全反式维甲酸ATRA
全反式维甲酸
也叫做维A酸全反式维维甲酸的抗肿瘤作用的证实被誉为九十年代国际抗癌药物的三大发现之一，具有很强的诱导分化肿瘤细胞作用，备受国际国内医药界的关注，是目前国内治疗急性早幼粒细胞白血病、骨髓异常增生（白血病前期）尤其是早幼粒细胞白血病的临床首选药物。
同时临床显示用于治疗痤疮、扁平苔藓、白斑、多发性寻常疣及其它角化性皮肤病也有显著疗效。
（二）作用于肿瘤1、诱导肿瘤细胞分化和凋亡。
2、增加癌细胞对化疗药物的敏感性。
3、促进免疫细胞的增殖。
4、增强免疫细胞对肿瘤细胞杀灭作用。
【注意事项】 1.本品内服可产生头痛、头晕（５０岁以下病人较老人为多）、口干、脱屑等不良反应，控制剂量或同时服用谷维素、维生素Ｂ１、Ｂ６等药物，可使头痛等反应减轻或消失。
现制成酯类供内服用，以减轻毒副反应。
2.可引起肝损害，肝、肾功能不良者慎用。
3.外用应避免使用于皮肤较薄的皱折部位，并注意浓度不宜过高（０．３％以下较为适宜），以免引起红斑、脱皮、灼热感及微痛等局部刺激。
这些反应如果轻微，应坚持继续治疗。
如反应严重，应立即停药。
4.不宜应用于急性皮炎、湿疹类疾病。
5.在治疗严重类型的皮肤病时，可与其他药物如皮质激素、抗生素等合并使用，以增加疗效。
【规格】片剂：每片β－顺维甲酸１０ｍｇ。
维胺脂１０ｍｇ，冷霜或软膏：０．０２５％、０．１％2项目简介：全反式维甲酸（ATRA）主要用于治疗急性早幼粒细胞白血病（APL），ATRA减少了细胞毒化疗细胞破坏而产生的播散性血管内凝血，从而降低了初治APL的早期死亡率，可使大部分患者达到完全缓解。
此外，ATRA也可用于结肠癌、食管癌、胰腺实体瘤等消化系统肿瘤的治疗，尤其对肝癌的治疗具有良好的前景。
但该药的口服生物利用度低，且长期使用易产生耐药性，原因在于血液中的药物浓度急剧下降。
又因为其脂溶性较强，常规手段难以制备成注射给药剂型。
将ATRA制备成脂质体可显著增加药物的治疗指数和降低毒性。
并具有以下优点：（1）提高药物的稳定性，可明显减少光热氧对维甲酸的破坏；（2）具有靶向性，脂质体携带药物主要被单核—巨噬细胞系统的吞噬细胞所摄取，在肝、脾和骨髓等网状内皮细胞较丰富的器官分布较多，可有效作用于靶区；（3）增加缓释性，脂质体能显著增加药物在血液中的滞留时间，发挥长效作用；（4）脂质体包裹脂溶性药物，使维甲酸注射给药成为可能。
全反式维甲酸受体在阿霉素致足细胞损伤中的表达及作用
全反式维甲酸受体在阿霉素致足细胞损伤中的表达及作用陈秀萍;覃远汉;雷凤英;蒋玲;周添标;李正一;白丽春【摘要】目的：探讨维甲酸受体（ RAR）在足细胞损伤中的作用。
方法体外培养足细胞随机分为正常组和模型组，待6孔板足细胞融合90％后正常组在正常培养基培养24 h，模型组在含0．15μg／ml阿霉素（ ADR）的培养基中培养24 h建立损伤模型。
造模后，光镜、电镜检查足细胞形态，实时荧光定量PCR和Western blot方法检测足细胞nephrin、podocin、转化生长因子β1（ TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA ）、维甲酸受体α、β和γ（RAR-α，β，γ）的mRNA及其蛋白表达变化。
结果（1）与正常组比较，光镜下模型组足细胞肥大和细胞碎片增多，电镜下部分足细胞萎缩，足突融合、回缩，甚至消失；（2）与正常组比较，模型组足细胞的nephrin和podocin 的mRNA及其蛋白表达均显著降低（P均＜0．05），TGF-β1和α-SMA的mRNA及其蛋白表达均显著增高（P均＜0．05），RAR-α和RAR-γ的mRNA及其蛋白表达均显著下调（P均＜0．05），而RAR-β的mRNA及其蛋白表达无显著改变（P均＞0．05）；（3）模型组足细胞的RAR-α和RAR-γ蛋白表达与nephrin，podocin蛋白表达均呈显著正相关，与TGF-β1和α-SMA蛋白表达均呈显著负相关。
结论在阿霉素致足细胞损伤中，足细胞的RAR-α和RAR-γ表达均显著降低，可能参与了足细胞损伤的发生发展。
%Objective To investigate the effect of retinoic acid receptors (RARs) on injured podocytes induced byadriamycin(ADR).Methods Podocytes cultured in vitro were randomly divided into normal group and model group ,the former group was cultured in normal medium for 24 hours following the 6-well-plate podocytes fusion had achieved 90%,the latter group was suffered to ADR(0.15μg/ml) for 24 hours to establish injury model .Morphological changes were observed under light and electronmicroscope.Nephrin,podocin,transforming growth factor β1(TGF-β1),α-smooth muscle actin (α-SMA) and retinoic acid receptors (RAR-α,β,γ) mRNA and protein levels in podocytes were measured by RT-PCR and Western blot .Results ①Compared with normal group ,there were increased cell debris and hypertrophy observed under light microscope as well as shrinking of podocytes structure and foot processesfusion ,retraction ,even disappearing observed under electron microscope in the model group .② The levels of mRNA and protein ofnephrin ,podocin,RAR-α,RAR-γdecreased significantly in the model group in contrast with those in the normal group (all P<0.05),while the levels of mRNA and protein of TGF-β1 and α-SMA increased significantly (allP<0.05).However,there were no significant differences in RAR-βmRNA and protein expressions between two groups(all P>0.05).③RAR-αand RAR-γprotein expressions p ositively correlated with nephrin and podocin protein expressions but negatively correlated with TGF-β1,α-SMA protein expressions in the model group(P<0.05).Conclusion The lower expressions of RAR-αand RAR-γin injured podocytes induced by adriamycin sugges ts that they might play an important role in the injury process of podocytes .【期刊名称】《广西医学》【年(卷),期】2014(000)005【总页数】5页(P556-560)【关键词】足细胞损伤;维甲酸受体;阿霉素【作者】陈秀萍;覃远汉;雷凤英;蒋玲;周添标;李正一;白丽春【作者单位】广西医科大学第一附属医院儿科，南宁市 530021;广西医科大学第一附属医院儿科，南宁市 530021;广西医科大学第一附属医院儿科，南宁市530021;广西医科大学第一附属医院儿科，南宁市 530021;中山大学附属第六医院肾内科，广州市 510655;广西医科大学第一附属医院儿科，南宁市 530021;广西医科大学第一附属医院儿科，南宁市 530021【正文语种】中文【中图分类】R672.31前期研究发现，全反式维甲酸(all-trans retinoic acid，ATRA)具有延缓大鼠肾小球硬化(GS)慢性进展、减轻足细胞损伤和保护肾功能的作用[1]。
全反式维甲酸前体脂质体的制备及磷脂过氧化值的测定
全反式维甲酸前体脂质体的制备及磷脂过氧化值的测定目的:制备全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)前体脂质体,并测定前体脂质体中磷脂的过氧化值(POV)。
