拓展
1 2 3
新型蛋白质药物
利用动物和植物细胞生产新型蛋白质药物，如生 长因子、酶抑制剂等，以满足临床治疗的需求。
细胞因子和调节因子
利用动物和植物细胞生产细胞因子和调节因子等 生物活性物质，用于免疫调节、肿瘤治疗等领域 。
基因和细胞治疗药物
利用动物和植物细胞作为载体，开发基因和细胞 治疗药物，以治疗遗传性疾病、肿瘤和其他重大 疾病。
植物细胞制药的发展趋势
总结词
随着生物技术的不断发展，植物细胞制药将朝着高效、 环保、安全的方向发展。同时，随着新药研发和疫苗生 产的不断需求，植物细胞制药的应用前景将更加广阔。
详细描述
未来，植物细胞制药将进一步优化培养工艺和生产技术 ，提高药物成分的产量和质量。同时，随着环保意识的 提高和可持续发展理念的普及，植物细胞制药将更加注 重环保和资源利用效率。此外，随着新药研发和疫苗生 产的不断需求，植物细胞制药的应用领域将进一步拓展 ，为人类健康事业的发展做出更大的贡献。
生产规模的扩大
规模化生产
01
通过改进技术和设备，实现动物和植物细胞制药的规模化生产
第五章动物细胞工程制药
生产用细胞库：从原始细胞库来，或从单一安瓿 来，或从多个安瓿在融化即刻混合在一起的，然 后经培养扩增到一定数量后，再分装储存形成的 细胞库。
生产用细胞库也必须建立档案，而且需要进行无 菌性和无细胞交叉污染的检查，生产时需确定其 最高使用的传代数。
第四节 动物细胞的培养条件和培养基
培养成功必备条件：
2.基因载体的导入和高效表达工程细胞株的筛选
DNA导入动物细胞的常用方法
融合法
化学法
物理法
病毒法
细胞融合法 DNA-磷酸钙沉淀法 电穿孔法
脂质体介导法 DEAE-葡聚糖法 显微注射法
原生质融合法 染色体介导法
基因枪法
微细胞介导法
鬼影红细胞介导法
重组逆转录病毒介导法 重组DNA病毒介导法 多瘤病毒样颗粒介导法
① 所有与细胞接触的设备、器材和溶液，都必须保持绝对 无菌，避免细胞外微生物的污染
② 必须有足够的营养供应，绝对不可有有害的物质，避免 即使是极微量的有害离子的掺入
③ 保证有适量的氧气供应 ④ 需要随时清除细胞代谢中产生的有害产物 ⑤ 有良好的适于生存的外界环境 ⑥ 及时分种，保持合适的细胞密度
一、动物细胞的培养条件
a. 磷酸钙沉淀法：将溶解的DNA加在Na2HPO4 中，逐渐加入CaCl2溶液，当 Na2HPO4和CaCl2形成 沉淀，DNA包裹在沉淀中，形成DNA-磷酸钙共沉 淀物，当沉淀物与细胞表面接触时，通过吞噬作用 将DNA导入胞内。 优点：方法简单，可进行共转化
b. 电穿孔法：借助电穿孔仪产生的高压脉冲电场， 使细胞膜出现瞬时可逆性的小孔，外源DNA沿小孔 进入细胞。 特点：转化效率较高，但进入的DNA拷贝数较低
基因更换多角体蛋白基因，仍能形成有感染力的病毒粒 子； ④ 多角体蛋白基因有非常强的启动子，产生的蛋白质可占 全部蛋白质的20~30%； ⑤ 用光学显微镜可看到多角体，容易以此为标记物来挑选 阳性克隆； ⑥ 如果用家蚕杆状病毒，还可在蚕体直接表达外源基因。
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第5章动物细胞制药分析
Namalwa：从肯尼亚患有淋巴瘤病 人获取，建成的人的类淋巴母细胞。 2.8%的高倍体率，12～14条标记染 色体。单条X，无Y。培养基为RPMI 1640，添加7%胎牛血清。用于生产
α干扰素。
第5章动物细胞制药分析
SP2/0-Ag14：通过融合的方法， 从有羊抗红细胞活性的BALB/c 小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞系 P3X63Ag8融合杂交瘤SP2/NL-Ag 亚克隆中分离获得，
第5章动物细胞制药分析
