各级医疗机构医院疟原虫检测血涂片镜检法
疟原虫镜检操作流程
疟原虫镜检操作流程疟原虫镜检操作可有趣啦，就像一场小小的探索之旅呢。
一、准备工作。
咱们先得把要用的东西都找齐喽。
那需要啥呢？显微镜肯定是必不可少的啦，就像战士上战场不能没有枪一样。
然后就是载玻片和盖玻片，这俩就像是舞台和舞台上的小屋顶，疟原虫就在这上面表演呢。
还有采血针、酒精棉球这些小物件，采血针用来取血，酒精棉球用来消毒，它们可都是小助手。
另外，染色剂也得准备好，这染色剂就像是给疟原虫化妆的东西，能让咱们把疟原虫看得更清楚。
二、采血。
采血这一步可得小心点儿。
找个舒服的地方让被采血的人坐好或者躺好，别让人家紧张，就像跟朋友聊天似的，说“放松哈，就一下下，不疼的”。
用酒精棉球在手指尖或者耳垂轻轻擦一擦，消消毒。
然后拿起采血针，就像拿一支小小的魔法棒，轻轻一扎，血就出来啦。
把这一滴血小心地滴在载玻片的一端，可别滴太多，也别滴到外面去了，一滴小小的、圆圆的血滴就像一颗红色的小珍珠在载玻片上呢。
三、涂片。
血滴在载玻片上了，咱们就要开始涂片啦。
拿另一个载玻片的一端，轻轻地斜着靠在有血滴的载玻片上，就像小滑梯一样。
然后慢慢地把这个载玻片往前推，让血滴在两个载玻片之间均匀地铺成薄薄的一层。
这一步可有点像画画的时候把颜料涂开，要涂得薄厚均匀才好呢。
如果涂得太厚了，疟原虫就会像躲猫猫一样藏在里面，咱们就不容易看到它啦；要是涂得太薄了，可能疟原虫都没几个在上面，也不好找。
四、固定和染色。
涂片弄好之后呢，要固定一下。
这就像是给疟原虫拍个照片定住它的样子。
可以用小火苗稍微烤一烤载玻片，不过得小心别烤糊了，要不然疟原虫就被烤成小焦炭啦。
固定好之后就到染色的时候了。
把染色剂小心地滴在涂片上，让染色剂把疟原虫包裹起来，就像给疟原虫穿上一件彩色的衣服。
等染色剂在涂片上待一会儿，就像让疟原虫在染缸里泡个澡，把自己染得美美的。
五、镜检。
终于到了最激动人心的镜检啦。
把载玻片放在显微镜的载物台上，就像把宝贝放在展示台上一样。
先从低倍镜开始看，慢慢地转动粗准焦螺旋，让镜头一点点靠近载玻片，就像在寻找宝藏一样。
疟原虫的镜检技术-2014.05
染液的染色原理
是染料与被染物的阴阳离子互相吸附而结合的一 种化学反应。 红、白细胞和疟原虫所含蛋白质的氨基酸电离出 的阴阳离子与酸碱染料伊红、美蓝有色集团所带 的阴阳离子相互结合便被染上不同的颜色。 疟原虫和白细胞的胞浆被染成蓝色，红细胞、疟 原虫和白细胞核被染成紫红色。
红、白细胞和疟原虫的蛋白质均由氨基酸组成，每个氨基酸电离出一个带 正电荷的-NH3+和一个带负电荷的-COO-。多色染剂的碱性染料美蓝的有色 基团带阳离子，可与细胞中带负电荷的 -COO-部分结合，使之成为蓝色。 疟原虫、淋巴和大单核细胞的胞浆、嗜碱性白细胞的颗粒等酸性蛋白质， 故被染成蓝色。酸性染料伊红的有色基团带阴离子，可与细胞中带正电荷 的-NH2+部分结合，使之呈红色；但美蓝与伊红都不能使疟原虫和白细胞的 核着色，可美蓝氧化后产生的天青有媒染作用，于是，在媒染物与染料的 共同作用下，疟原虫和白细胞核被染成紫红色。
（3）染液稀释后使用时间 必须现用现稀释染液，当时使
用，一般在0.5h内染色力最强。 姬氏和瑞氏染液的主要 成份是美蓝、伊红和由美蓝氧化产生的天青，三者能在甲 醇中溶解，但在水溶液中伊红遇到美蓝和天青即产生沉淀。
（4）染液的稀释浓度 染液的浓度高，着色就快而深，疟
原虫寄生红细胞的薛氏点粗大显著，但颜色常偏碱；染液 浓度过低则染色时间久，颜色偏酸，薛氏点不明显或消失。
疟原虫的镜检技术
山东省寄生虫病防治研究所
王用斌（助理研究员） 邮箱：aveo226@ Q Q：4397890
(一)制片与染色
血膜的制作（所需设备）
载玻片：新玻片浸入有液态洗涤剂的清水中10-20分
钟，干净棉巾逐个擦拭，再用清水冲洗干净，晾干，最 后用干净柔软的棉巾将玻片擦亮。已用过的玻片浸泡于 洗涤剂溶液中1-2天，或浸泡于煮沸的5%肥皂水中1-2 小时，再放入新配置的洗涤剂溶液中1-2小时，逐个擦 去血膜痕迹，清水漂洗干净，擦亮。
【医疗推荐】三甲医院-发热病人疟原虫镜检监测实施方案(001)
（九）、发热病人疟原虫镜检监测实施方案我国政府应联合国《在全球根除疟疾》要求，决定2015年大部分地区消除疟疾，2020年全国实现消除疟疾。
根据市《发热病人疟原虫镜检工作技术要求》我院承担部分发热病人疟原虫镜检工作.特制定本实施方案。
一、发热病人疟原虫镜检工作职责：1.感染管理科职责：发热病人疟原虫镜检工作部署、物品准备及管理。
2.临床科室职责：发热病人信息采集。
3.检验科职责：疟原虫涂片、疟原虫镜检诊断。
二、发热病人疟原虫镜检工作流程1.采集发热病人信息：临床科室（急诊、内科门诊）采集《疟疾发热病人血检登记表》的个人信息，并在备注中标明ID号，每周2，5送门诊检验科。
2.疟原虫涂片：门诊检验科制血涂片，每张血涂片涂制标准的厚薄血膜各一个（按流水编号，1-A, 1-B ）；专人将血涂片送至生化检验室。
3.疟原虫镜检诊断：生化检验室进行血涂片诊断，填写《疟疾发热病人血检登记表》的检测相关信息。
