细菌单染色法及口腔微生物的观察

细菌单染色法及口腔微生物的观察

录入时间:2008-10-21 11:14:57 来源：google

一、实验目的和内容

目的：巩固无菌操作技术，掌握细菌的涂片和单染色技术，了解口腔中的微生物及其观察方法。

内容：1.学习细菌单染色操作技术。

2. 用单染色法或负染色法观察口腔中的微生物。

二、实验材料和用具

大肠杆菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylocosccus aureus)的斜面菌种。

吕氏美蓝染色液、石炭酸复红染色液、黑色素液或碳素墨水、香柏油、二甲苯、无菌水；

显微镜、擦镜纸、接种环、酒精灯、载玻片、吸水纸、无菌牙签。

三、操作步骤

(一)单染色法

1．涂片在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴无菌水，用无菌操作方法从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成薄膜，涂布面积约1～1.5cm2(图7—1A、B)。

2．干燥将涂片于室温中自然干燥。

3．固定手扶载片一端，使涂菌的一面向上，将载片通过微火2～3次。在火上固定时，用手摸涂片反面，以不烫手为宜。不能将载片在火上烤，否则细菌形态毁坏(图7—1C)。

4．染色将涂片置于水平位置，滴加染色液覆盖于涂菌处，染色约2min（图7—1D）

5．水洗倾去染色液，斜置载片，用自来水的细水流由载片上端流下，不得直接冲在涂菌处，直洗至从载片上流下的水中无染色液的颜色为止（图7—1E）。

6．干燥自然晾干或用吸水纸轻轻地吸干，注意不要擦掉菌体（图7—1F）。

7．待标本完全干燥后，先用低倍镜和高倍镜观察，将典型部位移至视野中央，再用油镜观察。

(二)口腔微生物的观察

1．单染色法

(1)在洁净无油腻的载片中央滴一小滴无菌水，用牙签取牙垢少许与水滴充分混匀，涂成薄膜。

(2)将涂片于室温中自然干燥后，按上面单染色法的步骤，进行固定、染色、水洗，干燥后镜检。

2．负染色法

(1)在洁净无油腻的载片的一端滴一小滴无菌水，用牙签取牙垢少许与水滴充分混匀，然后加少许黑色素溶液，充分混匀。

(2)另取一载片将其边缘放在含菌载片的一端，然后推向另一端，则含菌载片上的混合液被推成薄膜。

(3)于室温中自然干燥。

(4)镜检：将光线调亮，先用低倍镜观察，再用高倍镜观察。

四、注意事项

载玻片要洁净无脂，否则菌液涂不开。涂片时，滴水不要过多，挑菌量宜少，菌膜宜薄。五、实验报告

(一)绘图

1．单染色后观察到的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的形态图。

2．你所观察到的口腔微生物的形态图，并注明使用的染色方法，菌体和背景的颜色。(二)单染色法和负染色法操作要点。

七、问题和思考

1．涂片在染色前为什么要先进行固定?固定时应注意什么问题?

2．制备染色装片时应注意哪些事项，为什么?制片为什么要完全干燥后才能用油镜观察? 3．你知道口腔中通常存在哪些微生物吗?如何进行区分?