方法:采用山梨醇为固化载体,改良旋转蒸发-载体吸附法制备ATRA前体脂质体。
水化后,采用微柱离心法测定全反式维甲酸脂质体的包封率。
以丙二醛(MDA)法测定磷脂的过氧化值来表示在制备全反式维甲酸前体脂质体过程中磷脂的过氧化程度。
结果:ATRA前体脂质体的包封率为84.98%。
制备前后磷脂的过氧化值分别为0.080和0.089。
结论:该方法操作简单易行,适合实验室范围制备前体脂质体。
且在制备前后,磷脂的过氧化值差为0.009,说明磷脂在制备过程中比较稳定。
标签：全反式维甲酸;前体脂质体;包封率;过氧化值全反式维甲酸(all trans retinoic acid, ATRA)是维生素A类化合物,生物利用度为50%,血浆半衰期短,达峰时间60～210 min,其后血药浓度迅速下降,血浆半衰期30 min[1]。
为了提高ATRA的口服生物利用度,增强ATRA在胃肠道中的稳定性,并克服脂质体存在诸多不稳定的因素,如聚集、沉降、融合,且磷脂易水解和氧化,现采用山梨醇为载体,将ATRA制备成前体脂质体,使脂质体固化,有利于临床的普及和应用[2]。
1 仪器与材料高效液相色谱仪(日本岛津);紫外分光光度计(南京东迈科技有限公司);旋转蒸发仪(上海医械专机厂);台式高速离心机(上海医分仪器制造有限公司)Sephadex 50(美国Pharmacia公司);维甲酸原料药(山东良福制药有限公司);口服大豆磷脂(上海太伟药业);胆固醇(天津博迪化工有限公司);硫代巴比妥酸(中国上海化学试剂公司),三氯乙酸(天津科密欧化学试剂开发中心)。
2 方法和结果2.1 分析方法的建立2.1.1 色谱条件色谱柱:C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:甲醇0.05 mol/L,磷酸二氢铵(90∶10,v/v);流速:1.0 ml/min;柱温:室温;紫外检测波长:348 nm;进样量20 μl。
全反式维甲酸(ATAR)诱导白血细胞的染色质构象改变而影响分化进程
全反式维甲酸（ATAR）诱导白血细胞的染色质构象改变而影响分化进程Alterations of specific chromatin conformation affect ATRA-induced leukemia cell differentiation期刊：Cell Death & Disease影响因子：6.044主要技术：Hi-C、ATAC-seq 、ChIP-seq、RNA-seq发表时间：2018年研究背景染色体形成多层次构象在基因表达调控中起着至关重要的作用。
高通量染色体构象捕获(Hi-C)揭示了基因组被组成几百几千碱基到一个百万碱基长度的拓扑相关域(topological associated domain, TADs)，其中染色质区域TAD内部作用强于TAD外部。
在所有的细胞类型中，TAD位置在进化过程中基本保守。
然而，同一TADs内的基因在激素刺激或分化过程中表达是协调变化，这表明TADs不仅可作为结构单位，而且还可以作为转录调控的功能单位。
此外，在TADs中，由特定蛋白或非编码RNA介导的长期染色质相互作用连接远端调控区域，如增强子和基因启动子，使基因远端表达调控成为可能。
摘要在本研究中，作者采用全反式维甲酸（ATRA）诱导的HL-60细胞作为白血病细胞分化的模型。
用高通量测序（Hi-C）、染色质免疫沉淀联合高通量测序（ChIP-seq）、转座酶可及染色质联合高通量测序（ATAC-seq）和RNA测序（RNA-seq）的方法分析并观察差异表达基因（DEGs）在TAD中非随机分布。
在TADs中，基因与调控区域之间的染色质相互作用与基因表达水平和染色质可及性呈正相关。
关键转录因子GATA2的表达和DNA结合在ATRA诱导后均下调；同时，染色质之间的相互作用GATA2启动子和上游增强子丢失，增强子中染色质可及性改变。
技术路线研究结果1. ATRA诱导后间室和TAD位置无明显变化在对照组和ATRA处理的细胞中都观察到类似的沿热图对角线的组织模式，这表明ATRA诱导后基因组的基本结构单元保持稳定。
全反式维甲酸缓释微球的制备及体内外评价的开题报告
全反式维甲酸缓释微球的制备及体内外评价的开题报告一、研究背景及意义全反式维甲酸（ATRA）是一种具有广泛生物活性的维生素A衍生物，对于细胞分化、增殖、凋亡等生命过程具有重要作用。
由于其抗肿瘤、抗炎、免疫调节、光老化等作用，已被广泛应用于临床治疗多种疾病，如急性早幼粒细胞白血病、凝血系统疾病、复发性多形性红斑等。
然而，ATRA应用存在一些问题，如极易受光破坏、长期使用可能导致毒副作用等。
此外，ATRA具有较强的水溶性和低分子量，易被机体迅速代谢和清除，导致疗效不稳定，需要频繁给药。
因此，为了增强ATRA的稳定性和延长其药效，需要开发高效的给药系统。
微球是一种常用的载药系统，具有较好的药物控释性和保护性。
缓释性微球是一种常用的药物控释系统，其能够使药物缓慢释放，降低药物浓度的峰值和波动，从而保持药物在治疗有效时间内的恒定浓度，提高药效，减少不良反应。
因此，将ATRA 包载进缓释微球中，有望解决药物稳定性和药效的问题，提高ATRA治疗效果，同时减轻患者的不良反应。
二、研究内容本研究旨在制备全反式维甲酸缓释微球，并对其进行体内外评价。
具体研究内容如下：1. 建立全反式维甲酸缓释微球制备工艺通过控制微球粒径和药物包载量等制备参数，建立全反式维甲酸缓释微球制备工艺，考察不同制备条件下微球粒径、药物包载量、载药率等性质的变化，寻找最优制备条件。
2. 评价全反式维甲酸缓释微球的微观形态和物理性质应用扫描电镜（SEM）、荧光显微镜等方法对制备的全反式维甲酸缓释微球进行表征，探究微球的结构和形态特征，并测试微球的粒径分布、质量分数等物理性质。
3. 研究全反式维甲酸缓释微球的体外释放性能采用透析袋法、离心法等方法测试全反式维甲酸缓释微球体外的释放性能，探究温度、pH等因素对微球释放性能的影响，评价微球的控释性能。
4. 评估全反式维甲酸缓释微球的毒理学和药效学特性通过体外细胞毒性实验、小鼠急性毒性实验、小鼠体内分布和药效实验等方法，评估全反式维甲酸缓释微球的毒理学和药效学特性。
全反式维甲酸(ATRA)联合柔红霉素与阿糖胞苷对高细胞急性早幼粒细胞白血病(APL)的疗效
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例的观察 ＩＣ Ｄ Ｓ是一个恶性度高的肿瘤 ， 预后差 。
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３ ２８ ・
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急性早幼粒细胞白血病治疗方案
2.治疗期间，加强患者心理支持，提高治疗依从性。
3.遵循我国相关法律法规，确保治疗合规性。
六、总结
本方案针对急性早幼粒细胞白血病（APL）患者，结合国内外治疗经验和研究成果，制定了一套合法合规的治疗策略。通过诱导缓解、巩固、维持治疗及支持治疗，旨在实现疾病缓解、预防并发症、提高患者生存质量。在治疗过程中，密切监测患者病情变化，及时调整治疗方案，确保治疗的有效性和安全性。
二、治疗目标
1.疾病缓解：尽快实现完全缓解（CR），降低复发风险。
2.预防并发症：预防出血、感染等并发症，降低治疗相关死亡率。
3.提高生存质量：改善患者生存质量，延长生存期。
三、治疗方案
1.诱导缓解治疗
（1）全反式维甲酸（ATRA）：每日口服，直至CR或达到最大疗程。
（2）蒽环类药物（如多柔比星）：按体重计算剂量，每周一次，共4周。
（2）抗出血：及时输注血小板、红细胞等，纠正凝血功能异常。
（3）营养支持：加强营养摄入，提高患者免疫力。
四、治疗监测
1.定期检查血常规、肝肾功能、电解质、凝血功能等指标，评估病情及治疗反应。
2.定期进行骨髓穿刺检查，监测病情变化。
3.观察治疗相关并发症，及时处理。
五、注意事项
1.治疗过程中，密切观察患者病情变化，根据病情调整治疗方案。
（3）小剂量阿糖胞苷：每日一次，共7-14天。
2.巩固治疗
（1）ATRA：同诱导缓解治疗。
（2）蒽环类药物：同诱导缓解治疗。
（3）大剂量Leabharlann 糖胞苷：按体重计算剂量，每12小时一次，共3-5天。
3.维持治疗
（1）ATRA：每日口服，共1年。
全反式维甲酸对大鼠肾间质纤维化的延缓作用及其可能分子机制