疟原虫镜检结果为阳性时，立即电话报感染管理科。
4.镜检涂片保存：按市疾控中心要求血涂片妥善保存1年。
非职业一氧化碳中毒事件监测报告实施方案根据卫生部《非职业性一氧化碳中毒事件应急预案》。
每年10.1---3.31，非职业性一氧化碳中毒事件，责任报告单位2小时内向疾控中心报告。
特制定我院非职业一氧化碳中毒事件监测报告实施方案一、一氧化碳中毒症状程度分级轻度co中毒：患者可出现头痛、头晕、失眠、视物模糊、耳鸣、恶心、呕吐、全身乏力、心动过速、短暂昏厥。
血中碳氧血红蛋白含量达10%-20%。
中度co中毒：除上述症状加重外，口唇、指甲、皮肤粘膜出现樱桃红色，多汗，血压先升高后降低，心率加速，心律失常，烦躁，一时性感觉和运动分离（即尚有思维，但不能行动）。
症状继续加重，可出现嗜睡、昏迷。
血中碳氧血红蛋白约在30%-40%。
经及时抢救，可较快清醒，一般无并发症后遗症。
重度co中毒：患者迅速进入昏迷状态。
初期四肢肌张力增加，或有阵发性强直性痉挛；晚期肌张力显著降低，患者面色苍白或青紫，血压下降，瞳孔散大，最后因呼吸麻痹而死亡。
疟原虫镜检技术操作规范(1)
疟原虫镜检技术操作规范疟原虫镜检是诊断疟疾、确定虫种及发现传染源的重要手段和方法，具有严格的操作程序和技术要求，为了统一方法、规范程序、提高血检质量，特制定本操作规范。
一、血片制作（一）所需器材载玻片玻片3张（1张作载玻片，1张作推片，1张作采血后滴于玻片备血用）采血针采用一次性采血针。
玻片盒存放50或100片玻片的木质或塑料盒。
皮肤消毒液、棉签或酒精棉球75%的酒精、安尔碘、碘伏等皮肤表面消毒剂。
记号笔用于玻片上书写血检病人基本信息。
（二）操作步骤1、载玻片基本信息登记取1张载玻片，首先用目测法将载玻片从右（磨砂处为右）到左等分成6格，接着用记号笔在第1、2格即（磨砂处）写下血检病人基本信息：编号、姓名、制片日期结果（镜检结束后补写）。
载玻片上信息应与血检登记表中的项目对应。
如图12、采血采血部位为手指末端或耳垂，婴儿可从拇趾或足跟取血。
用消毒剂消毒取血部位皮肤后，以一次性采血针迅速刺入取血部位1～2mm深，约挤出1-2滴血，滴于玻片上（以备涂制厚薄血膜用）。
3、涂制血膜用推片的左下角刮取玻片上的血液4～5μl，涂于载玻片的第三格（靠近磨砂侧），由里向外一个方向旋转2～4圈，涂成直径为0.8～1.2cm的圆形厚血膜；再用该角沾取血液1～1.5μl血置于载玻片的中心点即（第四格前缘中点）；接着用干棉球或卫生纸擦净推片角上的血渍；最后用推片的下缘置载玻片的中心点（1～1.5μl 血液处），当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持25°～35°角，从右向左迅速推成舌状薄血膜，即（薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部）。
如（图1）、（图2）疟原虫镜检涂制血膜方法示意图2薄血膜厚度应以红细胞之间互相接触而不相互重叠为佳，（直观透过玻片能清晰看到报纸上的字）；厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个白细胞为宜。
二、固定（一）所需器材1、甲醇2、器具玻璃棒、吸管（二）操作步骤薄血膜固定薄血膜晾干后，用玻璃棒沾取或用吸管吸取少量甲醇平铺于薄血膜上，起固定薄血膜作用，（注意不能固定厚血膜）。
疟原虫检测 血涂片镜检法
ICS11.020C62WS 中华人民共和国卫生行业标准WS/T 569—2017疟原虫检测血涂片镜检法Microscopic examination of blood films for malaria parasites2017-08-01发布2018-02-01实施前言本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。
本标准起草单位：海南省疾病预防控制中心、江苏省寄生虫病防治研究所、中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、云南省寄生虫病防治所、海南省农垦总局医院。
本标准主要起草人：王善青、高琪、汤林华、杨恒林、郑彬、胡锡敏、王光泽、李雨春、刘莹、欧阳范献。
疟原虫检测血涂片镜检法1 范围本标准规定了血涂片镜检法检测疟原虫的技术规范。
本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对疟原虫的显微镜检测。
2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
2.1疟原虫Plasmodium spp疟原虫是一类单细胞、寄生性的真核动物，是疟疾（malaria）的病原体。
寄生于人体的疟原虫主要有恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）、间日疟原虫（Plasmodium vivax）、三日疟原虫（Plasmodium malariae）和卵形疟原虫（Plasmodium ovale）等。