⒉二倍体细胞系 原代细胞经过传代筛选克隆， 从多种细胞成分的组织中，挑 选并纯化出某种具有一定特征 的细胞株。
第5章动物细胞制药分析
二倍体细胞有正常细胞的 特点： ①染色体组型是2n核型； ②贴壁依赖接触抑制； ③可传代培养50代； ④无致瘤性。
第5章动物细胞制药分析
⒊转化细胞系 通过某个转化过程形成的，常 由于染色体断裂变成异倍体， 失去正常细胞特点，而获得无 限增殖能力。转化过程可以是 自发的，和人工的，从肿瘤组 织中。
第5章动物细胞制药分析
MRC-5：从正常男性肺组织 中获得的人二倍体细胞系。 核型为2n=46。 属成纤维细胞。 培养基用加小牛血清。 同工酶G6PD B型。
第5章动物细胞制药分析
有限寿命42～46代。增殖 速度较W1-38快，对不良 环境敏感性较W1-38低。 对人的病毒敏感。 用于生产疫苗。
第5章动物细胞制药分析
三、常用生产用动物细胞 的特性
W1-38：正常胚肺组织人二倍体 细胞系。 核型为2n=46。成纤维细胞， 能产生胶原，培养基用BME （Eagle’ Basal medium）。
第5章动物细胞制药分析
10%小牛血清，pH7.2, 同工酶为G6PD B型。 倍增时间为24h， 有限寿命50代。 安全，用于制备疫苗。
第5章动物细胞制药分析
用于增殖病毒，包括多瘤病毒、 口蹄疫病毒、狂犬病毒等并制 作疫苗，现已用于工程细胞构建。
第5章动物细胞制药分析
Vero：从正常成年非洲绿猴 肾脏分离的。 为贴壁依赖的成纤维细胞， 核型2n=60；
第5章动物细胞制药分析
培养基为199培养基， 加5%胎牛血清；用于增殖病毒， 包括多瘤病毒、脊髓灰质炎、 狂犬病毒。
第5章动物细胞制药分析
பைடு நூலகம்
⒉悬浮细胞 生长不依赖支持物表面，在培养 液中呈悬浮状态生长。如淋巴细 胞。
⒊兼性贴壁细胞 生长不严格依赖支持物。如中国 地鼠卵巢细胞，小鼠L929细胞。
第5章动物细胞制药分析
二、动物细胞的生理特点
⒈ 细胞的分裂周期长 细胞分裂时间为12～48h， 细胞的分裂 周期=间期+分裂期 间期（G1+S+G2） 分裂期（M）
第5章动物细胞制药分析
能耐受8氮鸟嘌呤 20μg/ml但 在含HAT 选择培养基中不能存活。 通常用培养基为DMEM，添加10%胎 牛血清。用于生产单抗杂交瘤细胞 和抗体。
第5章动物细胞制药分析
Sf-9 1983年从亲代IPLB—SF21AE 中克隆形成。亲代细胞从秋粘虫的 蛹卵组织中分离获得。它对苜宿尺 蠖核型多角体病毒和其它杆状病毒 高度敏感。
第5章动物细胞制药分析
⒉细胞生长需贴附于基质,并有接 触抑制现象。
⒊正常二倍体细胞的生长寿命是 有限的。 原代培养 有限细胞系 无限细胞系
第5章动物细胞制药分析
⒋动物细胞对周围环境十分 敏感; 对理化因素敏感，如： 渗透压、pH、离子浓度、剪切 力、微量元素等。
第5章动物细胞制药分析
⒌动物细胞对培养基要求高 必需氨基酸、维生素、无机盐、 微量元素、葡萄糖、细胞生 长因子、贴壁因子等。
第5章动物细胞制药分析
G1期：4～6h 合成DNA聚合酶 RNA合成
S期：6～8h DNA合成 G2期：2～5h DNA量加倍,
RNA合成 M期：0.5～1h 染色体分裂
第5章动物细胞制药分析
第5章动物细胞制药分析
第5章动物细胞制药分析
细胞代数为细胞分裂次数 传代数表示细胞培养分种传代次数 细胞代数=传代数×分种数/2 X=(logN-logNo)÷log2 X 代数 N 培养最终细胞数 No 培养起始细胞数 倍增时间=培养经过时间÷代数
第5章动物细胞制药分析
CHO-K1：从中国地鼠卵巢中分 离的上皮样细胞。 核型： 2n=20～22。 培养基：DEME培养基 0.1mmol/L次黄嘌呤， 0.1mmol/L胸苷， 10%小牛血清， 加入脯氨酸。
第5章动物细胞制药分析