论著 基础研究һ基金项目:广东省自然科学基金(２０１５Ａ０３０３１０３８６)ꎻ广东省医学科学技术研究基金项目(Ａ２０１８３３６)ꎻ广东省汕头市医疗卫生科技计划项目(汕府科[２０１９]１０６号４)作者简介:周添标(１９８３~)ꎬ男ꎬ博士ꎬ副主任医师ꎬ研究方向:肾脏疾病的临床和基础ꎮ全反式维甲酸对大鼠肾间质纤维化的延缓作用及其可能分子机制һ周添标㊀钟红珍㊀钟志青㊀谢伟基㊀翁文娟(汕头大学医学院第二附属医院肾内科ꎬ广东省汕头市㊀５１５０４１ꎬ电子邮箱:ｚｈｏｕｔｂ＠ａｌｉｙｕｎ.ｃｏｍ)㊀㊀ʌ摘要ɔ㊀目的㊀探讨全反式维甲酸(ＡＴＲＡ)对大鼠肾间质纤维化(ＲＩＦ)的延缓作用及其可能分子机制ꎮ方法㊀将３６只大鼠随机分为ＡＴＲＡ组㊁ＲＩＦ模型组和假手术组ꎬ每组１２只ꎮＡＴＲＡ组㊁ＲＩＦ模型组大鼠采用左侧输尿管梗阻方法建立ＲＩＦ模型ꎬ假手术组只开腹探及肾包膜ꎮ术前１ｄꎬＡＴＲＡ组给予ＡＴＲＡ灌胃ꎬ其余２组灌胃等量生理盐水ꎮ于造模后的第２周末和第４周末ꎬ每组随机抽取６只大鼠ꎮ留取大鼠左侧肾组织ꎬ行Ｍａｓｓｏｎ染色并计算ＲＩＦ指数ꎬ免疫组织化学法检测肾组织维甲酸受体α(ＲＡＲα)㊁阻抑素㊁Ⅳ型胶原蛋白(ＣｏｌⅣ)㊁纤维连接蛋白(ＦＮ)的表达水平ꎬ实时荧光定量ＰＣＲ检测肾脏组织ＲＡＲα㊁阻抑素的ｍＲＮＡ表达水平ꎮ结果㊀造模后的第２周末和第４周末ꎬ假手术组㊁ＡＴＲＡ组㊁ＲＩＦ模型组ＲＩＦ指数㊁ＣｏｌⅣ和ＦＮ的蛋白表达水平依次升高ꎬＲＡＲα和阻抑素的蛋白㊁ｍＲＮＡ表达水平依次降低(均Ｐ<０.０５)ꎻ在ＡＴＲＡ组㊁ＲＩＦ模型组ꎬ与第２周末比较ꎬ第４周末ＲＩＦ指数㊁ＣｏｌⅣ和ＦＮ的蛋白表达水平更高ꎬ而ＲＡＲα和阻抑素的蛋白㊁ｍＲＮＡ表达水平更低(均Ｐ<０.０５)ꎮ在ＲＩＦ模型组中ꎬ第２㊁４周末时ꎬＲＡＲα蛋白表达水平与阻抑素蛋白表达水平均呈正相关ꎬ与ＲＩＦ指数㊁ＣｏｌⅣ和ＦＮ蛋白表达水平均呈负相关(均Ｐ<０.０５)ꎮ结论㊀ＡＴＲＡ具有延缓大鼠ＲＩＦ的作用ꎬ其可能通过上调肾脏组织ＲＡＲα表达ꎬ调控阻抑素的表达ꎬ从而发挥作用ꎮʌ关键词ɔ㊀肾间质纤维化ꎻ全反式维甲酸ꎻ维甲酸受体αꎻ阻抑素ꎻⅣ型胶原ꎻ纤维连接蛋白ꎻ大鼠ʌ中图分类号ɔ㊀Ｒ６９２㊀㊀ʌ文献标识码ɔ㊀Ａ㊀㊀ʌ文章编号ɔ㊀０２５３￣４３０４(２０２０)０７￣０８３０￣０５ＤＯＩ:１０.１１６７５/ｊ.ｉｓｓｎ.０２５３￣４３０４.２０２０.０７.１１Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆａｌｌ￣ｔｒａｎｓｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄｏｎｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｎａｌｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｒａｔｓａｎｄｉｔｓｐｏｓｓｉｂｌｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍＺＨＯＵＴｉａｎ￣ｂｉａｏꎬＺＨＯＮＧＨｏｎｇ￣ｚｈｅｎꎬＺＨＯＮＧＺｈｉ￣ｑｉｎｇꎬＸＩＥＷｅｉ￣ｊｉꎬＷＥＮＧＷｅｎ￣ｊｕａｎ(ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｐｈｒｏｌｏｇｙꎬｔｈｅＳｅｃｏｎｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｈａｎｔｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅꎬＳｈａｎｔｏｕ５１５０４１ꎬＣｈｉｎａ)ʌＡｂｓｔｒａｃｔɔ㊀Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆａｌｌ￣ｔｒａｎｓｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ(ＡＴＲＡ)ｏｎｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｎａｌｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓ(ＲＩＦ)ｉｎｒａｔｓａｎｄｉｔｓｐｏｓｓｉｂｌｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀Ｔｈｉｒｔｙ￣ｓｉｘｒａｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｉｚｅｄｔｏＡＴＲＡｇｒｏｕｐꎬＲＩＦｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｏｒｓｈａｍｏｐｅｒａｔｉｏｎｇｒｏｕｐꎬｗｉｔｈ１２ｒａｔｓｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ.ＴｈｅＲＩＦｍｏｄｅｌｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｕｓｉｎｇｌｅｆｔｕｒｅｔｅｒａｌｏｂｓｔｒｕｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｉｎｔｈｅＡＴＲＡｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅＲＩＦｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐꎬｗｈｅｒｅａｓｏｐｅｎｒｅｎａｌｃａｐｓｕｌｅｅｘｐｌｏｒａｔｉｏｎｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｉｎｔｈｅｓｈａｍｏｐｅｒａｔｉｏｎｇｒｏｕｐ.ＯｎｅｄａｙｂｅｆｏｒｅｏｐｅｒａｔｉｏｎꎬｔｈｅＡＴＲＡｇｒｏｕｐｗａｓｇｉｖｅｎｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＡＴＲＡꎬａｎｄｔｈｅｒｅｍａｉｎｉｎｇｔｗｏｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｇｉｖｅｎｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆｅｑｕｉｖａｌｅｎｔｎｏｒｍａｌｓａｌｉｎｅ.Ａｔｔｈｅｅｎｄｏｆｔｈｅｓｅｃｏｎｄａｎｄｆｏｕｒｔｈｗｅｅｋｓａｆｔｅｒｍｏｄｅｌｉｎｇꎬ６ｒａｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｓｅｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｅａｃｈｇｒｏｕｐ.ＡｆｔｅｒｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇｔｈｅｌｅｆｔｋｉｄｎｅｙｔｉｓｓｕｅｓｏｆｔｈｅｒａｔｓꎬＭａｓｓｏｎｓｔａｉｎｉｎｇｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄａｎｄＲＩＦｉｎｄｅｘｗａｓｃａｌｃｕｌａｔｅｄꎬｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｓｓａｙｗａｓｅｍｐｌｏｙｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄｒｅｃｅｐｔｏｒａｌｐｈａ(ＲＡＲα)ꎬｐｒｏｈｉｂｉｔｉｎꎬｔｙｐｅⅣｃｏｌｌａｇｅｎ(ＣｏｌⅣ)ａｎｄｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ(ＦＮ)ｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｋｉｄｎｅｙｔｉｓｓｕｅｓꎬａｎｄｒｅａｌ￣ｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲｗａｓａｐｐｌｉｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＲＡＲαａｎｄｐｒｏｈｉｂｉｔｉｎｍＲＮＡｓｉｎｋｉｄｎｅｙｔｉｓｓｕｅｓ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀ＡｔｔｈｅｅｎｄｏｆｔｈｅｓｅｃｏｎｄａｎｄｆｏｕｒｔｈｗｅｅｋｓａｆｔｅｒｍｏｄｅｌｉｎｇꎬＲＩＦｉｎｄｅｘꎬｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＣｏｌⅣａｎｄＦＮｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｃｒｅａｓｅｄꎬｗｈｅｒｅａｓｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＲＡＲαａｎｄｐｒｏｈｉｂｉｔｉｎｄｅｃｌｉｎｅｄｉｎｔｈｅｏｒｄｅｒｏｆｔｈｅｓｈａｍｏｐｅｒａｔｉｏｎｇｒｏｕｐꎬｔｈｅＡＴＲＡｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅＲＩＦｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ(ａｌｌＰ<０.０５)ꎻｔｈｅＡＴＲＡｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅＲＩＦｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｏｂｔａｉｎｅｄｈｉｇｈｅｒＲＩＦｉｎｄｅｘꎬｈｉｇｈｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＣｏｌⅣａｎｄＦＮｐｒｏｔｅｉｎｓꎬａｓｗｅｌｌａｓｌｏｗｅｒｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＲＡＲαａｎｄｐｒｏｈｉｂｉｔｉｎａｔｔｈｅｅｎｄｏｆｔｈｅｆｏｕｒｔｈｗｅｅｋｔｈａｎａｔｔｈｅｅｎｄｏｆｔｈｅｓｅｃｏｎｄｗｅｅｋ(ａｌｌＰ<０.０５).ＩｎｔｈｅＲＩＦｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐꎬａｔｔｈｅｅｎｄｏｆｔｈｅｓｅｃｏｎｄｏｒｆｏｕｒｔｈｗｅｅｋꎬｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＲＡＲαｐｒｏｔｅｉｎｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｐｒｏｈｉｂｉｔｉｎｐｒｏｔｅｉｎꎬｂｕｔｎｅｇａｔｉｖｅｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈＲＩＦｉｎｄｅｘａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＣｏｌⅣａｎｄＦＮｐｒｏｔｅｉｎｓ(ａｌｌＰ<０.０５).Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ＡＴＲＡｃａｎｄｅｌａｙｔｈｅｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆＲＩＦｉｎｒａｔｓ.ＡＴＲＡｍａｙｒｅｇｕｌａｔｅｐｒｏｈｉｂｉｔｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｙｕｐ￣ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＲＡＲαｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｋｉｄｎｅｙｔｉｓｓｕｅｓꎬｔｈｅｒｅｂｙｅｘｅｒｔｉｎｇｔｈｅｅｆｆｅｃｔ.ʌＫｅｙｗｏｒｄｓɔ㊀ＲｅｎａｌｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓꎬＡｌｌ￣ｔｒａｎｓｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄꎬＲｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄｒｅｃｅｐｔｏｒａｌｐｈａꎬＰｒｏｈｉｂｉｔｉｎꎬＴｙｐｅⅣｃｏｌｌａｇｅｎꎬＦｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎꎬＲａｔ㊀㊀肾间质纤维化(ｒｅｎａｌｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓꎬＲＩＦ)是导致终末期肾病的共同病理变化ꎬ目前其发生机制尚未完全明确ꎬ缺乏有效的治疗手段及药物[１]ꎮ全反式维甲酸(ａｌｌ￣ｔｒａｎｓｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄꎬＡＴＲＡ)是维生素Ａ的衍生物之一ꎬ其在体内通过维甲酸受体(ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄｒｅｃｅｐｔｏｒꎬＲＡＲ)发挥作用ꎬ目前发现ＲＡＲ有３种ꎬ分别是ＲＡＲα㊁ＲＡＲβ和ＲＡＲγ[２]ꎮ阻抑素是一种抗增殖蛋白ꎬ目前发现其具有调控细胞分化及参与细胞线粒体呼吸链的作用及功能[３－４]ꎮ我们在前期研究中发现ꎬ阻抑素参与细胞外基质的积聚和ＲＩＦ的发病过程ꎬ而ＡＴＲＡ可以通过调控阻抑素的表达而发挥抗ＲＩＦ的作用[５－６]ꎬ但具体的作用机制尚不明确ꎮ本研究旨在探讨ＡＴＲＡ是否可通过ＲＡＲα调控阻抑素表达ꎬ从而发挥延缓ＲＩＦ进展的作用ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀实验动物㊀３６只无特定病原体级雄性ＳＤ大鼠ꎬ６周龄ꎬ体质量１２０~１５０ｇꎬ购于汕头大学医学院实验动物中心[ＳＣＸＫ(粤)２０１７￣００１７]ꎮ所有大鼠常规喂养ꎮ１.２㊀主要试剂及仪器㊀ＥｌｉＶｉｓｉｏｎＴＭｐｌｕｓ广谱检测试剂盒购自福建迈新生物技术公司(批号:ＫＩＴ￣９９０２)ꎻＲＡＲα㊁阻抑素㊁Ⅳ型胶原蛋白(ｃｏｌｌａｇｅｎⅣꎬＣｏｌⅣ)和纤维连接蛋白(ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎꎬＦＮ)抗体均购自美国Ａｂｃａｍ公司(批号依次为ａｂ２８７６７㊁ａｂ７５７６６㊁ａｂ２３６６４０㊁ａｂ２４１３)ꎻＴＲＩｚｏｌＴＭＬＳＲｅａｇｅｎｔ试剂盒购自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司(货号:１０２９６０１０)ꎻ反转录试剂盒购自ＴａＫａＲａ公司(货号:ＲＲ０４７Ａ)ꎮＶｅｃｔｒａ成像分析系统购自美国ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ公司ꎻＡＢＩ７５００型荧光定量ＰＣＲ仪购自ＡＢＩ公司ꎮ１.３㊀ＲＩＦ模型建立及干预方法㊀采用随机数字表法将大鼠分为ＡＴＲＡ组﹑ＲＩＦ模型组和假手术组ꎬ每组１２只ꎮ腹腔注射浓度为３０ｍＬ/Ｌ的水合氯醛(３０ｍＬ/ｋｇ)麻醉大鼠后ꎬＲＩＦ模型组和ＡＴＲＡ组ꎬ在大鼠左背侧做长约３ｃｍ左右的切口ꎬ然后暴露肾脏ꎬ使用棉签寻找并钝性分离左侧输尿管ꎬ在肾盏和肾下极处采用３￣０丝线分别结扎输尿管ꎬ并离断输尿管ꎬ术毕缝合肌肉及皮肤ꎻ假手术组大鼠经水合氯醛麻醉后开腹只探及肾包膜ꎮ从术前第１天开始ꎬＡＴＲＡ组大鼠给予ＡＴＲＡ灌胃[１５ｍｇ/(ｋｇ ｄ)]ꎬ１次/ｄꎬ其余两组大鼠采用等量生理盐水灌胃ꎬ直至处死ꎮ分别在造模后第２周末及第４周末ꎬ每组各处死６只大鼠ꎬ摘取左侧肾脏组织分成两份ꎬ其中一份采用１００ｍｌ/Ｌ的甲醛溶液固定用于病理及免疫组化检测ꎬ另一份于液氮中速冻后ꎬ置于－８０ħ冰箱中用于ｍＲＮＡ检测ꎮ１.４㊀肾脏组织病理检查㊀采用常规石蜡包埋方法制作标本ꎬ切片厚３μｍꎬ行Ｍａｓｓｏｎ染色后ꎬ显微镜下观察肾脏组织的病理改变情况ꎮ随机选择肾间质区域２０个视野(４００倍)ꎬ计算ＲＩＦ指数[７]ꎬＲＩＦ指数(％)＝(纤维化面积/肾小管间质总面积)ˑ１００％ꎮ１.５㊀检测肾脏组织中ＲＡＲα㊁阻抑素㊁ＣｏｌⅣ和ＦＮ的蛋白表达㊀按照ＥｌｉＶｉｓｉｏｎＴＭｐｌｕｓ广谱检测试剂盒说明书ꎬ采用免疫组织化学法进行检测[８]ꎮ石蜡切片放置在６０ħ温箱中烘烤３ｈꎬ采用二甲苯脱蜡和梯度乙醇水化后ꎬ使用自来水冲洗ꎬ磷酸缓冲盐溶液(０.１ｍｏｌ/Ｌ)冲洗３次ꎬ３ｍｉｎ/次ꎻ采用柠檬酸盐缓冲液(０.０１ｍｏｌ/Ｌ)对肾脏组织抗原进行高温高压修复１０ｍｉｎꎬ室温冷却２０ｍｉｎ后ꎬ磷酸缓冲盐溶液冲洗３次ꎬ３ｍｉｎ/次ꎻ滴加３％过氧化氢溶液ꎬ常温孵育１０ｍｉｎ以封闭内源性过氧化氢酶ꎬ磷酸缓冲盐溶液冲洗３次ꎬ３ｍｉｎ/次ꎻ滴加兔抗大鼠ＲＡＲα(１ʒ３００)㊁阻抑素(１ʒ２００)㊁ＣｏｌⅣ(１ʒ１００)及ＦＮ(１ʒ１００)抗体ꎬ４ħ孵育过夜ꎬ常温复温３０ｍｉｎꎬ磷酸缓冲盐溶液冲洗３次ꎬ３ｍｉｎ/次ꎻ滴加聚合物增强剂(试剂Ａ)ꎬ室温下孵育２０ｍｉｎꎬ磷酸缓冲盐溶液冲洗３次ꎬ３ｍｉｎ/次ꎻ滴加酶标抗鼠/兔聚合物(试剂Ｂ)ꎬ室温下孵育３０ｍｉｎꎬ磷酸缓冲盐溶液冲洗３次ꎬ３ｍｉｎ/次ꎻ滴加新鲜配制的二氨基联苯胺显色剂ꎻ苏木素复染(约１５ｓ)ꎬ０.１％盐酸酒精分化ꎬ后使用磷酸缓冲盐溶液返蓝ꎻ自来水冲洗ꎬ梯度酒精脱水干燥ꎬ二甲苯透明ꎬ最后用中性树胶封片ꎮ同时用磷酸缓冲盐溶液代替一抗作为阴性对照ꎮ随机选择肾间质区域２０个视野(４００倍)ꎬ尽量避开大血管ꎬ选择黄色区域为表达区域ꎬ采用Ｖｅｃｔｒａ成像分析系统进行半定量分析ꎮ分别统计３组切片阳性反应的平均吸光度(Ａ)值ꎮ１.６㊀检测肾脏组织中ＲＡＲα和阻抑素ｍＲＮＡ的表达㊀从－８０ħ冰箱中取５０ｍｇ的新鲜冰冻肾脏组织ꎬ采用ＴＲＩｚｏｌＴＭＬＳＲｅａｇｅｎｔ试剂盒提取组织的总ＲＮＡꎬ采用紫外分光光度计测Ａ２６０㊁Ａ２８０值及其比值ꎬ并计算ＲＮＡ含量ꎬ采用１.５％琼脂糖凝胶电泳确定总ＲＮＡ的完整性和是否有降解ꎬ确定ＲＮＡ完整后采用反转录试剂盒进行反转录ꎮ冰上充分溶解反转录试剂盒中相关试剂后行下列操作:ＰＣＲ管中加入总ＲＮＡ０.３μｇꎬＯｌｉｇｏ(ｄＴ)Ｐｒｉｍｅｒ１μＬꎬ再加无ＲＮＡ酶水至１２μＬꎬ置于６５ħ下孵育５ｍｉｎꎻ然后在各个ＰＣＲ管中加入２μＬ１０ｍｍｏｌ/ＬｄＮＴＰ混合物㊁４μＬ５ˑ反应缓冲液㊁１μＬＲｅｖｅｒｔＡｉｄＴＭＭ￣ＭｕＬｖ和１μＬ核糖核酸酶抑制剂ꎬ反应体系总体积２０μＬꎬＰＣＲ仪上４２ħ６０ｍｉｎ㊁７０ħ５ｍｉｎ完成返转录ꎬ获得ｃＤＮＡꎮ将ｃＤＮＡ放置于－２０ħ冰箱中贮存和备用ꎮ根据ＴａｋａＲａ公司生产的ＰＣＲ反应体系(货号:ＲＲ８２０Ａ)配置反应体系ꎮ反应体系(２０μＬ):ｃＤＮＡ１μＬꎬＰＣＲ上游引物(１０μＭ)０.５μＬꎬＰＣＲ下游引物(１０μＭ)０.５μＬꎬ２.