2.2血涂片 blood films将血液涂制于载玻片上制成的涂片。
供显微镜疟原虫检查用的血涂片包括厚血膜涂片和薄血膜涂片两种。
3 仪器和器材3.1 生物显微镜（100×油浸物镜、5×或10×目镜）。
3.2 计数器。
3.3 载玻片（无划痕无油污的洁净载玻片）。
3.4 推片。
3.5 血片染色架。
3.6 血片干燥架。
3.7 玻片盒。
3.8 染色盘和染色缸。
4 试剂和材料4.1 吉氏染色原液。
4.2 pH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）。
4.3 甲醇（分析纯）。
4.4 香柏油或专用浸油（折射率≥1.5）。
疟原虫镜检操作流程
疟原虫镜检血片制作与染色操作流程
1．填写登记表在“疟疾发热病人血检登记本”上为患者编号并登记其相关信息。
2．清洁玻片
3．玻片编号
用目测法将玻片分成六等分，左侧第一和等二等份用于编号。
同一患者玻片上号码应与登记本上一致。
4．采血
5．涂制厚片
（1）血量: 4～5微升
（2）位臵：玻片第三等份中央的位臵
（3）血膜大小：0.8～1.0厘米
6．涂制薄血膜
（1）血量: 1～1.5微升
（2）位臵：玻片第四至第六等份的位臵。
涂制薄血膜的血应滴在玻片中央稍偏右的位臵
（3）血膜大小：2.0厘米(宽)×2.5厘米(长)
7．吉氏染色液配制
（1）2%的吉氏染色液配制方法98毫升蒸馏水加入2毫升吉氏原液，混匀后即为2%的吉氏染色液。
也可用1支试管，按1毫升蒸馏水加入1滴吉氏原液的比例稀释染液，混匀后用于染色。
（2）注意事项2%的吉氏染色液必须现配现用。
8．吉氏染色方法
（1）待厚血膜干燥
（2）甲醇固定薄血膜
（3）待甲醇挥发干净
（4）滴2%的吉氏染液覆盖厚薄血膜，染色30分钟。
（5）取出染好的血片，连同染液在清水中轻轻漂洗一遍，洗去表面吸附的杂质。
（6）放臵干燥处晾干。
血膜面朝上，注意不要放反了。
检测疟原虫的两种方法结果分析
检测疟原虫的两种方法结果分析发表时间：2017-04-20T17:06:16.720Z 来源：《心理医生》2017年2期作者：魏容王明霞梁艳丽[导读] 厚、薄血片染色镜检法仍是目前基层医院检测疟疾最常用的方法，其检测敏感度仅到3～4个／万红细胞[3]。
（遂宁市中心医院检验科四川遂宁 629000）【摘要】目的：探讨疟原虫胶体金试剂条法与血涂片法在疟原虫检测中的结果比较分析。
方法：选取本院院2012年5月至2016年5门诊及住院收治发热并怀疑疟原虫感染患者86例，抽取血液标本，分别采用疟原虫胶体金检测卡与血涂片法进行疟原虫筛查，比较2种方法用于疟原虫检测诊断价值。
结果：全部患者血涂片法检出疟原虫阳性例数为8例，阴性78例，阳性率为10.3%；胶体金试剂条法检出疟原虫阳性例数为10例，阴性76例，阳性率为11.6%；胶体金检测卡用于疟原虫检测灵敏度为100.00%（10/8），特异度为97.43%（76/78）。
结论：胶体金试剂条法与镜检法相比无显著性差异，筛查疟原虫更具有操作简便，诊断速度快及技术要求低等优势，适用于基层医院和大规模普查。
【关键词】疟原虫；胶体金试剂条法；镜检法；诊断价值【中图分类号】R38 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）02-0152-02 川中地区虽然不属于疟原虫高发地带，但是随着外出务工人员（比如云南、非洲）的增加，疟原虫感染的风险也增加。
正确快速的检测疟原虫的研发工作是目前疟原虫的发展方向。
目前疟疾诊断常用也是金标准的方法是血涂片吉姆萨瑞士染色显微镜下查找疟原虫；但此方法操作繁琐，对实验室工作人员的操作水平有一定的要求，不适合基层快速诊断和大规模筛查[1]。
近年来，免疫层析试条技术的发展为快速诊断疟疾提供了条件，取得了一定的研究进展。
本试验来源于本院门诊及住院发热及怀疑有疟原虫感染的86例病人，抽取血液标本，用胶体金检测试试条法和血涂片两种方法检测疟原虫获得了一定的分析结论，现报道如下：1.资料与方法1.1 一般资料选取本院2012年5月至2016年5月门诊及住院发热并怀疑疟原虫感染患者86例，其中男76例，女20例；年龄21～58岁，平均（39.2±6.3）岁。
疟疾实验室检查方法
疟疾实验室检查方法疟疾是一种由疟原虫引起的传染病，该病在全球范围内广泛分布，并造成了大量的疾病和死亡。
为了及时准确地诊断和治疗疟疾，实验室检查方法起着至关重要的作用。
本文将介绍疟疾实验室检查的常见方法。
1. 血涂片检查血涂片检查是最常用的疟疾实验室检查方法之一。
该方法通过在玻片上涂抹患者的血液样本，并使用特殊的染色剂染色，然后在显微镜下观察。
疟原虫在血液中的形态特征使其能够与其他细胞区分开来，从而能够准确地诊断疟疾。
血涂片检查的优点是简单易行，结果迅速可靠。
然而，该方法需要经过专业人员的训练和经验，以确保结果的准确性。
2. 快速诊断试纸检测快速诊断试纸检测是一种简便快速的疟疾实验室检查方法。
该方法基于抗原-抗体反应原理，通过在试纸上加入患者血液样本，检测疟原虫抗原或抗体的存在与否。
试纸通常具有几个测试线，每个测试线代表一种疟原虫类型。
