HemosIL Heparin(发色底物法测定肝素)

HemosIL®

In-vitro Diagnostikum

De uso diagnóstico in vitro

Dispositif mèdical de diagnostic in vitro

Per uso diagnostico in vitro

Dispositivo médico para utilização em diagnóstico in vitro Chargen-Bezeichnung

Identificación número de lote

Désignation du lot

Numero del lotto

Número de lote

Verwendbar bis

Caducidad

Utilisable jusqu’à

Da utilizzare prima del

Data límite de utilização

Festgelegte T emperatur

T emperatura de Almacenamiento

T empératures limites de conservation

Limiti di temperatura

Límite de temperatura

Beilage beachten

Consultar la metódica

Lire le mode d’emploi

Vedere istruzioni per l’uso

Consultar as instruções de utilização

Kontrollen

Control

Contrôle

Controllo

Controlo

Biologisches Risiko

Riesgo biológico

Risque biologique

Rischio biologico

Risco biológico

Hergestellt von

Fabricado por

Fabricant

Prodotto da

Fabricado por

Bevollmächtigter

Representante autorizado

Mandataire

Rappresentanza autorizzata

Representante autorizado

Aplicación

T est Cromogénico automatizado para la determinación cuantitativa de la actividad de Heparina no Fraccionada (UFH) y de Heparina de Bajo Peso Molecular (LMWH) en plasma humano citratado para los Sistemas de Coagulación IL.

Principio

glicosaminoglicano reside en su habilidad para acelerar (hasta 2000 veces) el efecto inhibidor de la antitrombina sobre las proteasas de la coagulación. En los últimos años se ha demostrado que la LMWH, además de ser tan útil terapéuticamente como la UFH, tiene una vida media más larga.

El kit Heparina es una técnica basada en un substrato cromogénico sintético y la inactivación del FXa. El nivel de la Heparina en el plasma de los pacientes es medido automáticamente en los sistemas de coagulación IL en dos etapas:

1. La Heparina es analizada como un complejo con la antitrombina presente en la muestra. La concentración

de este complejo es dependiente de la disponibilidad de antitrombina. Para obtener una concentración más constante de antitrombina, se añade antitrombina humana purificada al plasma del test.1 El Factor Xa se añade en exceso y es neutralizado por el complejo antitrombina-heparina.

2. El Factor Xa residual es cuantificado con un sustrato cromogénico sintético. La Paranitroanilina liberada es

medida cinéticamente a 405 nm siendo su nivel inversamente proporcional a la actividad de la Heparina de la muestra.2

Dado que las diferentes clases de Heparina (tanto UFH como LMWH) tienen su propia actividad específica anti-factor Xa, la misma clase de heparina usada en el tratamiento del paciente debe usarse en la calibración de la curva estándar.3,4

Composición

El kit Heparin consta de:

S Chromogenic substrate (N° Cat. 00020009410): 1 x 4 mL vial de substrato cromogénico liofilizado S-2765, N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA.2HCL (3 mg/vial) y estabilizantes.

E Factor Xa reagent (N° Cat. 00020009420): 1 x 5 mL vial de una preparación liofilizada que contiene

Factor bovino Xa (68 nkat/vial), tampón T ris, EDT A, cloruro sódico y Albúmina de suero bovino.

A Antithrombin (N° Cat. 00020009430): 1 x 3 mL vial de una preparación liofilizada que contiene

Antitrombina humana (3 IU/vial), tampón T ris, EDT A, cloruro sódico y Albúmina de suero bovino.

B Buffer (N° Cat. 00020009440): 1 x 8 mL vial de solución concentrada que contiene tampón T ris, pH 8,4,

EDT A, cloruro sódico y detergente.

PRECAUCIÓN:

El material usado en este producto ha sido verificado por los métodos aprobados por la FDA y encontrado

no reactivo al Antígeno de Superficie de la Hepatitis B (HBsAg), Anti-HCV y anticuerpos HIV. Manejar con precaución como si fuese potencialmente infeccioso.5

Indicaciones de Peligro: Ninguna

Frases de Riesgo: Ninguna

Frases de Seguridad: Ninguna

T odos los productos derivados de animales deberán manejarse como potencialmente infecciosos.

Este reactivo es para diagnóstico in vitro.

Preparación

Chromogenic substrate: Disolver el contenido de cada vial con 4 mL de agua tipo CLR de CLSI.6 Cerrar el vial y homogeneizar suavemente. Asegurarse de la completa disolución del producto. Mantener el reactivo entre 15 y 25°C durante 30 minutos. Mezclar por inversión del vial antes de su uso.

Factor Xa reagent: Disolver el contenido de cada vial con 5 mL de agua tipo CLR de CLSI.6 Cerrar el vial y homogeneizar suavemente. Asegurarse de la completa disolución del producto. Mantener el reactivo entre 15 y 25°C durante 30 minutos. Mezclar por inversión del vial antes de su uso.

Antithrombin: Disolver el contenido de cada vial con 3 mL de agua tipo CLR de CLSI.6 Cerrar el vial y homogeneizar suavemente. Asegurarse de la completa disolución del producto. Mantener el reactivo entre 15 y 25°C durante 30 minutos. Mezclar por inversión del vial antes de su uso.

Buffer: Diluir la cantidad necesaria de T ampón concentrado 1:10 (1+9) con agua tipo CLR de CLSI.6 Mezclar antes de su uso.

Working buffer (Diluyente funcional): A 24 mL de T ampón diluido, añadir 1 mL de reactivo reconstituido de Antitrombina.

Nota: Una opalescencia instantánea ocurrirá temporalmente al reconstituir los reactivos liofilizado, pero desaparecerá en un par de minutos.Conservación y estabilidad de los reactivos

Los reactivos que no hayan sido abiertos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el vial si se

mantienen a 2-8°C.