BHK-21:从5只无性别的生长1天的地 鼠幼鼠肾脏中分离的;成纤维样细胞, 核型为2n=44;培养基为DMEM加7%胎牛 血清。用于增殖病毒，包括多瘤病毒、 口蹄疫病毒、狂犬病毒等并制作疫苗， 现已用于工程细胞构建。
第5章动物细胞制药分析
⒍动物细胞蛋白质的合成途 径和修饰 功能与细菌不同。 动物细胞蛋白质的合成部位： 游离核糖体 粗面内质网的核糖体
第5章动物细胞制药分析
游离核糖体合成蛋白质用于 细胞质基质内。 粗面内质网的核糖体合成蛋 白质是分泌的和膜中的整合 蛋白多为糖蛋白。
第5章动物细胞制药分析
动物细胞生产药物 缺点:培养条件高、成本贵、产量
第五章 动物细胞制药
第5章动物细胞制药分析
第一节 概 述
细胞学说的建立 组织培养和细胞培养 细胞工程学
第5章动物细胞制药分析
第二节动物细胞的形态 和生理特点
一、动物细胞的形态 适应功能,形态各异。 离体培养细胞分两类： 贴壁细胞 悬浮细胞
第5章动物细胞制药分析
第5章动物细胞制药分析
⒈贴壁细胞 生长须有贴附的支持物表面， 自身分泌或培养基中提供的贴 附因子才能在该表面上生长。 两种形态： 成纤维细胞型 上皮细胞型
低。 优点:分泌胞外、纯化方便、翻译
后修饰糖基化，与天然产品一致。
第5章动物细胞制药分析
第三节生产用动物细胞的 要求和获得
一、生产用动物细胞的要求 原代细胞 二倍体细胞系 转化细胞系
第5章动物细胞制药分析
二、生产用动物细胞的获得
⒈原代细胞
是直接取自动物组织器官,经过粉 碎消化而获得的细胞悬液（109/g）。 需要大量动物，费钱费劳力。 鸡胚细胞、原代兔肾细胞、鼠肾细胞、 淋巴细胞。
第5章动物细胞制药分析
Namalwa：从肯尼亚患有淋巴瘤病 人获取，建成的人的类淋巴母细胞。 2.8%的高倍体率，12～14条标记染 色体。单条X，无Y。培养基为RPMI 1640，添加7%胎牛血清。用于生产
α干扰素。
第5章动物细胞制药分析
SP2/0-Ag14：通过融合的方法， 从有羊抗红细胞活性的BALB/c 小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞系 P3X63Ag8融合杂交瘤SP2/NL-Ag 亚克隆中分离获得，
第5章动物细胞制药分析
⒉二倍体细胞系 原代细胞经过传代筛选克隆， 从多种细胞成分的组织中，挑 选并纯化出某种具有一定特征 的细胞株。
第5章动物细胞制药分析
二倍体细胞有正常细胞的 特点： ①染色体组型是2n核型； ②贴壁依赖接触抑制； ③可传代培养50代； ④无致瘤性。
第5章动物细胞制药分析
⒊转化细胞系 通过某个转化过程形成的，常 由于染色体断裂变成异倍体， 失去正常细胞特点，而获得无 限增殖能力。转化过程可以是 自发的，和人工的，从肿瘤组 织中。
第5章动物细胞制药分析
MRC-5：从正常男性肺组织 中获得的人二倍体细胞系。 核型为2n=46。 属成纤维细胞。 培养基用加小牛血清。 同工酶G6PD B型。
第5章动物细胞制药分析
有限寿命42～46代。增殖 速度较W1-38快，对不良 环境敏感性较W1-38低。 对人的病毒敏感。 用于生产疫苗。
第5章动物细胞制药分析
三、常用生产用动物细胞 的特性
W1-38：正常胚肺组织人二倍体 细胞系。 核型为2n=46。成纤维细胞， 能产生胶原，培养基用BME （Eagle’ Basal medium）。
第5章动物细胞制药分析
10%小牛血清，pH7.2, 同工酶为G6PD B型。 倍增时间为24h， 有限寿命50代。 安全，用于制备疫苗。
第5章动物细胞制药分析
用于增殖病毒，包括多瘤病毒、 口蹄疫病毒、狂犬病毒等并制 作疫苗，现已用于工程细胞构建。
第5章动物细胞制药分析
Vero：从正常成年非洲绿猴 肾脏分离的。 为贴壁依赖的成纤维细胞， 核型2n=60；
第5章动物细胞制药分析
培养基为199培养基， 加5%胎牛血清；用于增殖病毒， 包括多瘤病毒、脊髓灰质炎、 狂犬病毒。