根据试纸上测试线的出现情况，可以快速诊断疟疾的类型。
快速诊断试纸检测的优点是操作简单，结果迅速，适用于一线医疗机构和偏远地区的疟疾筛查。
3. 分子生物学检测分子生物学检测是一种高灵敏度和高特异性的疟疾实验室检查方法。
该方法通过提取患者血液中的疟原虫DNA或RNA，然后使用特定的引物和荧光探针进行PCR扩增和实时荧光检测。
分子生物学检测能够检测到非常低浓度的疟原虫，具有高度的准确性和敏感性。
然而，该方法需要复杂的实验室设备和专业人员的操作技术，限制了其在资源匮乏地区的应用。
4. 免疫荧光检测免疫荧光检测是一种基于抗原-抗体反应的疟疾实验室检查方法。
该方法通过在患者血液样本中加入特定的荧光标记抗体，与疟原虫抗原结合形成复合物，然后在荧光显微镜下观察。
免疫荧光检测可以同时检测多种疟原虫类型，并具有高度的特异性和敏感性。
然而，该方法需要昂贵的设备和专业人员的操作技术，限制了其在一线医疗机构和偏远地区的广泛应用。
总结起来，疟疾实验室检查方法包括血涂片检查、快速诊断试纸检测、分子生物学检测和免疫荧光检测。
7疟原虫及虫卵显微镜检查
小滋养体（环状体）
瑞氏或姬氏染色后， 核：红色， 胞浆：兰色， 疟色素：代谢产物呈 棕黄色。
大滋养体
时间：10小时， 胞核：增大 胞质：增多，有空泡 ，有伪足，不规则， 出现细小杆状的疟色 素 红细胞：胀大、变形 ，颜色变淡，出现鲜 红色的薛氏小点。
未成熟裂殖体
时间：40h 胞质：变圆， 无空泡 核:开始分裂。少 于12个。 疟色素:开始集结。
阿米巴滋养体与包囊
蓝氏贾第鞭毛虫-滋养体
蓝氏贾第鞭毛虫—包囊
碘液染色法
物品准备：玻片、棉棒、生理盐水、、滴管、大便 杯、显微镜 检验步骤： 加1滴碘液生理盐水在载玻片。 取米粒大小粪便涂匀，能看清下面字迹。注意去除 粪便渣滓。 高倍镜下镜检，找到包囊后转换油镜镜头观察。镜 检顺序，由上至下，由左至右，不要遗漏。
质量控制
分辩标本采集注意事项 取带有脓血的部位； 盛标本器皿要洁净，防止标本被尿液污染； 考虑到治疗药物的影响，尽量服药前取标本； 快速送检； 标本要保温。
薄血膜制备法
（1）器材：刺血针、载玻片、酒精棉球、干棉球。 （2）试剂：瑞氏或姬氏染液、甲醇。 （3）操作方法： ①取一洁净无油脂的载玻片作载片及一张两端边缘 光滑的玻片作推片备用。 ②以70％酒精棉球消毒病人耳垂，待干后，针刺取 血 ③则用推片取适量血一滴，30～45度角与载片一端 接触后，迅速向前推成一薄膜，推动时注意保持一 定的速度和两片间的角度，切忌过分用力成中间停 顿，否则将使血球破碎或涂片不匀。 ④涂片完毕，将血片臵空气中干燥。
粪便水洗沉淀法
1）仪器：竹筷、40孔钢丝筛、锥形杯、污物缸、载玻 片、温箱 2）操作步骤 ①取30克左右的大便，通过40孔钢丝筛滤入盛满清水的 锥形杯内，残渣倒入污物缸。 ②静止25分钟左左，倒去上层粪水，留下沉淀物，再加 清水至满杯，再静止15～20分钟，倾去上粪水，如此 反复数次，直至上层液澄清为止，倾去上层液，留下 沉淀物。 ③用滴管吸取少量沉淀于载玻片上，在显微镜下寻找虫 卵，常规需查看三张片子。
11.疟原虫的显微镜检查_1
疟原虫的显微镜检查汪子伟（杭州市第一人民医院中心实验室）疟疾（malaria）是由人类疟原虫(Plasmodium)感染引起的寄生虫病，由雌性按蚊（Anopheles mosquito）叮咬传播。
疟原虫先侵入肝细胞内发育繁殖，再侵入红细胞内繁殖，引起红细胞成批破裂而发病。
临床上以反复发作的寒战、高热、汗出热退为特点，并常出现贫血、肝脾肿大。
因疟原虫虫株、感染程度、机体免疫状况和反应性等差异，临床症状和发作规律表现不一。
作为一种古老的疾病，早在公元二千多年前，《黄帝内经·素问》中即有《疟论篇》和《刺论篇》等专篇论述疟疾的病因、症状和疗法，并从发作规律上分为“日作”、“间日作”与“三日作”。
然而，直到1880年法国人Laveran在疟疾病人血液中发现疟原虫；1897年英国人Ross发现蚊虫与传播疟疾的关系，这时其病因才弄清楚。
疟疾是目前世界六大热带病和我国五大寄生虫病之一，危害极大。
据世界卫生组织统计，目前仍有92个国家和地区处于高度和中度流行，每年发病人数为1.5亿，死于疟疾者150万人。
它主要分布于热带、亚热带各国，我国主要在华南、华中(特别是云南和海南)。
我国1949年前疟疾连年流行，尤其南方，流行猖獗，病死率很高。
解放后，全国建立了疟疾防治机构，广泛开展了疟疾的防治和科研工作，疟疾的发病率已显著下降。
历代战争史实表明疟疾对军事行动影响颇巨，低疟区部队进入高疟区，常发生大量非战斗减员。
疟原虫属原生动物亚界--顶复门--孢子纲--疟原虫属。
寄生人类的疟原虫有：间日疟原虫、恶性疟原虫、三日疟原虫和卵形疟原虫等。
疟原虫通过蚊叮咬而感染人，疟疾的典型临床表现是周期性寒战、发热和出汗。
疟疾诊断主要靠外周血涂片检查。
疟疾的治疗主要是杀灭红细胞内的疟原虫，目前用的最多的是青蒿素类药物、或与奎宁、咯萘啶、磺胺多辛和乙胺嘧啶等联合用药。
一、疟疾的临床表现间日疟和卵形疟的潜伏期为13～15天，三日疟为24～30天，恶性疟为7～12天。
