肝脏中转氨酶活力的测定
转氨酶活力测定实验报告
一、实验目的1. 了解转氨酶在生物体内的作用及其在临床诊断中的重要性。
2. 学习并掌握转氨酶活力测定的原理和方法。
3. 通过实验操作，提高对实验仪器的操作技能。
二、实验原理转氨酶（Transaminase）是一类催化氨基酸与α-酮酸之间氨基转移反应的酶，广泛存在于生物体内。
在人体内，转氨酶主要存在于肝脏、心肌、骨骼肌等组织中，其中以谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）最为重要。
ALT和AST活性的测定在临床上具有重要的诊断价值，可作为肝功能异常、心肌梗死等疾病的辅助诊断指标。
本实验采用分光光度法测定ALT活力。
ALT催化L-丙氨酸与α-酮戊二酸之间的转氨反应，生成L-谷氨酸和丙酮酸。
丙酮酸与2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）反应，生成丙酮酸-2，4-二硝基苯腙（PNP）。
PNP在碱性条件下呈棕色，其最大吸收峰在520nm处，通过测定520nm处的吸光度，可以计算出ALT的活力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 鸡肝- 0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.4）- 0.1mol/L丙氨酸- 0.1mol/Lα-酮戊二酸- 2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）- 30%氢氧化钠溶液- 碘化钾溶液- 硫代硫酸钠溶液- 酶活力测定试剂盒2. 实验仪器：- 酶标仪- 电子天平- 移液器- 离心机- 恒温水浴箱- 试管四、实验步骤1. 样品制备：将鸡肝剪碎，加入磷酸盐缓冲液（pH 7.4），匀浆，离心取上清液。
2. 标准曲线绘制：配制一系列不同浓度的丙酮酸标准溶液，加入2，4-DNPH和30%氢氧化钠溶液，在520nm处测定吸光度，绘制标准曲线。
3. 样品测定：将样品溶液、底物溶液、2，4-DNPH和30%氢氧化钠溶液加入试管，混匀，在520nm处测定吸光度。
4. 数据处理：根据标准曲线，计算样品中ALT的活力。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：在520nm处，吸光度与丙酮酸浓度呈线性关系。
血清中谷丙转氨酶活力测定结果
血清中谷丙转氨酶活力测定结果血清中谷丙转氨酶（ALT）活力测定是一种常见的实验室检测方法，常用于评估肝功能和诊断肝病。
本文将介绍血清中谷丙转氨酶活力测定结果的相关知识。
血清中谷丙转氨酶活力（ALT）是指血液中存在的一种酶的活性，通常用于评估肝脏功能的状况。
正常情况下，谷丙转氨酶的活力是很低的，一般小于40单位/升。
当肝细胞受损或病变时，会释放ALT，使其活力升高。
高浓度的ALT通常与肝脏病变有关，例如肝炎、肝硬化、脂肪肝、药物性肝病等。
此外，高ALT水平还可能与其他疾病有关，例如急性胰腺炎、心肌梗塞、重型结核等。
因此，如果血清中ALT活力超过正常范围，应及时进行检查和诊断。
血清中ALT测定通常是使用血清学方法进行的。
一般情况下，医师会在胳膊上绑上一条缚带，并在手腕或肘部的静脉内取一小样血液。
样本会送到实验室进行分析。
实验室会使用化学试剂和仪器来测量血清中ALT的活力。
结果会以单位/升（U/L）的形式报告。
正常情况下，成人男性的ALT浓度应在10-40 U/L之间，女性的ALT浓度应在7-35U/L之间。
但这些数值还受到年龄、体重、性别和肝脏状态等因素的影响。
因此，在解读ALT浓度时，医生还需要考虑患者的其他情况。
ALT浓度的升高程度也是确定病情的重要指标之一。
一般来说，当ALT浓度超过正常范围的两倍以上时，就可以诊断为肝炎或其他肝病。
此外，还有一种称为谷草酰转移酶（AST）的酶，也与肝脏有关，但其升高程度不如ALT明显。
需要注意的是，虽然ALT浓度升高可能表明肝脏病变，但不能单独确定肝病的类型和严重程度。
医生还需要进行其他检查和评估，例如肝脏超声、CT扫描、肝组织活检等，以帮助确定具体的病情。
总之，血清中ALT活力测定是一种常见的实验室检测方法，通常用于评估肝脏功能和诊断肝病。
需要注意的是，结果需要结合患者的其他情况进行解读，以便更准确地诊断和治疗肝病。
转氨酶检测实验报告
一、实验目的了解转氨酶在生物体内的作用，掌握转氨酶活力的测定原理和方法，并通过实验验证转氨酶活力在不同生理和病理状态下的变化。
二、实验原理转氨酶是一类催化氨基酸与α-酮酸之间氨基转移反应的酶，广泛存在于生物体内。
谷丙转氨酶（ALT）是其中一种重要的转氨酶，主要存在于肝细胞内，对肝脏的代谢和解毒功能至关重要。
当肝细胞受损时，ALT会从细胞内释放到血液中，导致血液中ALT活性升高，因此ALT检测是临床诊断肝功能的重要指标。
本实验采用连续监测法测定ALT活力，通过测定反应体系中NADH的生成量来反映ALT活力。
三、实验材料与仪器1. 仪器：722型分光光度计、恒温水浴锅、移液器、微量滴定板等。
2. 试剂：ALT测定试剂盒、NADH标准品、2,4-二硝基苯肼、2,4-二硝基苯肼溶液、磷酸盐缓冲液、丙酮酸标准品、丙酮酸溶液等。
3. 样品：血清样品。
四、实验方法1. 标准曲线的制作（1）配制丙酮酸标准溶液：将丙酮酸标准品用磷酸盐缓冲液溶解，配制成0.1 mmol/L的标准溶液。
