无菌检查法及其验证

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• 无菌检验培养基不可能支持所有微生物 的生长,选择了支持那些最有可能污染 药品和在药品中生长的微生物的营养的 培养基。
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供试品的无菌检查法
• 无菌检查法包括直接接种法和薄膜过滤法。只 要供试品性状允许,应优先采用薄膜过滤法。
• 进行供试品无菌检查时,所采用的检查方法和 检验条件应与验证的方法相同。
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培养基的储存
• 制备好的培养基应该保存在2-25℃、避光 的环境,若保存于非密闭容器中,一般在3 周内使用;若保存于密闭容器中,一般可在 1年内使用。
※应结合实际情况进行验证,以确定培养基 有效期。
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培养基的适用性检查
本检查可在供试品的无菌检查前或与供试 品的无菌检查同时进行。
• 无菌性检查
①重要性:培养基无菌不合格将导致实验 的假阳性结果。
②检查:每批培养基随机抽取不少于5支 或5瓶,硫乙醇酸盐流体培养基置3035℃培养,改良马丁培养基置23-28℃ 培养,培养14天,应无菌生长。
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培养基的适用性检查
• 灵敏度检查 ①菌种 • 硫乙醇酸盐流体培养基
金黄色葡萄球菌 生孢梭菌 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌
• 改良马丁培养基 白色念珠菌 黑曲霉
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培养基的适用性检查
②菌种选择的原则
• 代表性、普遍性、易存活、低或非致病性、标准菌株 (或该药品中常见的污染菌)。
• 金黄色葡萄球菌(代表革兰氏阳性菌)、铜绿色假单 胞菌(代表革兰氏阴性菌)、枯草芽孢杆菌(代表药 品中最常见或最易污染的菌)、生孢梭菌(代表厌氧 菌)、白色念珠菌(代表酵母菌)、黑曲霉(代表霉 菌)。
无菌检查法概念
• 指用于检查药典要求无菌的药品、医疗 器具、原料、辅料及其他品种是否无菌 的一种方法。
• 若供试品符合无菌检查法的规定,仅表 明了供试品在该检验条件下未发现被微 生物污染。
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无菌检查法概念
• 无菌检查是通过目检微生物在培养基中 的生长来判断结果。
• 无菌检验只能给出该批产品受污染的程 度。
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HTY无菌隔离系统
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无菌检查用培养基的种类及用途
• 硫乙醇酸盐流体培养基--培养好氧菌、 厌氧菌
• 改良马丁培养基--培养真菌及好氧细菌
• 选择性培养基--按硫乙醇酸盐流体培养 基或改良马丁培养基的处方及制法,在 培养基灭菌或使用前加入适量的中和剂 或表面活性剂。
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培养基的制备及装量
15ml,改良马丁培养基每管装量不少于10ml。 培养基的用量和高度同方法验证试验。 • 每种培养基接种的管数同供试品的检验数量。
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供试品的无菌检查法--薄膜过滤法
• 原理:薄膜过滤法是将供试品通过滤膜,微生物截留 于滤膜上,若有抑菌作用的药品同时使用冲洗液冲洗 滤膜上残留的供试品(如有残留会抑制微生物生长), 然后,培养滤膜看其是否有微生物生长。
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培养基的适用性检查
⑤结果判断
• 空白对照应无百度文库生长,若加菌的培 养基管均生长良好,判该培养基的 灵敏度检查符合规定。
• 试验同时应做空白对照
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培养基说明
• 无菌检验培养基所能支持生长的微生物 是有限的。
• 微生物种类繁多,这些微生物有广泛的 生长要求,如:营养、温度和氧等。
培养时间 18-24
24-48 5-7天
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培养基的适用性检查
④培养基接种
试验菌
培养基 每管装量 接种管数 接种量 培养时间
金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌
硫乙醇酸盐 12 ml
2 支 1 ml 3天
白色念珠球菌 改良马丁培养基 9 ml 黑曲霉
2支
1 ml 5天
※其中硫乙醇酸盐及改良马丁培养基均有 1支不接种作为空白 ※接种量 <100cfu(不能多)
• 菌种的要求:不得超过5代。采用适宜的菌种保藏方法 保存,以保证菌种的生物学特性。
• 加菌量:<100cfu。
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培养基的适用性检查
③ 菌液制备
试验菌
培养基
培养温度
金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌
营养肉汤
生孢梭菌
硫乙醇酸盐流体
白色念珠球菌 改良马丁培养基
黑曲霉
改良马丁琼脂斜面
30-35 23-28
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无菌检查的设施、环境、人员
• 规定应定期按《医药工业洁净室(区) 悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》 的现行国家标准进行洁净度的验证。
• 日常检验还需对试验环境进行监控。
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无菌检查的设施、环境、人员
• 无菌检查人员必须具备微生物专业知识, 并经过无菌技术的培训。
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无菌隔离系统
• 无菌检验合格只能说明被测样品无菌, 不能证明整批样品无菌。
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无菌检查的设施、环境、人员
• 检查环境应在洁净度10000级下的局部 洁净度100级的单项流空气区域内或隔 离系统中进行,其全过程必须严格遵守 无菌操作。
• 隔离系统按相关的要求进行验证,其内 部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
• 培养基可按处方制备,亦可使用按该处方生产 的符合规定的脱水培养基。
• 硫乙醇酸盐流体培养基的装量与容器高度的比 例应符合培养结束后培养基氧化层(粉红色) 不超过培养基深度1/2。供试品接种前,培养 基氧化层颜色不得超过培养基深度的1/5,否 则,须经100℃水浴加热至粉红色消失(不超 过20分钟),迅速冷却,只限加热一次。
• 薄膜过滤法可以提高无菌检验的检出率,特别 是抑菌性供试品,采用薄膜过滤法可以有效消 除供试品的抑菌性,提高检出率。
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供试品的无菌检查法--直接接种法
• 样品直接移入无菌培养基中。 • 每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品
体积不得大于培养基体积的10%。 • 同时硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于
• 无菌隔离系统是一个不受外界环境影响的、可进行无菌操作的独 立环境系统。
• 使用隔离系统的优点:它能创造一个持续高效的高度无菌空间,保 护产品免受外源性污染,包括操作人员、操作环境及外包装等的 污染,确保操作环境及实验物品表面能达到无菌要求,防止出现 假阳性结果,保证无菌实验结果的可靠性,从而实现一次检出的要 求;保护操作人员免受实验过程中的有害物质带来的污染;放置 隔离器的环境洁净度不需要特殊要求,移动方便等优点 。
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