做疟原虫检查时不容忽视血涂片人工镜检
做疟原虫检查时不容忽视血涂片人工镜检摘要】目的研究当患者发热，怀疑疟疾时，除认真做好疟原虫检查外，同时，对患者血涂片做瑞氏染色人工镜检的必要性。
方法对持续发热或间断发热不退的患者，在认真做血常规、疟原虫检测的同时，对患者血涂片做瑞氏染色进行光学显微镜检查，并计数和观察红细胞和血小板。
结果所研究对象中，疟原虫检出率甚低，甚至于消除疟疾。
而瑞氏染色血涂片镜检，多数患者可见异常病理细胞，如：异型淋巴细胞、幼稚细胞等。
结论对于发热患者怀疑疟疾时，除认真做好疟原虫检查外，血涂片人工镜检以便发现病理变化，查明发热其它原因是不容忽视的。
【关键词】疟原虫检查发热人工镜检异常细胞近两年来，我院积极响应上级卫生部门的号召，决定在一定时间内消除疟疾，积极开展疟原虫检测工作。
本人在做疟原虫检测的同时，让怀疑疟疾的病人同时做血常规及血涂片瑞氏染色光学显微镜检查，结果发现由于疟疾引起发热的患者极少甚至为零。
而瑞氏血涂片染色镜检中发现多数患者检出病理异常细胞，从而找出发热的原因。
现笔者对工作进行统计整理，与同道共勉。
1 材料与方法1.1一般资料从2010年1月份至2012年7月份，本院门诊及住院病人因发热怀疑疟疾前来检验科要求做疟原虫检查的患者。
年龄：1-70岁，共计14480人。
1.2仪器及试剂疟原虫原装染液，Sysmex XT-1800i全自动血细胞分析仪及其配套试剂，真空采血针及EDTA-K2血液抗凝管，Olympus光学显微镜、瑞氏染液等。
1.3方法取患者静脉血2ml，EDTA-K2抗凝，由资深的专业检验人员做血常规测定，并同时严格按照疟原虫镜检操作规程做疟原虫检查，同时做血涂片，严格按照瑞氏染色程序进行，并进行光学显微镜检查，对100个白细胞分类，以查找涂片中的异常细胞。
并全面观察血涂片，以判断是否存在异常细胞，并观察红细胞及血小板的形态及分布。
2 结果从人工镜检瑞氏染色血涂片结果（表一）可以看出，在进行的14480例检测中，530例血细胞形态及比例均正常；5340例白细胞中，淋巴细胞或中性粒细胞比例发生异常；895例中性粒细胞核型发生变化，包括核左移、核右移、核破裂等现象；2371例中性粒细胞有核内部结构改变；异型淋巴细胞占3880例，其中异型淋巴细胞小于5%者3700例，多为小儿，异型淋巴细胞大于5%者180例；662例均可见到不同类型的幼稚细胞；14例见到浆细胞；2例见到异常组织细胞；2例在红细胞中见到可疑为疟原虫（有待上级部门认定）；865例中观察到红细胞形态异常；237例血小板的分布与机检不符。
疟原虫镜检血片的制作与染色.
2. 采血部位及取血方法 采血部位以耳垂较为 合适，也可在手指末端采血，婴儿可从拇趾或 足跟取血。先用75％乙醇棉球消毒取血部位后， 以一次性采血针迅速刺入取血部位1~2mm深， 然后用左手大拇指、食指和右手中指协同挤出 血滴。
3. 涂制厚血膜
取玻片2张，1张作载片，1张作推片（具有光滑 边缘）。用右手拇指和食指夹持推片侧缘中部， 用推片的左下角刮取血液4~5μl，再用该端中部 刮取血液1~1.5μl。将左下角的血滴涂于载片的中 央偏右处，由里向外划圈涂成直径为0.8~1cm的 圆形厚血膜（厚度以1个油镜视野内可见到5~10 个白细胞为宜）。 厚血膜的位置，位于玻片右1/3处。 厚血膜外观：圆形厚薄均匀，无划痕。过厚易于脱 落，过薄达不到检出率的要求。
5. 厚、薄血膜的位置
每张载玻片上可做1个薄血膜和1个厚血膜，如图
5. 染色前血膜的保存 血膜制成后，立即将受检者号码写在玻片上，血 膜朝下插入直竖的标本盒内，让血膜自然干燥后 才能染色。 血膜放置时间，夏天不宜超过48小时，冬天不宜 超过72小时，否则厚血膜会自然固定而不能溶血， 影响镜检。不能及时染色的血膜，可先用甲醇固 定薄血膜，将厚血膜溶血，晾干后包好，放入干 燥器中，置于冰箱内保存。临用时，将干燥器放 置室温中1~2小时后取出血片。
8ml
血片制作和染色质量评价标准
好血片制作质量:
厚血膜：血量 4.0～5.0ul,位置 玻片右1／3稍 偏右,直径 0.8～1.0cm，外观 圆形厚膜均匀。 薄血膜：血量 1.5～2.0 ul，位置 玻片1／2～1／ 3处，外观 舌状厚薄均匀；染色质量 外观兰紫色； 清洁度 外观光洁无油灰。
理想的染色结果是红细胞为淡红或淡紫红色，疟原 虫的胞质呈蓝色，核为紫红色，疟色素为棕褐色。
疟原虫镜检操作规程
疟原虫镜检操作规程疟原虫镜检操作规程1.标本采集1.1标本采集前病人的准备：间日疟及三日疟患者应在发作后数小时至10余小时采血；恶性疟患者，应在发作后20小时左右采血。
1.2标本种类：全血或末梢血。
1.3标本要求：厚血片溶血要及时。
2．标本运送：室温运送。
3．标本拒收标准：被细菌污染。
4．操作步骤 4.1 薄血片法：4.1.1在洁净玻片上，滴血液标本1滴，以常法推制成薄片。
4.1.2 血膜完全干燥后即可用瑞氏法染色，干后用油镜镜检。
4.2厚血片法：4.2.1在洁净玻片上，滴血液标本2滴。
4.2.2用推片将血液由内向外转涂成直径约1cm、厚薄均匀的血膜，在室温中自然干燥。