（2）测定丙酮酸标准溶液的吸光度：取丙酮酸标准溶液0.1 mL，加入2 mL 2,4-二硝基苯肼溶液，混匀，置于37℃水浴锅中反应30 min，取出后加入1 mL碱液，混匀，在540 nm波长下测定吸光度。
（3）绘制标准曲线：以丙酮酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 血清ALT活力的测定（1）配制反应体系：取血清样品0.1 mL，加入1 mL磷酸盐缓冲液、0.5 mL NADH溶液、0.2 mL丙酮酸溶液，混匀。
（2）测定血清ALT活力：将反应体系置于37℃水浴锅中反应10 min，取出后加入1 mL碱液，混匀，在540 nm波长下测定吸光度。
（3）计算ALT活力：根据标准曲线，计算血清ALT活力。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作通过绘制标准曲线，得出丙酮酸浓度为0.1 mmol/L时，吸光度为0.8。
2. 血清ALT活力的测定（1）正常血清ALT活力：本实验中，正常血清ALT活力为25 U/L。
实验六肝脏谷丙转氨酶活力测定
肝脏谷丙转氨酶活力测定进入实验室要注意的问题安全第一，在实验室中使用挥发性试剂时应在通风橱中进行，以免发生中毒事件；不得在实验室中随意使用明火，因为实验室中有许多易燃易爆药品，使用明火可能引起火灾或引发爆炸事件；不得在实验室吃东西，实验结束后也应将手洗净再吃东西。
在实验室中不得嬉戏打闹，更不得用实验药品互相开玩笑。
实验中使用药品应尽量节约，不得浪费药品，未使用完的药品因倒人废液缸或指定的容器中，切不可倒入原试剂瓶以免污染试剂。
实验完成之前不能离开实验室，如有特殊原因要离开需经实验室负责人批准才能离开。
每个实验台内的各种仪器的摆放顺序要牢记，离开实验室前要将仪器按顺序摆放好。
养成一个好的习惯。
一．实验目的了解转氨酶的性质及临床意义，并掌握谷丙转氨酶活力的测定方法二．实验原理在氨基酸的分解代谢过程中，联合脱氨基为大多数氨基酸的主要代谢方式，通过转氨基作用与氧化脱氨基的作用偶联而完成。
本实验以丙氨酸和ā-酮戊二酸作为谷丙转氨酶的作用的底物，利用内源性磷酸吡哆醛作为辅酶，在一定条件及时间作用后来测定所生成的丙酮酸的含量来确定其酶的活力。
丙酮酸能与2，4二硝基苯肼结合，生成丙酮酸-2，4二硝基苯腙，后者在碱性条件溶液中呈棕色，基吸收光谱的峰为439-530nm，可用于测定丙酮酸的含量。
ā--酮戊二酸与能与2，4二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中的吸收光谱与丙酮酸二硝基苯肼稍有差别，在520nm波长处ā--酮戊二酸二硝基苯腙的吸光度远比丙酮酸2，4二硝基苯腙为低，因此在520nm处吸光度增加的程度与反应体系中的丙酮酸和ā--酮戊二酸的摩尔比基本上呈线性关系。
故可籍此可测定谷丙转氨酶的活力。
三、实验器材容量瓶100ml 4个500ml 2个；电子天平；玻璃棒；研钵；试管5支；试管架；移液管0.5ml 2支；1ml 2支；5ml 1支；滴管1支；分光光度计，比色皿4个；四.实验试剂1标准丙酮酸溶液：准确称取纯化的丙酮酸钠62.5mg，溶于100ml 0.05mol/L H2SO4中，现用现配。
生化实验_转氨酶(GPT)活性的测定报告
生化实验_转氨酶(GPT)活性的测定报告
转氨酶（GPT）是谷氨酸转氨酶，又称谷氨转氨酶，主要由肝脏细胞中的静息细胞和常染色体动物的其它细胞中的活性细胞分泌，它是肝脏的指标酶，其中转氨酶（GPT）是最重要的酶。
转氨酶活性的测定主要是为了检测某种疾病的活动性，如肝炎，及药物毒性试验中检测肝脏损伤代谢的重要指标。
本实验使用 Alanine Transaminase (GPT) Activity Assay Kit（Abbexa），用于检测和定量转氨酶（GPT）。
在实验过程中，主要利用血清或其它生物体中的转氨酶GPT，将多肽乙胺将氨基酸分解，在 NADH的金属酶反应中，生成二胺，其中含有标准参照品Alanine（Ala），本实验利用GREEN技术，来测定亞胺对反应物的影响，测定未受影响与受影响后的表現，并计算转氨酶活性（GPT）。
本次实验采用SV-96酶板，大肠杆菌为来源基因组，具有特殊功能。
实验步骤是首先采用水浴加热循环，将血清样本和样本建立混合液，然后通过两个反应温度，55℃和37℃对混合液进行加热和冷冻，以确保特定的反应温度，再用混合液经过两个步骤，先利用反应磷酸化谷氨醛，磷酸化 Ala，然后利用钉牢剂脱氢酶将 Ala脱氢为丙二醛（ALT），最后利用 GREEN 技术测量脱氢后的丙二醛（ALT）产生的发光信号，计算所测得的 GPT活性。
本实验结果显示，所测转氨酶活性（GPT）的值为 6.62 U/L，数据符合相关标准，说明样本的转氨酶活性（GPT）处于正常范围，没有出现异常情况。
本次实验结果可为临床诊断提供有效的依据。
测定转氨酶活力的实验报告
测定转氨酶活力的实验报告测定转氨酶活力的实验报告引言：转氨酶是一类重要的酶，广泛存在于生物体内，参与多种生物化学反应。
通过测定转氨酶的活力，可以了解生物体内的代谢情况，对疾病的诊断和治疗具有重要意义。
本实验旨在通过测定转氨酶的活力，探究其在生物体内的作用及其相关机制。
材料与方法：1. 实验动物：选取健康的小鼠作为实验对象。
2. 试剂：包括转氨酶检测试剂盒、生理盐水、麻醉剂等。
3. 仪器：分光光度计、离心机等。
实验步骤：1. 将小鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。
2. 实验组小鼠经过麻醉后，采集血液样本，离心分离血清。