５ˑＲｅａｌＭａｓｔｅｒＭｉｘ/ＳＹＢＲ溶液９μＬꎬ超纯水９μＬꎮＰＣＲ反应条件:预变性时间为９５ħ１０ｍｉｎꎬ变性６８ħ１５ｓꎬ退火６０ħ３０ｓꎬ延伸６８ħ３０ｓꎬ循环数设定为４０ꎮ于ＡＢＩ７５００荧光定量ＰＣＲ仪进行ＰＣＲ反应ꎮ采用β肌动蛋白作为内参ꎬ引物由上海生工公司设计和合成ꎮＲＡＲα上游引物为５ᶄ￣ＡＴＧＴＴＣＣＣＣＡＡＧＡＴＧＣＴＧＡＴ￣３ᶄꎬ下游引物为５ᶄ￣ＣＴＧＴＣＣＧＣＴＴＡＧＡＧＴＧＴＣＣＡＡ￣３ᶄꎻ阻抑素:上游引物为５ᶄ￣ＡＡＧＣＡＧＡＧＡＧＡＧＣＣＡＧＡＴＴＴＧＴ￣３ᶄꎬ下游引物为５ᶄ￣ＴＧＡＴＡＡＧＣＡＡＴＧＴＣＣＴＣＡＧＣＡＧ￣３ᶄꎻβ肌动蛋白:上游引物为５ᶄ￣ＧＣＣＣＣＴＧＡＧＧＡＧＣＡＣＣＣＴＧＴ￣３ᶄꎬ下游引物为５ᶄ￣ＡＣＧＣＴＣＧＧＴＣＡＧＧＡＴＣＴＴＣＡ￣３ᶄꎮ采用相对定量２－әәＣｔ法[９]计算ＲＡＲα㊁阻抑素ｍＲＮＡ的相对表达量ꎬ其中әＣｔ＝Ｃｔ(目的基因)－Ｃｔ(内参基因)ꎬәәＣｔ＝әＣｔ(试验组)－әＣｔ(对照组)ꎮ以假手术组为对照组ꎬ其各目的基因ｍＲＮＡ表达量为１ꎮ１.７㊀统计学分析㊀采用ＳＰＳＳ１３.０软件进行统计分析ꎮ计量资料以(ｘʃｓ)表示ꎬ组间比较采用单因素方差分析或ｔ检验ꎻ采用Ｐｅａｒｓｏｎ检验进行相关分析ꎮ以Ｐ<０.０５为差异有统计学意义ꎮ２㊀结㊀果２.１㊀３组大鼠的ＲＩＦ指数比较㊀Ｍａｓｓｏｎ染色显示ꎬ肾小管及肾间质细胞胞浆㊁肌纤维染为红色ꎬ细胞核为蓝色ꎬ胶原纤维则染为绿色为阳性ꎮＲＩＦ模型组肾间质绿色阳性面积较假手术组明显增大ꎬ说明ＲＩＦ模型构建成功ꎮ造模后的第２周末和第４周末ꎬ假手术组㊁ＡＴＲＡ组㊁ＲＩＦ模型组的ＲＩＦ指数依次升高(均Ｐ<０.０５)ꎻ在ＡＴＲＡ组㊁ＲＩＦ模型组ꎬ第４周末的ＲＩＦ指数均高于第２周末(均Ｐ<０.０５)ꎮ见图１和表１ꎮ表１㊀３组大鼠的ＲＩＦ指数比较(ｘʃｓꎬ％)组别ｎ第２周末第４周末ｔ值Ｐ值假手术组６０.６３ʃ０.３１０.６５ʃ０.３６８.３４２０.４６５ＲＩＦ模型组６７.６９ʃ２.３２∗３８.２３ʃ６.７１∗６７.９３３０.０１２ＡＴＲＡ组６５.８２ʃ２.１３∗＆２５.３５ʃ４.９８∗＆８６.５４６０.０１５㊀㊀㊀㊀Ｆ值６７.６３４５４.９８３Ｐ值㊀０.０１２０.００２㊀㊀注:与假手术组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎻ与ＲＩＦ模型组比较ꎬ＆Ｐ<０.０５ꎮ㊀㊀㊀㊀㊀㊀图１㊀３组大鼠肾脏组织Ｍａｓｓｏｎ染色结果(ˑ４００)２.２㊀３组大鼠肾小管间质ＣｏｌⅣ和ＦＮ蛋白表达水平比较㊀造模后的第２周末和第４周末ꎬ假手术组㊁ＡＴＲＡ组㊁ＲＩＦ模型组的ＣｏｌⅣ和ＦＮ蛋白相对表达水平依次升高(均Ｐ<０.０５)ꎻ在ＡＴＲＡ组㊁ＲＩＦ模型组ꎬ第４周末的ＣｏｌⅣ和ＦＮ蛋白相对表达水平均高于第２周末(均Ｐ<０.０５)ꎮ见图２~３和表２ꎮ表２㊀３组大鼠肾小管间质ＣｏｌⅣ和ＦＮ蛋白的相对表达水平比较(ｘʃｓ)组别ｎＣｏｌⅣ第２周末第４周末ｔ值Ｐ值ＦＮ第２周末第４周末ｔ值Ｐ值假手术组６６.３７ʃ２.１２６.６５ʃ２.０７５.４３２０.６３４３.６７ʃ０.６８４.０２ʃ０.９３３.６５１㊀０.７６５ＲＩＦ模型组６１６.３２ʃ３.８７∗３８.３７ʃ５.３７∗８２.６７５０.００３１７.８７ʃ３.９８∗３０.５４ʃ４.６５∗１１０.５６２<０.００１ＡＴＲＡ组６１２.３７ʃ２.５６∗＆２４.６７ʃ５.６３∗＆５６.７５１０.００１１０.５２ʃ２.０２∗＆２１.５６ʃ３.２９∗＆８６.５６２㊀０.００１㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀Ｆ值１２１.５６２１５４.２６５７２.３６５１０６.３２５Ｐ值㊀０.００３㊀０.００１０.００３㊀０.００１㊀㊀注:与假手术组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎻ与ＲＩＦ模型组比较ꎬ＆Ｐ<０.０５ꎮ㊀㊀图２㊀３组大鼠肾脏组织ＣｏｌⅣ蛋白表达情况(免疫组化染色ꎬˑ４００)㊀图３㊀３组大鼠肾脏组织ＦＮ蛋白表达情况(免疫组化染色ꎬˑ４００)２.３㊀３组大鼠肾脏组织ＲＡＲα、阻抑素蛋白和ｍＲＮＡ的表达水平比较㊀造模后的第２周末和第４周末ꎬ假手术组㊁ＡＴＲＡ组㊁ＲＩＦ模型组的ＲＡＲα㊁阻抑素的ｍＲＮＡ及蛋白相对表达水平依次降低(均Ｐ<０.０５)ꎻ在ＡＴＲＡ组㊁ＲＩＦ模型组ꎬ第４周末ＲＡＲα㊁阻抑素的ｍＲＮＡ及蛋白相对表达水平均低于第２周末(均Ｐ<０.０５)ꎮ见表３~４及图４~５ꎮ表３㊀３组大鼠肾脏组织ＲＡＲα及阻抑素蛋白的相对表达水平比较(ｘʃｓ)组别ｎＲＡＲα第２周末第４周末ｔ值Ｐ值阻抑素第２周末第４周末ｔ值Ｐ值假手术组６１５.２４ʃ２.７６１４.９８ʃ２.６６８.９６２０.６３５３.２６ʃ０.８７３.５６ʃ０.９８３.６５２０.６７３ＲＩＦ模型组６８.２１ʃ２.４３∗３.２３ʃ０.９８∗３５.６４１０.００２０.８７ʃ０.０４∗０.３４ʃ０.０２∗２６.３５９０.００５ＡＴＲＡ组６１１.２３ʃ２.５６∗＆９.２３ʃ２.２８∗＆２８.６５１０.０２３２.０１ʃ０.５６∗＆１.３４ʃ０.７６∗＆２４.６３５０.００１㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀Ｆ值３２.６５４２７.５６２１２.５６２１５.３６２Ｐ值０.００５０.００７０.０２１０.０３３㊀㊀注:与假手术组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎻ与ＲＩＦ模型组比较ꎬ＆Ｐ<０.０５ꎮ表４㊀３组大鼠肾脏组织ＲＡＲα及阻抑素ｍＲＮＡ的相对表达水平比较(ｘʃｓ)组别ｎＲＡＲα第２周末第４周末ｔ值Ｐ值阻抑素第２周末第４周末ｔ值Ｐ值假手术组６１.０１ʃ０.０４１.０３ʃ０.０６６.３５６０.６７８１.０３ʃ０.０６１.０１ʃ０.０４３.２６１０.６９５ＲＩＦ模型组６０.２１ʃ０.０３∗０.０６ʃ０.０２∗２３.６９１０.００１０.３８ʃ０.０３∗０.２１ʃ０.０２∗２６.３５２０.００２ＡＴＲＡ组６０.６７ʃ０.１１∗＆０.３２ʃ０.０６∗＆３２.６５９<０.００１０.６３ʃ０.１２∗＆０.４３ʃ０.１１∗＆１６.３５２０.０３２㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀Ｆ值２３.６５９３２.６５３１９.５３６２６.５６３Ｐ值０.００１０.００３０.００２０.００１㊀㊀注:与假手术组比较ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎻ与ＲＩＦ模型组比较ꎬ＆Ｐ<０.０５ꎮ图４㊀３组大鼠肾脏组织ＲＡＲα蛋白表达情况(免疫组化染色ꎬˑ４００)㊀图５㊀３组大鼠肾脏组织阻抑素蛋白表达情况(免疫组化染色ꎬˑ４００)２.４㊀相关性分析㊀模型组中ꎬ第２㊁４周末时ꎬＲＡＲα蛋白表达水平与阻抑素蛋白表达水平均呈正相关(ｒ＝０.７７６ꎬＰ＝０.００１ꎻｒ＝０.８９６ꎬＰ＝０.００１)ꎻＲＡＲα蛋白表达水平与ＲＩＦ指数㊁ＣｏｌⅣ蛋白和ＦＮ蛋白表达水平均呈负相关(ｒ＝－０.８２３㊁－０.８４５㊁－０.８７５ꎬＰ＝０.００１㊁０.００１㊁０.００１ꎻｒ＝－０.８８９㊁－０.８７９㊁－０.８１６ꎬＰ＝０.００１㊁０.００１㊁０.００１)ꎮ３㊀讨㊀论㊀㊀ＡＴＲＡ是维生素Ａ重要的一种衍生物ꎬ目前有不少学者发现其具有抗细胞外基质积聚及抗纤维化的作用[１０－１２]ꎬ但其抗ＲＩＦ的机制尚不明确ꎮ部分研究表明ＡＴＲＡ可以发挥肾脏保护性作用ꎮ如Ｚｈａｎｇ等[１３]通过阿霉素构建肾小球硬化大鼠模型进行研究ꎬ发现ＡＴＲＡ可能通过抑制瞬时受体电位阳离子通道６的表达ꎬ起到延缓肾小球硬化的作用ꎮＴａｍａｋｉ等[１４]对糖尿病肾病小鼠模型进行研究发现ꎬＡＴＲＡ可能通过ＲＡＲα抑制骨形态发生蛋白４的表达ꎬ发挥减轻糖尿病小鼠肾小球基质积聚的作用ꎮＬｉｕ等[１５]通过５/６肾脏组织切除方法构建肾小球硬化大鼠模型ꎬ发现经ＡＴＲＡ治疗后肾小球硬化大鼠肾脏组织纤溶酶原激活物抑制剂￣１和α平滑肌肌动蛋白表达下降ꎬ肾小球硬化延缓ꎬ肾功能得到改善ꎮ本研究进一步探讨ＡＴＲＡ是否可通过ＲＡＲα调控阻抑素的表达ꎬ起到延缓ＲＩＦ的作用ꎮ本研究结果显示ꎬ与假手术组比较ꎬＲＩＦ模型组大鼠肾脏组织ＲＩＦ指数㊁ＣｏｌⅣ和ＦＮ蛋白表达增加(Ｐ<０.０５)ꎬ且第４周末的水平均高于第２周末ꎬ说明该组大鼠的ＲＩＦ在进展ꎻ而ＲＩＦ模型组ＲＡＲα㊁阻抑素的ｍＲＮＡ和蛋白表达水平均较假手术组下降ꎬ且第４周末的水平更低ꎬ且ＲＡＲα蛋白表达水平与ＲＩＦ指数㊁ＣｏｌⅣ蛋白和ＦＮ蛋白表达水平均呈负相关ꎬ这提示ＲＡＲα可能是ＲＩＦ的保护性因子ꎮ采用ＡＴＲＡ治疗后ꎬ虽然第４周末ＡＴＲＡ组大鼠ＲＩＦ指数㊁ＣｏｌⅣ和ＦＮ蛋白表达亦高于第２周末ꎬ但各个时间点其水平均较ＲＩＦ模型组下降(Ｐ<０.０５)ꎬ提示ＡＴＲＡ可延缓大鼠ＲＩＦ的进展ꎮ此外ꎬ造模后的第２周末和第４周末ꎬＡＴＲＡ组大鼠ＲＡＲα㊁阻抑素的ｍＲＮＡ和蛋白表达水平均高于ＲＩＦ模型组ꎬ且ＲＩＦ大鼠的ＲＡＲα蛋白表达与阻抑素蛋白表达水平呈正相关(均Ｐ<０.０５)ꎬ因此我们推测ＡＴＲＡ可能通过上调ＲＡＲα表达ꎬ对阻抑素表达进行调控ꎬ从而发挥延缓ＲＩＦ进展的作用ꎮ综上所述ꎬＡＴＲＡ能抑制ＲＩＦ大鼠肾脏组织ＣｏｌⅣ和ＦＮ的表达ꎬ同时ꎬ还可能通过上调ＲＡＲα表达ꎬ以调控阻抑素的表达ꎬ从而起到延缓ＲＩＦ进展的作用ꎬ但具体机制有待体外实验进一步研究ꎮ参㊀考㊀文㊀献[１]㊀ＦａｒｒｉｓＡＢꎬＣｏｌｖｉｎＲＢ.Ｒｅｎａｌｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓ:ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎ[Ｊ].ＣｕｒｒＯｐｉｎＮｅｐｈｒｏｌＨｙｐｅｒｔｅｎｓꎬ２０１２ꎬ２１(３):２８９－３００.[２]㊀ＬａｕｒｓｅｎＫＢꎬＧｕｄａｓＬＪ.ＣｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌｋｎｏｃｋｏｕｔｏｆＲＡＲαꎬＲＡＲβꎬａｎｄＲＡＲγｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙａｂｒｏｇａｔｅｓｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｒｅｓｐｏｎｓｅｓｔｏｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄｉｎｍｕｒｉｎｅｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ[Ｊ].ＪＢｉｏｌＣｈｅｍꎬ２０１８ꎬ２９３(３０):１１８９１－１１９００.[３]㊀Ｈｅｒｎａｎｄｏ￣ＲｏｄｒíｇｕｅｚＢꎬＡｒｔａｌ￣ＳａｎｚＭ.ＭｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｍｅｃｈａｎｉｓｍｓａｎｄｔｈｅＰＨＢ(ｐｒｏｈｉｂｉｔｉｎ)ｃｏｍｐｌｅｘ[Ｊ].Ｃｅｌｌｓꎬ２０１８ꎬ７(１２):２３８.[４]㊀ＡｎｄｅＳＲꎬＸｕＹＸＺꎬＭｉｓｈｒａＳ.Ｐｒｏｈｉｂｉｔｉｎ:ａｐｏｔｅｎｔｉａｌｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔａｒｇｅｔｉｎｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅｓｉｇｎａｌｉｎｇ[Ｊ].ＳｉｇｎａｌＴｒａｎｓｄｕｃｔＴａｒｇｅｔＴｈｅｒꎬ２０１７ꎬ２:１７０５９.[５]㊀ＬｉＺＹꎬＺｈｏｕＴＢꎬＱｉｎＹＨꎬｅｔａｌ.Ａｌｌ￣ｔｒａｎｓｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄａｔｔｅｎｕａｔｅｓｔｈｅｒｅｎａｌｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓｌｅｓｉｏｎｉｎｒａｔｓｂｕｔｎｏｔｂｙｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ￣β１/Ｓｍａｄ３ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].ＲｅｎＦａｉｌꎬ２０１３ꎬ３５(２):２６２－２６７.[６]㊀ＺｈｏｕＴＢꎬＱｉｎＹＨꎬＬｉＺＹꎬｅｔａｌ.Ａｌｌ￣ｔｒａｎｓｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｐｒｏｈｉｂｉｔｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｒｅｎａｌｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓｒａｔｓ[Ｊ].ＩｎｔＪＭｏｌＳｃｉꎬ２０１２ꎬ１３(３):２７６９－２７８２.[７]㊀ＹｏｋｏｉＨꎬＭｕｋｏｙａｍａＭꎬＮａｇａｅＴꎬｅｔａｌ.Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎｉｎｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅｔｉｓｓｕｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｂｙａｎｔｉｓｅｎｓｅｔｒｅａｔｍｅｎｔａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓｒｅｎａｌｔｕｂｕｌｏｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓ[Ｊ].ＪＡｍＳｏｃＮｅｐｈｒｏｌꎬ２００４ꎬ１５(６):１４３０－１４４０.[８]㊀苏丽娜ꎬ覃远汉ꎬ周添标ꎬ等.转化生长因子￣β１/Ｓｍａｄ３信号通路在肾间质纤维化大鼠肾脏组织中的表达和作用[Ｊ].实用儿科临床杂志ꎬ２０１１ꎬ２６(５):３２５－３２８. [９]㊀ＬｉｖａｋＫＪꎬＳｃｈｍｉｔｔｇｅｎＴＤ.Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｒｅｌａｔｉｖｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｄａｔａｕｓｉｎｇｒｅａｌ￣ｔｉｍｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲａｎｄｔｈｅ２(￣ＤｅｌｔａＤｅｌｔａＣ(Ｔ))Ｍｅｔｈｏｄ[Ｊ].Ｍｅｔｈｏｄｓꎬ２００１ꎬ２５(４):４０２－４０８. [１０]Ｓｉｅｒｒａ￣ＭｏｎｄｒａｇｏｎＥꎬＲｏｄｒíｇｕｅｚ￣ＭｕñｏｚＲꎬＮａｍｏｒａｄｏ￣ＴｏｎｉｘＣꎬｅｔａｌ.Ａｌｌ￣ｔｒａｎｓｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄａｔｔｅｎｕａｔｅｓｆｉｂｒｏｔｉｃｐｒｏｃｅｓｓｅｓｂｙｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＴＧＦ￣β１/Ｓｍａｄ３ｉｎｅａｒｌｙｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ[Ｊ].Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓꎬ２０１９ꎬ９(１０):５２５.[１１]ＬｉＸꎬＺｈａｎｇＬꎬＹｉｎＸꎬｅｔａｌ.Ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄｒｅｍｏｄｅｌｓｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ(ＥＣＭ)ｏｆｃｕｌｔｕｒｅｄｈｕｍａｎｆｅｔａｌｐａｌａｔｅｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｃｅｌｌｓ(ｈＦＰＭＣｓ)ｔｈｒｏｕｇｈｄｏｗｎ￣ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＴＧＦ￣β/Ｓｍａｄｓｉｇｎａ￣ｌｉｎｇ[Ｊ].ＴｏｘｉｃｏｌＬｅｔｔꎬ２０１４ꎬ２２５(２):２０８－２１５.[１２]ＬｅｅｍＡＹꎬＳｈｉｎＭＨꎬＤｏｕｇｌａｓＩＳꎬｅｔａｌ.Ａｌｌ￣ｔｒａｎｓｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄａｔｔｅｎｕａｔｅｓｂｌｅｏｍｙｃｉｎ￣ｉｎｄｕｃｅｄｐｕｌｍｏｎａｒｙｆｉｂｒｏｓｉｓｖｉａｄｏｗｎ￣ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＥｐｈＡ２￣ＥｐｈｒｉｎＡ１ｓｉｇｎａｌｉｎｇ[Ｊ].ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎꎬ２０１７ꎬ４９１(３):７２１－７２６.[１３]ＺｈａｎｇＬꎬＣｈｅｎＸＰꎬＱｉｎＨꎬｅｔａｌ.ＡＴＲＡａｔｔｅｎｕａｔｅｐｒｏｔｅｉｎｕｒｉａｖｉａｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＴＲＰＣ６ｉｎｇｌｏｍｅｒｕｌｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓｒａｔｓｉｎ￣ｄｕｃｅｄｂｙａｄｒｉａｍｙｃｉｎ[Ｊ].ＲｅｎＦａｉｌꎬ２０１８ꎬ４０(１):２６６－２７２. [１４]ＴａｍａｋｉＭꎬＴｏｍｉｎａｇａＴꎬＦｕｊｉｔａＹꎬｅｔａｌ.Ａｌｌ￣ｔｒａｎｓｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ４ｉｎｍｏｕｓｅｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙｔｈｒｏｕｇｈａｕｎｉｑｕｅｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄｒｅｓｐｏｎｓｅｅｌｅｍｅｎｔ[Ｊ].ＡｍＪＰｈｙｓｉｏｌＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌＭｅｔａｂꎬ２０１９ꎬ３１６(３):Ｅ４１８－Ｅ４３１. [１５]ＬｉｕＸꎬＬüＬꎬＴａｏＢＢꎬｅｔａｌ.Ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎｏｆｇｌｏｍｅｒｕｌｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓｗｉｔｈａｌｌ￣ｔｒａｎｓｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄｉｓｌｉｎｋｅｄｔｏｄｅｃｒｅａｓｅｄｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒ￣１ａｎｄα￣ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎ[Ｊ].ＡｃｔａＰｈａｒｍａｃｏｌＳｉｎꎬ２０１１ꎬ３２(１):７０－７８.(收稿日期:２０１９－１０－１５㊀修回日期:２０１９－１２－２０)。