4.2.3 在干燥的血膜上滴加蒸馏水数滴，完全覆盖血膜，溶血约5分钟后倾去溶血液。
4.2.4 不必待干，进行瑞氏染色，干后镜检。
5．结果判断在油镜下观察，薄片须至少100个视野，厚血片至少20个视野，才能报告“未见疟原虫”；发现虫体后还应在薄血片上进行分类鉴别。
疟原虫胶体金法简易操作步骤原理基于双抗体夹心法工作原理，检测时，滴加5μL全血样本于试剂卡加样孔处，随之滴加4滴裂解液，裂解后的样本在毛细管效应下向上层析。
如样本中含有恶性疟原虫特异性乳酸脱氢酶（pflDH）和疟原虫乳酸脱氢酶（panLDH），将于胶体金标记物panLDH单克隆抗体反应形成复合物，在层析作用下前移，被预先固定在硝酸纤维膜上检测区的pflDH/panLDH单克隆抗体捕获，在检测区内形成1条/2条红色反应线，此时为阳性结果，如样本中无pflDH/panLDH抗原，在检测区内无红色反应线，此时为阴性反应。
步骤1.无菌采集患者EDTA-2K抗凝静脉血2ml。
1. 沿锡箔袋切口，撕开锡箔纸，取出疟原虫抗原检测卡，用铅笔或水写笔编号并做好登记。
2. 吸取5μL全血样本垂直滴加于加样孔A区，同时滴加4滴裂解液于加样孔B区。
3. 15分钟内观察显示结果，超过30分钟无临床意义。
疟原虫血涂片镜检技术规范
附件3疟原虫血涂片镜检技术规范一、吉氏液染色--光学显微镜（油镜）检查同时涂制薄血膜和圆形厚血膜，薄血膜须用甲醇固定，用吉氏染色液（Giemsa stain）进行染色。
吉氏染液用pH7.0-7.2的水配成3%的稀释液，可将血片插入染色缸内染色，或用滴管将稀释液滴在厚、薄血膜上，染色30min，若需快速染色，可在2ml水中加吉氏染液3滴，染色6min 。
对临床诊断为脑型疟者，宜用快速染色法，以便能尽快获得确诊依据。
现症患者至少检查100个厚血膜视野，带虫者应查完整个厚血膜，未发现疟原虫才判为阴性。
薄血膜可用于原虫形态鉴定。
以薄血膜中平均每100个红细胞中的原虫数，或厚血膜中平均每100个白细胞范围内的原虫数，推算每微升血中的原虫密度。
染色血片中的原虫核呈红色，胞浆呈兰色。
除环状体外，其他各期均可查见褐色的疟色素。
除恶性疟病例外，均可查见各期疟原虫。
一般恶性疟病例，仅查见环状体，或可见配子体。
但脑型疟病例，不仅原虫密度高，查见的环状体比一般的粗大，而且可查见大滋养体和裂殖体，疟色素呈黑褐色，这些特点对明确诊断很有帮助。
还有一点值得注意，在非洲感染的非重症恶性疟病例，其环状体往往比国内一般恶性疟病例所见的环状体粗大，胞浆较多，与间日疟原虫小滋养体相似，容易误判为间日疟原虫，但也不能同时查见大滋养体和裂殖体，这一点有别于间日疟原虫感染。
二、瑞氏液染色-光学显微镜（油镜）检查同时制作厚、薄血膜，用瑞氏染液（Wright stain）进行染色。
在厚血膜上加清水2-3滴溶去血红蛋白，染色效果较好。
染色时，先在薄血膜上直接加约1ml瑞氏液染色2min，然后在薄血膜上加与染液等量的水稀释，并引到厚血膜上共染5-6min。
其他参见吉氏液染色法。
三、荧光素吖啶橙染色-荧光显微镜检查要求涂制成直径为1.2-1.5cm的亚厚血膜，不宜过薄。
须用甲醇固定薄血膜，用清水溶去厚血膜的血红蛋白。
吖啶橙1g加pH6.5-7.0磷酸缓冲液100ml配制成1%吖啶橙母液。
疟原虫的镜检技术
单张血片染色：将处理好的血膜，加姬氏母液1-2滴，加中性蒸馏水15-30滴，染色30分钟左右，然后用清水轻轻将片上的染液冲洗干净，晾干镜检。
较理想的染色结果是红细胞为淡红或淡紫红色，疟原虫的胞质呈蓝色，核为紫红色，疟色素为棕褐色。
姬氏染液的染色方法
单击此处添加文本具体内容，简明扼要地阐述你的观点
202X
疟原虫的镜检技术
采血时间 现症病人和流调普查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。
疟疾典型的临床表现分前驱期、发冷（寒战）期、发热期、出汗期和间歇期五期。
间日疟在前驱期相当于肝内期疟原虫发育，因原虫密度太低，镜检多为阴性。发冷（寒战）期相当于红内期成熟裂殖体涨破红细胞期，镜检多为裂殖体和环状体。
恶性疟原虫--环状体
环纤细,约为RBC直径的1/6，RBC不胀大 核1个，但2个常见，红细胞常含2个以上原虫
薄血膜间日疟大滋养体形态
04
02
感染的红细胞：胀大褪色，出现形状大小相等、分布均匀、数目较多、鲜红色的薛氏小点。
虫体大小：较大。
胞浆：不规则，浅蓝色，出现阿米巴伪足，有空泡。
核： 红色，一个。
血膜的制作 用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘，称厚血膜。无特殊要求的可厚薄血膜分载玻片涂制。
发热病人血片
01
标本片
02
血膜的制作（涂片操作）
发热病人血片
涂制厚、薄血膜的位置 通常将厚、薄血膜涂在一张载玻片上。方法是将载片分为6等分，第1、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个；门诊和发热病人血片每片1人， 涂2个厚血膜1个薄血膜， 以防血膜脱落而影响检查；
疟疾镜检程序