3. 对照组小鼠同样采集血液样本，离心分离血清。
4. 使用转氨酶检测试剂盒，按照说明书进行操作，测定血清中转氨酶的活力。
5. 使用分光光度计，测定各组样本的吸光度值，并计算相应的转氨酶活力。
6. 对实验结果进行统计学分析。
实验结果：实验组小鼠的转氨酶活力明显高于对照组小鼠。
经过统计学分析，两组之间的差异具有显著性。
讨论：转氨酶活力的测定结果表明，在实验组小鼠中，转氨酶的活力明显增强。
这可能是由于实验组小鼠受到了某种刺激，导致转氨酶的合成和释放增加。
转氨酶在生物体内参与氨基酸代谢和脂肪酸代谢等重要过程，其活力的增强可能与这些代谢通路的活跃有关。
转氨酶活力的测定对于疾病的诊断和治疗具有重要意义。
例如，肝功能异常常常伴随着转氨酶活力的改变。
通过测定转氨酶活力，可以及早发现肝脏疾病，并进行相应的治疗。
此外，转氨酶活力的测定还可以用于评估药物的肝毒性，指导药物的使用和剂量调整。
然而，需要注意的是，转氨酶活力的测定结果受到多种因素的影响。
例如，实验条件的控制、样本的保存和处理等都可能对结果产生影响。
因此，在进行转氨酶活力的测定时，需要严格控制实验条件，并进行多次重复实验，以确保结果的准确性和可靠性。
结论：通过测定转氨酶的活力，我们可以了解生物体内的代谢情况，并对疾病的诊断和治疗提供重要参考。
检测转氨酶的实验报告
一、实验目的了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义，学习转氨酶活力测定的原理和方法。
二、实验原理转氨酶是一种催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的酶，广泛存在于生物体内。
谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）是其中两种重要的转氨酶，它们在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中起着重要作用。
当肝脏、心肌等组织发生病变时，血清中转氨酶活力常显著增加，因此在临床诊断上转氨酶活力的测定具有重要意义。
本实验采用分光光度法测定谷丙转氨酶活力。
谷丙转氨酶作用于丙氨酸-酮戊二酸后，生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙。
丙酮酸2，4-二硝基苯腙加碱处理后呈棕色，可用分光光度法测定。
从丙酮酸2，4-二硝基苯腙的生成量，可计算酶的活力。
三、实验材料1. 实验试剂：丙氨酸-酮戊二酸底物溶液、2，4-二硝基苯肼、氢氧化钠、氢氧化钾、盐酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、邻苯二甲酸氢钾、硫酸铵等。
2. 实验仪器：分光光度计、移液器、容量瓶、锥形瓶、试管、试管架、烧杯、玻璃棒等。
3. 实验对象：健康志愿者血液样本。
四、实验步骤1. 准备标准曲线：将已知浓度的丙酮酸2，4-二硝基苯腙溶液分别加入不同的试管中，加入氢氧化钠溶液，用分光光度计测定吸光度值。
以丙酮酸2，4-二硝基苯腙浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 检测谷丙转氨酶活力：取一定量的丙氨酸-酮戊二酸底物溶液和血液样本，加入2，4-二硝基苯肼溶液，混合均匀。
在规定时间内用分光光度计测定吸光度值。
根据标准曲线计算谷丙转氨酶活力。
3. 数据处理：计算实验重复组的平均值，并计算标准差。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据实验数据，绘制标准曲线，并计算相关系数。
2. 谷丙转氨酶活力测定：根据实验数据，计算谷丙转氨酶活力。
3. 数据分析：比较不同实验组的谷丙转氨酶活力，分析实验结果。
六、实验结论本实验成功测定了谷丙转氨酶活力，结果表明，分光光度法是一种有效且可靠的测定方法。
转氨酶的测定实验报告
一、实验目的1. 了解转氨酶在生物体内的作用及其在临床诊断中的意义。
2. 学习转氨酶活力测定的原理和方法。
3. 掌握分光光度法测定转氨酶活力的操作步骤。
二、实验原理转氨酶（Transaminase）是一类催化氨基酸与酮酸之间氨基转移反应的酶。
它们在生物体内广泛存在，尤其在肝脏、心肌等组织中活性较高。
转氨酶在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中发挥着重要作用。
本实验采用分光光度法测定血清谷丙转氨酶（ALT）活力。
谷丙转氨酶催化丙氨酸（Ala）与酮戊二酸（α-KG）之间的氨基转移反应，生成丙酮酸（Pyruvate）和谷氨酸（Glu）。
生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）作用，生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙（2，4-DNP-Pyruvate），加碱处理后呈棕色，可通过分光光度法测定其在特定波长下的吸光度，从而计算酶的活力。
三、实验材料与仪器1. 材料：血清样本、底物溶液、2，4-二硝基苯肼溶液、氢氧化钠溶液、pH7.4的磷酸盐缓冲液等。
2. 仪器：分光光度计、恒温水浴锅、移液器、试管等。
四、实验方法1. 准备工作：将血清样本、底物溶液、2，4-二硝基苯肼溶液、氢氧化钠溶液、pH7.4的磷酸盐缓冲液等实验材料准备好。
2. 标准曲线绘制：以不同浓度的丙酮酸为标准品，按实验步骤进行测定，绘制标准曲线。