《2024年ATRA对胃癌MGC-803细胞增殖和迁移的影响及机制研究》范文
《ATRA对胃癌MGC-803细胞增殖和迁移的影响及机制研究》篇一一、引言胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均居高不下。
因此，研究胃癌的发病机制及寻找有效的治疗手段显得尤为重要。
近年来，全反式维甲酸（ATRA）在肿瘤治疗中的研究逐渐增多，其具有抗肿瘤、抗血管生成等作用。
本篇论文旨在探讨ATRA对胃癌MGC-803细胞增殖和迁移的影响及其机制，以期为胃癌的治疗提供新的思路。
二、材料与方法1. 材料本实验所使用的胃癌细胞系MGC-803购自中科院细胞库。
ATRA购自Sigma公司。
实验所需的其他试剂和耗材均符合实验要求。
2. 方法（1）细胞培养与处理将MGC-803细胞培养于含有10%胎牛血清的DMEM培养基中，并在37℃、5%CO2条件下培养。
将细胞分为对照组和ATRA处理组，处理组细胞加入不同浓度的ATRA，观察其对细胞增殖和迁移的影响。
（2）细胞增殖检测采用MTT法检测细胞增殖情况，比较对照组和处理组细胞的增殖率。
（3）细胞迁移检测采用划痕实验和Transwell小室法检测细胞迁移能力，观察ATRA对MGC-803细胞迁移的影响。
（4）蛋白表达检测采用Western Blot法检测相关蛋白的表达情况，如E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、基质金属蛋白酶（MMP）等，以探讨ATRA 影响胃癌细胞增殖和迁移的机制。
三、结果1. ATRA对MGC-803细胞增殖的影响实验结果显示，ATRA处理后，MGC-803细胞的增殖率明显降低，且呈剂量依赖性。
说明ATRA能够抑制MGC-803细胞的增殖。
2. ATRA对MGC-803细胞迁移的影响划痕实验和Transwell小室法检测结果显示，ATRA处理后，MGC-803细胞的迁移能力明显减弱。
说明ATRA能够抑制MGC-803细胞的迁移。
3. ATRA影响MGC-803细胞增殖和迁移的机制Western Blot法检测结果显示，ATRA处理后，E-钙黏蛋白表达增加，N-钙黏蛋白和MMP表达降低。
急性早幼粒细胞白血病的治疗
急性早幼粒细胞白血病的治疗急性早幼粒细胞白血病（Acute Promyelocytic Leukemia，APL）是一种严重的血液病，通常表现为血小板减少、潜在出血和凝血障碍等病症。
该疾病的早期治疗非常重要，而且需要通过综合治疗方案来提高患者的生存率。
在以下的文章中，将详细介绍APL的治疗方法。
治疗方法:1. 化疗：化疗是APL的首要治疗方法。
综合治疗方案中通常包含了全反式维甲酸（ATRA）和烷化剂（如阿糖胞苷）等。
ATRA可以通过促进白细胞分化来抑制APL细胞的生长。
烷化剂则可以诱导APL细胞的凋亡。
此外，常配合靶向治疗药物，如阿那曲唑（Arsenic trioxide，ATO）能够进一步增加治愈概率。
2. 阿糖胞苷和三氟嘧啶：这些烷化剂被广泛应用于APL的化疗中。
他们通过插入DNA链中，阻断细胞分裂，引起癌细胞凋亡。
3. 全反式维甲酸（ATRA）：ATRA是APL的标准治疗药物。
它通过促进病变幼稚形态的细胞分化，抑制了白血病细胞的生长。
通常与其它药物如化疗疗法结合使用，提高治疗效果。
4. 靶向治疗药物：除了传统的化疗药物，靶向治疗药物也被应用于APL的治疗中。
其中一种广泛使用的药物是阿那曲唑（ATO）。
ATO能够针对特定的白血病细胞，引起其凋亡，并且有较低的毒副作用。
5. 造血干细胞移植：对于复发或高危患者，造血干细胞移植是一种重要的治疗选择。
通过将健康的造血干细胞移植至患者体内，可以重建患者的免疫系统，并有效控制癌细胞的复发。
选择合适的供者是非常重要的，一般可以选择同胞供者或无关供者。
6. 支持疗法：APL患者通常会伴有严重的血小板减少，这可能导致出血的风险增加。
因此，血小板输注成为支持疗法的主要方法之一。
此外，对于伴有弥漫性血管内凝血（DIC）的患者，静脉应用血小板块因子或凝血因子可能是必要的。
这些治疗方法是根据患者的具体情况进行综合治疗的。
主要基于化疗和细胞凋亡的治疗手段，可以有效地控制APL的发展，并提高患者的生存率。
《ATRA介导组蛋白修饰调控PIM-1抑制HL-60细胞增殖及诱导分化机制研究》范文
《ATRA介导组蛋白修饰调控PIM-1抑制HL-60细胞增殖及诱导分化机制研究》篇一一、引言近年来，全反式维甲酸（ATRA）在肿瘤治疗领域的应用逐渐受到广泛关注。
ATRA是一种重要的生物活性分子，能够通过多种机制调控细胞生长和分化。
特别是在急性髓系白血病（AML）的治疗中，ATRA发挥了重要的作用。
其中，通过调控组蛋白修饰，进一步调控细胞增殖与分化是一个关键环节。
本文将着重研究ATRA如何介导组蛋白修饰来调控PIM-1，从而实现对HL-60细胞增殖的抑制以及诱导其分化的机制。
二、文献综述ATRA是一种维甲酸类化合物，其通过与细胞内受体结合，进而激活或抑制一系列基因的表达。
在白血病治疗中，ATRA能够诱导白血病细胞向正常细胞方向分化。
组蛋白修饰是表观遗传学调控的重要方式之一，包括乙酰化、甲基化等。
这些修饰能够影响基因的表达，从而影响细胞的生长和分化。
PIM-1是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，与细胞的增殖和凋亡密切相关。
三、实验方法本部分将详细介绍研究过程中所采用的方法和技术。
包括细胞培养、ATRA处理、组蛋白修饰检测、PIM-1表达分析等。
四、实验结果1. ATRA处理后，HL-60细胞的增殖受到明显抑制，且随着处理时间的延长，抑制作用逐渐增强。
2. ATRA处理后，组蛋白的乙酰化程度增加，甲基化程度有所变化，表明ATRA能够影响组蛋白的修饰。
3. PIM-1的表达在ATRA处理后显著降低，表明ATRA可能通过调控PIM-1的表达来影响细胞的增殖和分化。
4. 通过生物信息学分析和实验验证，发现组蛋白修饰与PIM-1的表达之间存在相关性，表明组蛋白修饰可能是ATRA调控PIM-1表达的关键机制之一。
五、讨论根据实验结果，我们可以得出以下结论：1. ATRA能够显著抑制HL-60细胞的增殖，并诱导其向正常细胞方向分化。
2. ATRA通过介导组蛋白修饰来调控PIM-1的表达，从而实现对细胞增殖和分化的影响。
老药全反式维甲酸的免疫调节作用在多种自身免疫性疾病中有应用前景
老药全反式维甲酸的免疫调节作用在多种自身免疫性疾病中有应用前景发表于 2018-04-11 10:58:10作者：山西医科大学第二医院李小峰一、维甲酸概述维甲酸（retinoic acid，RA）又称视黄酸、全反式维甲酸( all-trans-retinoic acid，ATRA)、维生素甲酸及维A酸等，具有广泛的生物学功能，其不仅在生物个体发育及维持正常生理状态中有重要作用，而且有介导细胞分化、增殖、凋亡及免疫等功能。
维甲酸是维生素A的活性代谢产物或衍生物，在生物体内维生素A以醇的形成代谢转变为维A醛，再进一步转成维A酸。
在维甲酸生成过程中，需要多种酶的参与，如视黄醛脱氢酶(RALDHs)、维甲酸合成酶等。
研究发现，肠道中的树突细胞（Dendritic Cells,DCs）能将维生素A代谢为维甲酸，但并不是肠道中所有的树突细胞都有这种功能。
维甲酸是人体可合成的天然小分子物质，它可以直接进入细胞核发挥基因表达的调节作用。
维甲酸的生物学效应是通过其位于细胞核内的受体来实现的。
根据维甲酸分子中的极性基团及侧链不同，分为多种同分异构体，不同类型的维甲酸药物与不同受体结合，可产生不同的生物学效应。
维甲酸类药物包括多种同分异构体，如ATRA、13-顺式维甲酸和9-顺式维甲酸等，大多是ATRA。
维甲酸在临床上最早首先应用于皮肤科，主要用于治疗寻常痤疮、银屑病、鱼鳞病、扁平苔癣等疾病，后来用于治疗急性早幼粒细胞白血病（APL）等。
近年来有学者发现维甲酸对改善自身免疫性疾病也有一定的作用，如在类风湿关节炎、SLE和多发性硬化等免疫相关疾病均有报道。
二、维甲酸具有调节多种类型免疫细胞的功能，在免疫调节网络中发挥重要作用正常情况下机体免疫处于平衡状态，如Th17和Treg细胞平衡是机体维持正常免疫的基础。
当Th17细胞异常增高或Treg细胞异常减少就会造成免疫功能失衡，引起SLE的发生和发展。
1、维甲酸对Treg具有调节作用近年来认为，Treg在维持免疫稳态、以及对共肠微生物群和食物蛋白质在肠道中的耐受性起至关重要的作用。