疟疾防治镜检程序各级医院、卫生院等医疗机构临床诊断为疟疾、疑似疟疾、不明原因的发热病人应进行疟原虫血片镜检，及时发现疟疾病人，并以带虫发病率评价流行动态和评价消除疟疾工作的真实性。
镜检工作程序：1.采血对象：临床诊断为疟疾、疑似疟疾和不明原因的发热病人(简称三热病人)。
2.化验单：临床医师开具化验单，嘱咐患者到化验室血检。
3.记：镜检人员对血检对象按照登记本要求进行登记。
4.血消毒部位：用75％乙醇对采血部位消毒，采血部位多在手指末端，也可在耳垂采血。
5.血方法：消毒部位待干后，以左手拇指和食指夹住被检者手指尖稍下方或轻轻捻转耳垂边缘，右手持一次性消毒针，迅速刺入取血部位1～2mm，然后用左手大拇指，食指和右手中指协同挤出血滴。
6.血膜制作：取清洗过的玻片2张，1张做载片，1张做推片，要求推片的一侧边缘光滑，用右手大拇指和食指夹持推片中部，用推片的左下角刮取血液4～5μL，再用该端中部刮取血液1～1.5μL.将左下角的血液涂于载片的中央偏右，由里向外划圈涂成直径为0.8cm的圆形厚血膜（厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个白细胞为宜）。
用干棉球抹净角上的血渍，然后将推片下缘平抵载玻片的中线，当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持25°角，从右向左迅速向前推成舌状薄血膜。
推制时速度要均匀，血滴大小，推片与载片之间夹角大小以及推片速度快慢等都可影响血膜的厚薄。
制成的薄血膜应在玻片上形成一层平铺的血细胞，细胞之间相互接触而不相互重叠。
（1）厚薄血膜的位置形状和大小将玻片划成三等分，厚血膜应位于靠右侧处，薄血膜从中间起至左格中部止。
右端空格供记录姓名、编号或贴标签。
（2）厚血膜血量为5立方毫米左右（一小滴），自内向外回转扩大，涂成直径0.8-1.0厘米大小，厚薄均匀血膜。
（3）薄血膜薄血膜血量只需1.5-1.0立方毫米左右（约半颗粒大小），涂成舌状，长约3厘米，宽约2厘米。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
各级医疗机构医院疟原虫检测血涂片镜检法
1 范围
本标准规定了血涂片镜检法检测疟原虫的技术规范。
本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对疟原虫的显微镜检测。
2 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
2.1
疟原虫Plasmodium spp
疟原虫是一类单细胞、寄生性的真核动物，是疟疾（malaria）的病原体。
寄生于人体的疟原虫主要有恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）、间日疟原虫（Plasmodium vivax）、三日疟原虫（Plasmodium malariae）和卵形疟原虫（Plasmodium ovale）等。
2.2
血涂片 blood films
将血液涂制于载玻片上制成的涂片。
供显微镜疟原虫检查用的血涂片包括厚血膜涂片和薄血膜涂片两种。
3 仪器和器材
3.1 生物显微镜（100×油浸物镜、5×或10×目镜）。
3.2 计数器。
3.3 载玻片（无划痕无油污的洁净载玻片）。
3.4 推片。
3.5 血片染色架。
3.6 血片干燥架。
3.7 玻片盒。
3.8 染色盘和染色缸。
4 试剂和材料
4.1 吉氏染色原液。
4.2 pH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）。
4.3 甲醇（分析纯）。
4.4 香柏油或专用浸油（折射率≥1.5）。
4.5 二甲苯（分析纯）。
4.6 75%酒精。
4.7 一次性采血针。
4.8 一次性手套。
5 检测步骤
5.1 血涂片的制作
5.1.1 采血部位及取血方法
经75%乙醇消毒采血部位，待干后，用一次性采血针在耳垂或指端扎刺取血，婴儿可从拇趾或足跟扎刺取血。
取1张已消毒推片，用拇指和食指夹持推片侧缘中部，用推片左下角刮取血液4μL～5μL用于制作厚血膜，再用该端中部刮取血液1μL～1.5μL用于制作薄血膜。
5.1.2 厚血膜制作
取1张载玻片，将推片左下角的血滴涂于载玻片的中央偏左，由里向外划圈涂成直径0.8cm～1.0cm 的圆形厚血膜,厚度以1个油镜视野内可见到5个～10个白细胞为宜。
5.1.3 薄血膜制作
用干棉球抹净推片左下角上的血渍，然后将推片下缘平抵载玻片的中线，当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使2张玻片保持25°～35°，从右向左迅速向前推成舌状薄血膜。
每张载玻片上1个厚血膜和1个薄血膜（参见附录A）。
5.1.4 编号
血膜制好后水平放置，充分干燥后，用铅笔在玻片一侧毛玻璃上或在薄血膜上编号。
5.2 固定与溶血
5.2.1 薄血膜固定
将薄血膜一端朝下呈45°，用棉签蘸取甲醇溶液，均匀轻抹于薄血膜表面，避免碰触厚血膜。
5.2.2 厚血膜溶血