3. 样本测定：将血清样本按照实验步骤进行测定，计算酶的活力。
五、实验步骤1. 标准曲线绘制：a. 取一系列不同浓度的丙酮酸标准品，加入2，4-二硝基苯肼溶液，混匀；b. 加碱处理后，于特定波长下测定吸光度；c. 以丙酮酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样本测定：a. 取一定量的血清样本，加入底物溶液，混匀；b. 于37℃水浴中反应一定时间；c. 加入2，4-二硝基苯肼溶液，混匀；d. 加碱处理后，于特定波长下测定吸光度；e. 根据标准曲线，计算酶的活力。
六、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据实验结果，绘制标准曲线，并计算相关系数。
肝脏谷丙转氨酶活力测定
实验八 肝脏谷丙转氨酶活力测定实验类型：验证性实验相关知识1. 酶活力：2. 酶活力单位(即酶含量的多少)国际单位 习惯单位：谷丙转氨酶在37度与底物作用30min 后，能产生2.5ug 的丙酮酸者为一个谷丙转氨酶活力单位 3.转氨酶4 谷丙转氨酶一、 实验目的1． 了解转氨酶的性质及临床意义 2． 掌握谷丙转氨酶活力的测定方法二、实验原理丙氨酸及α－酮戊二酸作用为谷丙转氨酶的作用底物，利用内源性磷酸吡哆醛作辅酶，在一定条件下及时间作用后测定所生成的丙酮酸的量来确定酶活力。
丙酮酸能与2,4－二硝基苯肼结合，生成丙酸－2,4二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈现棕色，其吸收光谱的峰为439~530nm ，可用于测定丙酮酸的含量。
α－酮戊二酸也能与2,4－二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中吸收光谱为与丙酸－2,4二硝基苯腙的吸光度有差别，在520nm 波长比色时，丙酸－2,4二硝基苯腙吸光度高出3倍。
在520nm 处吸光度增加的程度与反应体系中丙酮酸与α－酮戊二酸的摩尔比基本上呈线性关系，故可以测定谷丙转氨酶的活力。
三、实验器材、试剂、材料 1． 新鲜猪猪脏2． 722型分光光度计、剪刀、吸管3． 标准丙酮酸溶液；谷丙转氨酶底物；0.1mol/L 磷酸缓冲液（pH7.4）；0.02%2,4－二硝基苯肼；0.4mol/L NaOH 溶液2 ＋辅基为磷2 2 + + ‘ ‘四、实验操作步聚1.肝匀浆制备（1）将猪肝脏用生理盐水冲洗，滤纸吸干，称取肝脏0.25g，剪成小块，置于玻璃匀浆管内（或小研砵中），加入2.25ml预冷的pH7.40.1%mol/L磷酸缓冲液，制成10%肝匀浆。
（每四组1份）（2）吸取肝匀浆0.1ml于另一试管中，加入预冷的0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）4.9ml摇匀，为稀释肝匀浆（稀释50倍）（每四组1份）2.谷丙转氨酶活力测定（每组做1份）取试管4支按下表加液五、实验结果与讨论2.每毫升稀释肝匀浆谷丙转氨酶活力单位（谷丙转氨酶活力计算：规定酶在37度与底物作用30min后，能产生2.5ug的丙酮酸者为一个谷丙转氨酶活力单位）3.每克肝脏谷丙氨酶的活力单位。
肝脏谷丙转氨酶活力测定
或 组织捣碎机 2. 37℃水浴 3. 分光光度计 4.比色皿
四. 实验试剂
1.标准丙酮酸 2.谷丙转氨酶底物 3.0.1M pH7.4 PB 4.0.02% 2,4-二硝基苯肼溶液 5.0.4M NaOH 6.新鲜肝脏（购买或取活的小白鼠肝脏）
五、实验步骤
1.肝匀浆
COOH CH 2 2 C O COOH COOH CH 2 CH 2 C H N H2 COOH GPT CH
C H3 CHNH 2 COOH
C H3 C O COOH N O2 H2N H N
2,4-二硝基苯肼
CH 3 C N COOH H2 O N O2 NH
N O2 N O2
丙酮酸二硝基苯腙
3.计算
每ml肝匀浆谷丙转氨酶活力单位（U/ml） D = （A—B）× 2 S ×2.5 说明：A：样品A 520nm B：对照A 520nm 2：标准丙酮酸浓度 2.5：谷丙转氨酶换算单位
S：标准A 520nm
五、实验步骤
试管 试剂(ml) 谷丙转氨酶底物 肝匀浆 2.4-二硝基苯肼 谷丙转氨酶底物 0.4M NaOH A 520nm 测定管 （A） 0.5 标准管 （S） 0.5 对照管 （B） —— 空白管 —— 0.1（H2O） 0.5 0.5
称取0.5g 肝脏，剪成小块，加入预冷的pH7.4的PBS 4.5ml，在冰水浴中制成 10%的匀浆， 4000rpm冷冻离心10分钟后保存在冰水中备用。
2. 谷丙转氨酶活力的测定
1）取4支试管，标注名称，按照下表操作 2）计算酶活力 本法规定：酶在37℃ 与底物作用30分钟，产生2.5μg 丙酮酸为一个谷丙转 氨酶活性单位。
37℃ 水浴5 分钟 0.1 0.1（标准丙酮酸） 0.1 混匀后 37℃水浴 准确保温30分钟 0.5 0.5 0.5 —— —— 0.5 混匀后 37℃水浴 准确保温20分钟 各加5ml ，混匀，静置10min，读A 520nm
分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力实验原理的教学
在医学实验中，测定血清谷丙转氨酶（AST）活力是一项常见的实验项目。
AST是一种存在于细胞质和线粒体中的酶，其活力的变化与肝脏疾病、心肌梗塞等疾病有关，因此对其活力的测定具有重要的临床意义。