全反式维甲酸在成年小鼠神经干细胞分化中的调控作用及机制
全反式维甲酸在成年小鼠神经干细胞分化中的调控作用及机制李先红;胡鹤娟;唐曦瀛;吴坚;黄金忠;姚允怡【摘要】目的研究全反式维甲酸(ATRA)对成年小鼠神经干细胞(NSCs)的调控、信号通路及对细胞色素P450(CYP450)家族的影响.方法分离并培养成年小鼠脑室下区NSCs,将细胞分为ATRA组和对照组,ATRA组加入10-6 mol/L ATRA,对照组正常培养.采用流式细胞仪检测两组细胞表面标记物,计算神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞和NSCs占总细胞数的百分比;Real-time PCR方法检测CYP450家族相关基因表达情况,筛选出有统计学意义的基因;ELISA法测定细胞色素P450还原酶(CPR)的活性;Western blotting法检测P38 MAPK通路相关蛋白P38、p-P38蛋白的相对表达量.结果 ATRA组NSCs主要是向神经元分化,也有一部分向星形胶质细胞分化,少突胶质细胞较少.与对照组比较,ATRA组P450家族基因中CYP26A1、CYP26B1、CYP26C1表达上调(P均<0.05).ATRA组CPR活性以及p-P38蛋白表达量均较对照组升高(P均<0.05).结论 ATRA促进小鼠NSCs向神经元分化,可能通过上调CYP450中的CYP26家族基因、增加CPR活性以及P38 MAPK通路发挥调控作用.%Objective To investigate the effects of all-trans-retinoic acid (ATRA)on signaling pathway and regula-tions of neural stem cells (NSCs)in adult mice and the effects on the family of cytochrome P450 (CYP450). Methods NSCs were isolated from the sub-ventricular zone (SVZ)of brain in adult mice and then were cultured. The cells were di-vided into the ATRA group and blank control group. The ATRA group was added with 10 - 6mol/L ATRA. Flow cytometry (FCM)was used to detect the cell surface markers in the two groups,and we calculated the percentage of neurons,astro-cytes,oligodendrocytes and the percentage of NSCsaccounting for total cells. The real-time PCR was used to detect the re-lated gene expression of CYP450 family,and we screened statistically significant gene. ELISA was applied to detect the ac-tivity of cytochromeP450 reductase (CPR). The expression levels of P38 and p-P38 were detected by using Western blot-ting. Results In the ATRA group,NSCs mainly differentiated into neurons,and some differentiated into astrocytes,with less differentiation of oligodendrocytes. Compared with the blank control group,the expression of CYP26A1,CYP26B1 and CYP26C1 in the P450 family genes of the ATRA group was up-regulated (all P < 0.05). The activity of CPR and the ex-pression of p-P38 protein in the ATRA group were higher than those in the blank control group (both P <0.05). Conclu-sion ATRA promotes the differentiation of mouse NSCs into neurons,and it may play a regulatory role by up-regulating the CYP26 family genes in CYP450 and increasing CPR activity and the P38 MAPK pathway.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2017(057)042【总页数】4页(P9-12)【关键词】全反式维甲酸;神经退行性疾病;神经干细胞;细胞色素P450;细胞色素P450还原酶;P38MAPK通路【作者】李先红;胡鹤娟;唐曦瀛;吴坚;黄金忠;姚允怡【作者单位】苏州大学附属常州第一人民医院,江苏常州213000;苏州卫生职业技术学院;苏州卫生职业技术学院;苏州大学附属常州第一人民医院,江苏常州213000;苏州大学附属常州第一人民医院,江苏常州213000;苏州卫生职业技术学院;徐州医科大学【正文语种】中文【中图分类】R741神经干细胞(NSCs)是具有分裂潜能和自我更新能力的神经母细胞，主要存在于中枢神经系统(CNS)中，可分化为神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞[1]。
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CD11b表面抗原检测
* Nutlin-1增强ATRA分化诱导能力的作用与p53无关。 ？Nutlin-1增强ATRA分化诱导能力的作用机制是什么？
研究结果及结论4
Real Time PCR法
JC1、Rhodamine123外排实验
MTT法
Western Blotting法
* ATRA能够在HL60及NB4细胞中诱导p-gp的高表达，但不能在
p53野生型或p53缺失的U937细胞中诱导p-gp的高表达。
？ATRA诱导p-gp高表达的现象是否与Nutlin-1增强ATRA分化诱导能 Nhomakorabea的作用相关？
研究结果及结论5
p-gp ATPase 活性检测
Nutlin-1a
Nutlin-1b
Western Blotting法
Real Time PCR法
* Nutlin-1与ATRA均为p-gp的底物，Nutlin-1与ATRA共同作用时
能够抑制ATRA的外排，增强ATRA的分化诱导作用。
研究结论
ATRA
p-gp
ATRA Nutlin-1
ATRA
HL60/NB4 cells
Nutlin-1增强分化能力 的作用仅在经ATRA诱导 高表达p-gp的细胞株中 发挥，而与p53通路无关。
* Nutlin-1仅对p53野生型的白血病细胞具有一定的增殖抑制及凋亡
诱导作用，对p53突变或缺失的白血病细胞无细胞毒作用。
？Nutlin-1是否与ATRA具有协同诱导白血病细胞分化的作用？若有，
则其分子机制是否与p53相关？
研究结果及结论2
Counts
CD11b% CD11b表面抗原检测
CD11b表面抗原检测
研究背景——Nutlins
Stratege1
MDM2
1
p53
2
3
Degradation Nuclear export
Apoptosis Cell cycle arrest
DNA repair …
MDM2
p53
Stratege3 （Nutlins）
Stratege2
研究结果及结论1
MTT法
PI单染结合流式细胞术
研究背景——ATRA
肿瘤的诱导分化疗法是肿瘤治疗学研究的新领域。诱导分化 (induction of differentiation)是指恶性肿瘤细胞在体内外分化诱导 剂的作用下，向正常或接近正常细胞方向分化逆转的现象。 全反式维甲酸(ATRA)诱导分化治疗已成为治疗急性早幼粒细胞 白血病的首选手段。 维甲酸耐药的机制可能与维甲酸分解代谢作用增强、与胞浆维 甲酸结合蛋白的结合增强等作用相关。
Thank you！
NBT还原实验
台盼蓝染色结合细胞计数
* Nutlin-1仅对HL60或NB4细胞株（p53突变或缺失）具有一定的
增强ATRA分化诱导能力的作用，而对U937 （p53野生型）无增强作 用。
？Nutlin-1增强ATRA分化诱导能力的作用是否必须在p53无功能的
细胞株中才能体现？
研究结果及结论3
Western Blotting法