在干燥的厚血膜上滴加蒸馏水数滴，完全覆盖血膜，溶血数分钟，待血膜呈浅灰色，倾去溶血液。
厚血膜制作后1d内染色无需溶血，超过1d的应溶血。
5.3 吉氏染色
5.3.1 吉氏染液的配制（参见附录B）
吉氏染液包括吉氏染液原液和吉氏染液工作液。
吉氏染液原液由5g吉氏粉加250mL甘油充分研磨后加入250mL甲醇配制。
吉氏染液原液在避光条件下可长期保存。
常用的吉氏染液工作液包括2%，3%和10%浓度三种，分别由吉氏染液原液和pH 7.2 磷酸盐缓冲液（PBS）按比例配制。
吉氏染液工作液只能使用时新鲜配制。
5.3.2 单张血涂片染色（参见附录C）
单张血涂片吉氏染色常用于临床疟疾患者的显微镜疟原虫检测。
采用3%吉氏染液的常规染色方法血涂片染色质量较好，可长期保存，染色时间约30min。
采用10%吉氏染液的快速染色方法染色时间较短，8 min ～10min，但血涂片不适合长期保存。
5.3.3 成批血涂片染色（参见附录C）
成批血涂片吉氏染色常用于人群流行病学调查中的显微镜疟原虫检测，常采用2%吉氏染液进行批量血涂片染色。
5.4 镜检
5.4.1 显微镜检查
在染色后的血膜上加1滴香柏油或专用浸油，用100×油浸物镜、5×或10×目镜的光学显微镜检查。
染色质量较好的血膜，红细胞呈淡红色，嗜酸性粒细胞颗粒呈鲜红色，嗜中性粒细胞核呈紫蓝色，淋巴细胞及疟原虫胞浆呈蓝色或淡蓝色，疟原虫核呈红色。
除环状体外，其他各期均可查见疟色素。
疟原虫检测以厚血膜为主，虫种鉴别以薄血膜为主。
看片路线顺序为薄血膜从舌尖部分开始，厚血膜从上端或下端开始（参见附录D）。
5.4.2 结果判定
5.4.2.1 疟原虫检测阴性
厚血膜在油镜下，最少检查100个视野或整个厚血膜未查见疟原虫方可判为阴性。
5.4.2.2 疟原虫检测阳性
血膜中查到疟原虫判定为阳性，并根据疟原虫形态(参见附录E)确定恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫或混合感染。
5.4.3 疟原虫的计数
5.4.3.1 厚血膜的疟原虫计数法
镜检厚血膜，计数每个视野中的疟原虫数和白细胞数，计数200个白细胞以上，疟原虫密度很低时计数1000个。
用下式算出疟原虫密度。
疟原虫数÷白细胞数×每微升血中白细胞数= 疟原虫数／微升血。
如果无法进行白细胞计数，则以8000个白细胞／微升血计算。
5.4.3.2 薄血膜的疟原虫计数法
镜检薄血膜，计数每个视野中的疟原虫数和红细胞数，计数1000个红细胞以上。
用下式算出疟原虫密度。
疟原虫数÷红细胞数×每微升血中红细胞数＝疟原虫数／微升血。
如果无法进行红细胞计数，则
以男性500万个／微升血、女性按450万个／微升血计算。
薄血膜的疟原虫计数法适用于疟原虫密度很高时（每微升血中疟原虫数>16000个）的疟原虫计数。
5.5 血涂片保存
用吸水纸吸去已检血涂片血膜表面的香柏油或专用浸油，在血膜上滴加2滴～3滴二甲苯，然后用吸水纸吸干（专用浸油无需用二甲苯清洗，可直接用吸水纸吸干）。
置血涂片于玻片盒内，避光、干燥和阴凉保存，以备复核。
附录 A
（资料性附录）
厚血膜和薄血膜血涂片制作示意图
厚血膜和薄血膜血涂片制作示意图见图A.1。
图A.1厚血膜和薄血膜血涂片制作示意图
附录 B
（资料性附录）
吉氏染液的配制
B.1 吉氏染色原液配制
吉氏粉5.0g，甲醇250mL，甘油250mL。
将吉氏粉置于研钵中，加入少量甘油充分研磨，然后边加边磨，至甘油加完为止，倒入500mL有塞深色玻璃瓶中。
在研钵中加入少量甲醇，洗掉剩余部分，倒入瓶内，再次加甲醇，洗后再倒入瓶中，至甲醇洗净研钵中甘油为止。
塞紧瓶塞，置室温内，每天用力摇动溶液5min，3d后即可使用。
注意事项：将瓶塞塞紧，以避免蒸发和高湿造成的氧化；储存在深色的玻璃瓶中，避免阳光直射，储存时间越久染色效果越佳。
根据日常的需求，用干燥吸管吸取少量的染色原液到密闭的分装瓶中（大约25mL）。
切勿向原液中加入水。
B.2 pH 7.2 磷酸盐缓冲液（PBS）的配制
先制备好两种贮备溶液。
溶液I为9.5g无水磷酸氢二钠加蒸馏水至1000mL，溶液II为9.07g磷酸二氢钾加蒸馏水至1000 mL。
制备时将磷酸盐置于容量瓶中，加入部分蒸馏水摇匀使溶解后，再加入蒸馏水稀释至1000 mL，充分摇匀，塞紧备用。
临用时，取73 mL溶液I和27 mL溶液II，倒入1000 mL容量瓶中，加入部分蒸馏水，混合摇匀后，再加入蒸馏水稀释至1000mL的刻度，塞紧瓶塞反复摇匀后，即配制成pH7.2的缓冲溶液。
B.3 吉氏染色工作液的配制
B.3.1 3%吉氏染色工作液的配制
在97mLpH 7.2 磷酸盐缓冲液中加入3 mL吉氏染色原液并混匀。
B.3.2 10%吉氏染色工作液的配制
在9mLpH 7.2 磷酸盐缓冲液中加入1 mL吉氏染色原液并混匀。
B.3.3 2%吉氏染色工作液的配制
在98mLpH 7.2 磷酸盐缓冲液中加入2 mL吉氏染色原液并混匀。
B.3.4 注意事项
吸取吉氏染色原液时切勿摇晃盛染色原液瓶子。
吉氏染色工作液应现用现配，切勿将未用完的吉氏染色工作液倒回原液瓶中。