分光光度法是一种常用的测定AST活力的方法，其原理简单、灵敏度高，被广泛应用于实验室教学和临床实验中。
本文将介绍分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力的教学方法及实验原理。
二、实验原理1. 原理概述分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力的原理是通过测定NADH在340nm处的吸光度变化来间接测定AST的活力。
在AST催化下，谷丙酮酸被转化为丙酮酸，同时NADH被氧化为NAD+，在这个过程中，NADH的量减少，其在340nm处的吸光度也随之下降。
通过测定NADH在340nm处的吸光度变化可以间接测定AST的活力。
2. 实验步骤（1）样品制备：将待测血清标本离心沉淀，取清澈液体作为实验样品。
（2）反应体系配置：在离心管中依次加入0.1mol/L磷酸缓冲液、0.1mol/L谷氨酰胺、0.005mol/L的NADH和待测血清标本，将混合液置于37℃水浴中预温。
（3）光度计调零：将光度计调零，设置吸光度波长为340nm。
（4）反应开始：向预温的混合液中加入谷丙酮酸，开始计时测定吸光（5）记录数据：间隔一定时间（例如30秒）记录一次吸光度值，直至吸光度不再发生变化。
三、教学方法1. 理论讲解：在实验前，对分光光度法的原理进行详细的讲解，包括NADH在340nm处的吸光度变化与AST活力的关系，以及实验的步骤和注意事项。
2. 演示操作：老师可以进行实际的操作演示，展示如何配置反应体系、如何操作光度计、如何记录数据等。
3. 学生操作：让学生分组进行实验操作，指导学生合理分配实验任务，注意安全操作，并及时解答学生在实验中遇到的问题。
4. 数据分析：引导学生利用实验数据进行分析，计算得出血清谷丙转氨酶活力的结果，并进行讨论和总结。
四、实验结果分析通过分光光度法测定AST活力的实验，可以得到待测血清样本在一定时间内NADH在340nm处的吸光度值变化曲线。
转氨酶测定
二硝基苯腙（黄色），进而在碱性环境中生成 取血清加入1号试管内，准确保温30min。
取2支试管并标号，用1号试管作为测定管，2好试管作为空白对照管。 酶活力（U/100mL）的计算
红棕色的苯腙硝醌化合物。 在标准曲线上查出 丙酮酸的umol数（用1 umol丙酮酸代表酶活力单位），计算100mL血清中转氨酶的活力单位数。
据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或通过标准曲线查出血清中GPT的活力。 取血清加入1号试管内，准确保温30min。 测定转氨酶活力的方法很多，本实验采用分光光度法。
酶活力（U/100mL）的计算 在标准曲线上查出 丙酮酸的umol数（用1 umol丙酮酸代表酶活力单位），计算100mL血清中转氨酶的活力单位数。 取出后向各管加入NaOH溶液5mL。 室温下静置10min，以零号管作对照,于520nm波长处测定各管光吸收值。 向2支试管各加NaOH溶液5mL。 向2支试管各加NaOH溶液5mL。 室温下静置10min，以2号管作对照,于520nm波长处测定1号管光吸收值。 其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量，亦即与GPT活力的高低成正比关系。 各加入基质液，置37℃恒温水浴中保温10min以平衡内外温度。 磷酸缓冲液（）
血液中转氨酶活力的测定（分光光度法）
【实验目的】
1.掌握转氨酶活力测定的原理和方法。 2.了解血清谷丙转氨酶活力测定的临床意义。
【实验原理】
测定转氨酶活力的方法很多，本实验采用分 光光度法。血清中的谷-丙转氨（GPT），在 37℃、的条件下，可催化基质（底物）液中 的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：
谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定
谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定一、［实验目的］1.用纸层折法观察肝脏丙转氨酶ALT的转氨作用；2.用分光光度法测定血清丙转氨酶的活力；3.学习治疗检测SGPT的方法及原理；4. 了解检测肝损伤模型的制备及SGPT在科研中的应用。
二、［仪器与试剂］1.实验材料动物肝脏2.实验试剂(1) 0.9%NaCl 溶液(2)海砂(3)1%谷氨酸溶液(1%KOH溶液中和)(4)1%丙酮酸钠溶液(用1%KOH溶液中和)(5)0.1%KHCO廨液3(6)0.025%—澳乙酸溶液(用1%KOH中和)(7)2%乙酸溶液(8)酚的饱和水溶液：将2份酚和2份水(按重量计算)混合，放入分液漏斗中，振荡。
静止24h以后分层，将下部酚层放入瓶中备用。
新配制的酚展层剂可以反复使用1周。
(9)0.1%水合茚三酮的正丁醇溶液(10)0.1%标准谷氨酸溶液(11)0.1%标准丙氨酸溶液(12)1%KOH 溶液谷丙转氨酶活性的鉴定（纸层析法）一、［实验原理］观察肌肉糜中谷丙转氨酶所催化的氨基移换反应。
通过纸层析法检查底物谷氨酸的减少和产物丙氨酸的生成。
为防止丙酮酸被肌肉糜中的其它酶所氧化或还原，在反应系统中加入了抑制剂澳乙酸。
二、［实验操作］1.谷丙转氨酶提取液制备：2g肝脏+0.9%NaCL 6mL+海砂200mg，在低温下，研磨成浆，用稀薄的脱脂棉过滤，得提取液（滤液不清）。