第5章动物细胞制药分析
பைடு நூலகம்
⒉悬浮细胞 生长不依赖支持物表面，在培养 液中呈悬浮状态生长。如淋巴细 胞。
⒊兼性贴壁细胞 生长不严格依赖支持物。如中国 地鼠卵巢细胞，小鼠L929细胞。
第5章动物细胞制药分析
二、动物细胞的生理特点
⒈ 细胞的分裂周期长 细胞分裂时间为12～48h， 细胞的分裂 周期=间期+分裂期 间期（G1+S+G2） 分裂期（M）
第5章动物细胞制药分析
能耐受8氮鸟嘌呤 20μg/ml但 在含HAT 选择培养基中不能存活。 通常用培养基为DMEM，添加10%胎 牛血清。用于生产单抗杂交瘤细胞 和抗体。
第5章动物细胞制药分析
Sf-9 1983年从亲代IPLB—SF21AE 中克隆形成。亲代细胞从秋粘虫的 蛹卵组织中分离获得。它对苜宿尺 蠖核型多角体病毒和其它杆状病毒 高度敏感。
第5章动物细胞制药分析
⒉细胞生长需贴附于基质,并有接 触抑制现象。
⒊正常二倍体细胞的生长寿命是 有限的。 原代培养 有限细胞系 无限细胞系
第5章动物细胞制药分析
⒋动物细胞对周围环境十分 敏感; 对理化因素敏感，如： 渗透压、pH、离子浓度、剪切 力、微量元素等。
第5章动物细胞制药分析
⒌动物细胞对培养基要求高 必需氨基酸、维生素、无机盐、 微量元素、葡萄糖、细胞生 长因子、贴壁因子等。
第5章动物细胞制药分析
G1期：4～6h 合成DNA聚合酶 RNA合成
S期：6～8h DNA合成 G2期：2～5h DNA量加倍,
RNA合成 M期：0.5～1h 染色体分裂
第5章动物细胞制药分析
第5章动物细胞制药分析
第5章动物细胞制药分析
细胞代数为细胞分裂次数 传代数表示细胞培养分种传代次数 细胞代数=传代数×分种数/2 X=(logN-logNo)÷log2 X 代数 N 培养最终细胞数 No 培养起始细胞数 倍增时间=培养经过时间÷代数
第5章动物细胞制药分析
CHO-K1：从中国地鼠卵巢中分 离的上皮样细胞。 核型： 2n=20～22。 培养基：DEME培养基 0.1mmol/L次黄嘌呤， 0.1mmol/L胸苷， 10%小牛血清， 加入脯氨酸。
第5章动物细胞制药分析
BHK-21:从5只无性别的生长1天的地 鼠幼鼠肾脏中分离的;成纤维样细胞, 核型为2n=44;培养基为DMEM加7%胎牛 血清。用于增殖病毒，包括多瘤病毒、 口蹄疫病毒、狂犬病毒等并制作疫苗， 现已用于工程细胞构建。
第5章动物细胞制药分析
⒍动物细胞蛋白质的合成途 径和修饰 功能与细菌不同。 动物细胞蛋白质的合成部位： 游离核糖体 粗面内质网的核糖体
第5章动物细胞制药分析
游离核糖体合成蛋白质用于 细胞质基质内。 粗面内质网的核糖体合成蛋 白质是分泌的和膜中的整合 蛋白多为糖蛋白。
第5章动物细胞制药分析
动物细胞生产药物 缺点:培养条件高、成本贵、产量
第五章 动物细胞制药
第5章动物细胞制药分析
第一节 概 述
细胞学说的建立 组织培养和细胞培养 细胞工程学
第5章动物细胞制药分析
第二节动物细胞的形态 和生理特点
一、动物细胞的形态 适应功能,形态各异。 离体培养细胞分两类： 贴壁细胞 悬浮细胞
第5章动物细胞制药分析
第5章动物细胞制药分析
⒈贴壁细胞 生长须有贴附的支持物表面， 自身分泌或培养基中提供的贴 附因子才能在该表面上生长。 两种形态： 成纤维细胞型 上皮细胞型
低。 优点:分泌胞外、纯化方便、翻译
后修饰糖基化，与天然产品一致。
第5章动物细胞制药分析
第三节生产用动物细胞的 要求和获得
一、生产用动物细胞的要求 原代细胞 二倍体细胞系 转化细胞系
第5章动物细胞制药分析
二、生产用动物细胞的获得
⒈原代细胞
是直接取自动物组织器官,经过粉 碎消化而获得的细胞悬液（109/g）。 需要大量动物，费钱费劳力。 鸡胚细胞、原代兔肾细胞、鼠肾细胞、 淋巴细胞。
第5章动物细胞制药分析