2.转氨作用沸水浴2min，使蛋白质完全沉下，过滤，作层析3.纸层析操作方法取圆形层析滤纸1张，在圆心处用圆规绘出直径为3cm的同心圆（滤纸不可以折），通过中心将滤纸绘成四等分扇形。
用毛细管点样2-4次（直径不超过2mm），在滤纸的圆心上剪一小孔，直径约1-2mm，取一小滤纸条，将下端剪成刷状，在卷成灯芯插入圆形小孔，不能使灯芯突出纸面，将圆形滤纸平放在盛有层析液（水饱和酚）培养皿上，使灯芯向下与溶剂接触，用大小相同的培养皿盖在滤纸上，溶剂通过灯芯上升到滤纸上向四周展层，直到溶剂前沿移至距滤纸边缘约1cm处时停止（展层时间为1h），80-100℃烘箱干燥，喷洒水合茚三酮的正丁醇溶液，80-100℃显色。
ALT活性的测定
【参考值】：0～40U/L
ALT是丙氨酸氨基转移酶，也叫谷丙转氨 酶的缩写符号。正常情况下，该酶主要存在 于肝细胞内，只要极少量被释放入血浆中。 当组织发生病变时，细胞内ALT被大量释放 入血，引起ALT活性增高。
是诊断肝功能的主要指标之一。
ALT升高常见于：
1. 急性肝炎和中毒肝细胞坏死时显著增高。
实验器材
（1）试管
1支
（2）水浴箱
1台
（3）试管架
1个
（4）洗耳球
1个
（5）微量移液器
1支
（6）刻度吸量管（5ml） 1支
（7）半自动生化分析仪 1台
实验试剂
（1）血清 （2）试剂
五、实验内容和操作过程
1、加样： 取1支干净试管，加1mL试剂,10mL血清，混合均匀。
2、测定： 在URIT-800半自动生化分析仪上（波长340nm）
2. 慢性肝炎、肝硬化及心肌梗死时中度增高。
3.阻塞性黄疸和胆道炎症时轻度增高。外科手术，早期 妊娠时也有升高。
4. 生理性的升高如：过度劳累，剧烈运动、睡眠不好 油炸食品等。
5、血清谷丙转氨酶活性测定是目前临床上诊断肝脏
疾病的一种重要方法，但不具有特异性。
二、实验目的
1．掌握测定ALT活性的原理、方法和临床意义。 2．掌握URIT-800半自动生化分析仪的使用。
三、实验原理
1. L-丙氨酸 + a-酮戊二酸 ALT 丙酮酸 + L-谷氨酸 2. 丙酮酸 + NADH + H+ LDH L-乳酸 + NAD+ 3. NADH的氧化速率与血清中ALT的活性成正比，
通过测定340nm处NADH的下降速率， 即可计算出ALT的活性(单位：U/L)。
生化实验_转氨酶(GPT)活性的测定报告
实验二（2）转氨酶（GPT）活性的测定一．研究背景及目的转氨酶是生物体内重要的一类酶。
转氨酶催化α-氨基酸的氨基与α-酮酸的酮基之间的相互转化而生成一种新的氨基酸与一种的新的酮酸，这种作用被称为转氨基作用[1]。
转氨酶种类很多，体内除了赖氨酸、苏氨酸外，其余α-氨基酸都可参加转氨基作用并各有其特异的转氨酶。
其中以谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）最为重要。
GPT与GOT活性的测定在临床上有着重要应用，可作为一些疾病诊断的指标。
GPT催化的是谷氨酸与丙酮酸之间的转氨作用，GOT催化的是谷氨酸与草酰乙酸之间的转氨作用，草酰乙酸在柠檬酸苯胺溶液中可以转变为丙酮酸与二氧化碳。
由于都有丙酮酸的生成，所以可以通过实验测定一定时间内丙酮酸的生成量而计算这两种转氨酶的活性。
本实验以动物的新鲜肝脏和血清为材料，分别测定其中的GTP的活性，以此来研究该转氨酶活性的测定方法。
二．原理由于动物肝脏和血清中的转氨酶活性较高，易于测得，且动物或人的转氨酶活性的测定应用广泛、技术成熟，因此本试验选取家兔的新鲜肝脏和血清为实验材料，对其中的一种重要转氨酶——GTP的活性进行测定。
转氨酶活性测定的历史沿革建立了金氏法、穆氏法及赖氏法等较成熟的基本方法，本实验采用的是金氏法。
该方法对转氨酶活力的定义是：血清在37℃，pH7.4条件下，与底物作用60min后，每生成1μM丙酮酸为一个转氨酶活性单位。
丙酮酸含量的测定运用的是比色法。
丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应，生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，所以通过测定溶液在520nm下的光吸收值并与标准溶液比色便可计算出丙酮酸的含量，丙酮酸的含量对应于一定的转氨酶活力单位。
三．材料、试剂与仪器材料：新鲜家兔肝脏和血清试剂[1]：①磷酸盐缓冲液（pH7.4）甲液：1/15 mol/L磷酸氢二钠溶液乙液：1/15 mol/L磷酸氢二钾溶液取甲液825ml，乙液175ml，混合，测得pH为7.4即可。
转氨酶测定方法实验报告
一、实验目的1. 了解转氨酶在生物体内的作用及其在临床诊断中的意义。
2. 掌握转氨酶活力测定的原理和方法。
3. 学会使用分光光度法测定谷丙转氨酶（SGPT）的活性。
二、实验原理转氨酶是一种催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的酶，广泛存在于生物体内。
谷丙转氨酶（SGPT）主要存在于肝细胞内，当肝细胞受损时，SGPT会释放到血液中，引起血液中SGPT活性升高。
本实验采用分光光度法，通过测定谷丙转氨酶催化丙氨酸与酮戊二酸反应生成的丙酮酸量，计算酶的活力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 新鲜肝组织- 血清- 丙氨酸- 酮戊二酸- 2，4-二硝基苯肼- 碱性溶液- 酸性溶液- pH缓冲液- 标准曲线试剂2. 实验仪器：- 酶标仪- 移液器- 恒温水浴锅- 离心机- 烧杯- 移液管- 试管- 实验记录本四、实验步骤1. 准备标准曲线：将不同浓度的丙酮酸溶液与2，4-二硝基苯肼反应，生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙。
加入碱性溶液后，在酶标仪上测定吸光度，绘制标准曲线。
2. 样品制备：取新鲜肝组织，用生理盐水清洗后，加入适量的生理盐水，用组织匀浆器制成匀浆。
取血清样本，离心分离后取上清液。
3. 反应体系制备：取适量的丙氨酸和酮戊二酸，加入pH缓冲液，调整pH值。
取一定量的肝匀浆或血清，加入反应体系中，混匀。
4. 反应与测定：将反应体系置于恒温水浴锅中，在一定温度下反应一定时间。
取出反应体系，加入2，4-二硝基苯肼，混匀。
在酶标仪上测定吸光度，从标准曲线上查找对应的丙酮酸浓度。
5. 计算酶活力：根据酶活力定义，计算SGPT的活力单位。
五、实验结果与分析1. 标准曲线：绘制标准曲线，确定丙酮酸浓度与吸光度之间的关系。
2. 样品测定：分别测定肝匀浆和血清中SGPT的活力。
3. 结果分析：比较肝匀浆和血清中SGPT的活力，分析肝脏损伤程度。
六、实验结论通过本实验，我们掌握了分光光度法测定谷丙转氨酶（SGPT）的原理和方法。
血清谷丙转氨酶活力测定(改)
血清谷丙转氨酶活力测定实验目的1、学习测定谷丙转氨酶活性的原理。
2、掌握分光光度法定量测定技术。
实验原理转氨酶又叫氨基转氨酶，它催化转氨基反应。
转氨酶在氨基酸的分解、合成及三大物质的相互联系、相互转化上起很重要的作用。
转氨酶种类很多，在动物的心、脑、肾、肝细胞中含量很高，在植物和微生物中分布也很广，其中以谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）活力最强，GPT在肝细胞中含量最丰富，它催化a-酮戊二酸和L-丙氨酸反应生成L-谷氨酸和丙氨酸。
正常人的血清GPT含量很少，活性很低，但当肝细胞受损时（如肝炎等病变），酶从肝细胞释放到血液中，使血清中的GPT活性显著增高。
测定GPT是临床上检查肝功能是否正常的重要指标之一。
GPT作用于L-丙氨酸和a-酮戊二酸后生成的一种产物——丙酮酸可与2，4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙。
2,4-二硝基苯腙在碱性条件下呈棕红色，其颜色的深浅与丙酮酸的含量成正比，可用分光光度法进行丙酮酸定量测定。
因此在一定的条件下，可进行GPT活力的测定并计算出血清中GPT的活力单位数。
实验器材和试剂1、器材试管及试管架、移液器或吸量管、恒温水浴锅、721型分光光度计、坐标纸、新鲜人血清。
2、试剂0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）、2μmol/L丙酮酸钠标准液、GPT底物液、2，4–二硝基苯肼液、0.4mol/L NaOH溶液。
实验步骤1、标准曲线制作（1）.取试管6支，标号，进行操作。
试剂/试管编号0 1 2 3 4 5V(0.1mol/L磷酸缓冲液)ml 0.10 0.10 O.10 0.10 0.10 0.10 V（GPT底物液）/ml 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25V（丙酮酸钠标准液）/ml 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25相当于丙酮酸实际含量/μmol 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5（2）混匀后，置37℃水浴预温5分钟，再分别加入2，4–二硝基苯肼液0.5ml，混匀，保温20分钟，各加入0.4mol/L NaOH 5ml，混匀继续保温10分钟，取出，冷至室温。
转氨酶活力实验报告
一、实验目的1. 了解转氨酶在生物体内的重要作用。
2. 掌握转氨酶活力的测定原理和方法。
3. 学会运用分光光度法测定转氨酶活力。
二、实验原理转氨酶是一类催化氨基酸与酮酸之间氨基转移反应的酶。
在生物体内，转氨酶参与氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程。
转氨酶活力的高低可以反映肝细胞受损程度和肝功能状态。
本实验采用分光光度法测定转氨酶活力。
在特定条件下，转氨酶催化丙氨酸与α-酮戊二酸反应生成丙酮酸和谷氨酸。
丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸-2，4-二硝基苯腙，后者在碱性条件下呈棕色，可通过分光光度法测定其吸光度，从而计算出转氨酶活力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 丙氨酸- α-酮戊二酸- 2，4-二硝基苯肼- 磷酸氢二钠- 磷酸二氢钠- 碘化钾- 氯化钠- 丙酮- 酒精- 37℃水浴2. 实验仪器：- 电子天平- 移液器- 试管- 试管架- 玻璃搅拌棒- 分光光度计- 移液管- 容量瓶四、实验步骤1. 配制工作溶液：- 丙氨酸溶液：称取0.1g丙氨酸，溶解于100ml蒸馏水中，配制成0.1mol/L 的丙氨酸溶液。
- α-酮戊二酸溶液：称取0.1gα-酮戊二酸，溶解于100ml蒸馏水中，配制成0.1mol/L的α-酮戊二酸溶液。
- 2，4-二硝基苯肼溶液：称取0.1g2，4-二硝基苯肼，溶解于10ml丙酮中，配制成0.01mol/L的2，4-二硝基苯肼溶液。
2. 标准曲线的绘制：- 取7支试管，分别加入不同浓度的丙酮酸标准溶液，加入1ml 2，4-二硝基苯肼溶液，混匀后置于37℃水浴中反应60min。
- 在520nm波长下测定吸光度，以吸光度为纵坐标，丙酮酸浓度为横坐标，绘制标准曲线。
3. 转氨酶活力的测定：- 取7支试管，分别加入不同浓度的转氨酶溶液，加入1ml 丙氨酸溶液和1ml α-酮戊二酸溶液，混匀后置于37℃水浴中反应60min。
- 取出试管，加入1ml 2，4-二硝基苯肼溶液，混匀后置于37℃水浴中反应60min。
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实验九肝脏中转氨酶活力的测定
一、实验目的
1. 了解转氨酶的性质和临床意义；
2. 掌握谷丙转氨酶活力的测定方法
二、实验原理
本实验以丙氨酸的氧化脱氨基为例，分别测定谷丙转氨酶，谷氨酸脱氢酶活性外，又通过抑制剂观察肝组织中的联合脱氨基作用。
在谷丙转氨酶的催化下，丙氨酸和α-酮戊二酸作用生成丙酮酸和谷氨酸。
次反应可逆，平衡点近于1.0无论正向反应或逆向反应皆可用于测定此酶的活性，既可测定所产生的氨基酸，也可以测定生成的酮酸，因此可有多种测定方法。
本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸作为谷丙转氨酶作用的底物，利用内源性磷酸吡哆醛作为辅酶，在一定条件及时间作用后测定所生成的丙酮酸的量来确定其酶活力。
丙酮酸能与2,4-二硝基苯肼结合，生成丙酮酸2,4-二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈现棕色，其吸收峰为439-530nm，可用于测定丙酮酸的含量。
α-酮戊二酸也能与2,4-二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中吸收光谱与丙酮酸二硝基苯腙有差别，在520nm波长比色时，α-酮戊二酸二硝基苯腙的吸光度远较丙酮酸二硝基苯腙为低（约相差3倍）。
经转氨基作用后，α-酮戊二酸减少而丙酮酸增加，因此在波长为520nm 处吸光度增加的程度与反应体系中丙酮酸和α-酮戊二酸的摩尔浓度呈线性关系，故可借此测定谷丙转氨酶的活力。
三、实验材料、试剂和仪器
（一）材料与试剂
猪肝脏、乙醇、0.4mol/LNaOH
标准丙酮酸溶液（1mL 相当于500μg）：准确称取纯化的丙酮酸钠62.5mg，溶于100mL 的0.05mol/L的H2SO4中，此液需临用前配制。
谷丙转氨酶底物：称取L-丙氨酸0.90g 及α-酮戊二酸29.2mg，先溶于pH7.4 的0.1mol/L 磷酸缓冲液中，然后用1mol/L NaOH 调至pH7.4，再加pH7.4 的0.1mol/L 磷酸缓冲稀释至100mL，贮藏于冰箱内，可保存一周。
（试验了一下pH 接近7.5，中间未调整pH 值）
0.1mol/L 的磷酸缓冲液（pH7.4）：称取13.97gK2HPO4（如果是K2HPO4·∙H2O，则需称取18.31g）和2.69gKH2PO4 溶于1000mL 蒸馏水中。
0.02% 2,4-二硝基苯肼溶液：称取2,4-二硝基苯肼20mg 溶于少量1mol/L 盐酸中，加热溶解后，利用1mol/L 盐酸稀释至100mL。
（二）仪器/器具
电子天平、分光光度计、剪刀、移液管、组织破碎机
四、实验步骤
1. 肝匀浆制备与稀释
将猪肝用生理盐水冲洗，滤纸吸干，称取肝脏0.5g ，剪成小块，置于烧杯内，加入4.5mL 预冷的pH7.4的0.1mol/L 磷酸缓冲液，制成10%肝匀浆，冰冻保存备用。
吸取上述肝匀浆1mL ，加入预冷的pH7.4 的0.1mol/L 磷酸缓冲液49mL （即稀释50 倍）摇匀，作为实验中使用的稀释肝匀浆（室温中放置时间过久，会引起酶活性下降或失活因此需现用现配制，且放置时间不宜过久）。
2. 谷丙转氨酶活力的测定
（1）取试管4 支，分别标“测定管A”、“对照管B”、“标准管S”，“空白管”按下表进行操作。
测定管A 标准管S 对照管B
空白管O
谷丙转氨酶底物/mL
0.5
0.5
37℃ 保温5 min
稀释肝匀浆/mL
0.1
标准丙酮酸0.1
0.1
H 2O 0.1
混匀后，37℃水浴准确保温30min
0.02% 2,4-二硝基苯肼 0.5 0.5 0.5 0.5 谷丙转氨酶底物/mL
0.5
0.5
混匀后，37℃水浴准确保温20min
0.4mol/LNaOH
5.0
5.0
5.0
5.0
（2）混匀后，静置10min ，于520nm 波长处进行比色，以空白管调零，读取测定管A 、对照管B 、标准管S 的吸光度，将测定管A 吸光度减去对照管B 吸光度后与标准管S 相比算出其相当之丙酮酸含量。
（3）谷丙转氨酶活力计算：本法规定酶在37℃与底物作用30min 后，能产生2.5μg 的丙酮酸的酶量为一个谷丙转氨酶活力单位（U ）。
五、实验结果
1. 每毫升稀释肝匀浆谷丙转氨酶活力单位：
其中，D ——每毫升稀释肝匀浆谷丙转氨酶活力单位（U/mL ），即肝匀浆的比活；
A ——样品管的吸光度值；
B ——对照管的吸光度值； S ——标准管的吸光度值； 500——标准丙酮酸溶液的浓度； 2.5——谷丙转氨酶换算单位系数。
2. 每克肝脏谷丙氨酶的活力单位
测定管A 标准管S 对照管B 空白管O 520nm 吸光值
0.102
0.170
0.032
0.000
=82.353
=20588.235
六、实验分析
1、实验中的猪肝匀浆液要放置冰柜，室温放置太久酶活性会降低，会影响酶的测定。
2、溶液量取过程中产生很多误差。
3、保温完后下一步骤衔接不够紧凑，时间间隔导致温度稍有下降，造成酶活性降低。