Chromogenic substrate - Estabilidad después de la reconstitución: 7 días a 15°C, 3 meses a 2-8°C en el vial

original ó 48 horas a 15°C en los sistemas ACL Futura/ACL Advance y Familia ACL TOP®.

Factor Xa reagent - Estabilidad después de la reconstitución: 7 días a 15°C, 3 meses a 2-8°C en el vial original

ó 48 horas a 15°C en los sistemas ACL Futura/ACL Advance y Familia ACL TOP.

Antithrombin - Estabilidad después de la reconstitución: 3 meses a 2-8°C en el vial original.

Buffer - El reactivo abierto es estable 3 meses a 2-8°C.

Working buffer (Diluyente funcional) - Estabilidad después de su preparación: 7 días a 15°C y 2-8°C en un

vial cerrado ó 48 horas a 15°C en los sistemas ACL Futura/ACL Advance y Familia ACL TOP.

Para obtener una estabilidad óptima del reactivo reconstituido, sugerimos que acabado el trabajo, conserve el

reactivo en su vial original almacenado en nevera entre 2 y 8°C.

Método de Ensayo

Seguir las instrucciones de la técnica de acuerdo al Manual del Operador de los instrumentos IL o bien al

Manual de Aplicaciones.

Nota: Se recomienda un ciclo de lavado después de cada sesión de ensayos de Heparina en los modelos ACL

Clásicos (100-7000).

Recolección y Preparación de las muestras

trisódico. Para la recolección, manejo y conservación del plasma seguir las recomendaciones del documento

H21-A5 de la CLSI.7

Estandarización

Para la preparación del estándar de 0.8 U/ml utilice la misma heparina que la empleada para la terapia del

paciente.

Atención: para preparar el estándar de 0.8 U/mL deberá utilizarse plasma calibrador o un Pool de Plasma

Normal (NPP), dependiendo del analizador que se vaya a emplear.

Familia ACL TOP: preparar el estándar de 0.8 U/ mL utilizando Pool de Plasma Normal (NPP).

ACL Futura/ACL Advance: tal y como indica el Manual del Operador, para preparar el estándar de 0.8 U/ mL

deberá utilizarse plasma calibrador.

ACL ELITE/ELITE PRO/8/9/10000: tal y como indica el Manual del Operador, para preparar el estándar de 0.8

U/ mL debería utilizarse plasma calibrador.

ACL Clásico (100-7000): tal y como indica el Manual del Operador, para preparar el estándar de 0.8 U/ mL

debería utilizarse Pool de Plasma Normal (NPP).

Reactivos adicionales y plasmas de control

Los siguientes reactivos no se suministran con el kit y deberán pedirse por separado.

Américas y Pacific Rim Europa

N° Cat. N° Cat.

Plasma de Calibración 0020003700 0020003700

Agente de Limpieza 0009831700 0009831700

Agente de Limpieza 0009832700 0009832700

Control de Calidad

Para realizar un programa completo de control de calidad, se recomienda el uso de dos niveles de control.8

T anto el Control Heparina Bajo*, como el Control Heparina Alto* están diseñados específicamente para este

programa. Cada laboratorio debe establecer su propia media y desviación estándar, asimismo establecer un

programa de Control de Calidad para monitorizar los resultados de su laboratorio. Los controles deben ser

usados como mínimo una vez dentro del turno de 8 horas, de acuerdo a la normativa de Buenas Prácticas

en el Laboratorio. Referirse al Manual del Operador para información adicional. Consultar la publicación de

Westgard y col. para una identificación y resolución de situaciones anormales del Control de Calidad.9

Resultados

Los resultados de la Heparina se informan en U/mL. Referirse al Manual del Operador para información

adicional.

Limitaciones/Interferencias

Concentraciones de Hemoglobina hasta 200 mg/dL, Bilirrubina hasta 20 mg/dL y T riglicéridos hasta 700 mg/dL

no alteran los resultados de la Heparina en los ACL Futura/ACL Advance.

Concentraciones de Hemoglobina hasta 375 mg/dL, Bilirrubina hasta 25 mg/dL y T riglicéridos hasta 1630

mg/dL no alteran los resultados de la Heparina en la Familia ACL TOP.

Valores esperados

actividad de la heparina debe estar en el rango de actividad recomendado por el fabricante del fármaco.10

Características técnicas

Precisión:

Se evaluó la precisión intraserie y total (serie a serie y dia a dia) a partir de múltiples series utilizando dos

niveles de muestras tanto para la Heparina UFH como para la Heparina LMWH.

Familia ACL Media (U/mL) CV % (Intraserie) CV % (Total)

UFH 0,77 1,84 2,18

UFH 0,23 7,76 8,23

LMWH 0,79 2,68 3,09

LMWH 0,23 7,99 9,69

ACL Futura/ACL Advance Media (U/mL) CV % (Intraserie) CV % (Total)

UFH 0,79 3,0 6,6

UFH 0,52 5,7 7,3

UFH 0,26 9,1 10,0

LMWH 0,76 4,1 4,5

LMWH 0,42 6,2 7,9

LMWH 0,22 10,7 11,9

Familia ACL TOP Media (U/mL) CV % (Intraserie) CV % (Total)

UFH 0,82 1,8 6,4

UFH 0,53 3,4 4,3

UFH 0,25 4,6 8,5

LMWH 0,86 2,4 4,4

LMWH 0,49 6,1 8,2

LMWH 0,25 5,7 11,3

Correlación:

Sistema Pendiente Intersección r Método de Comparación

Familia ACL 0,968 0,014 0,988 IL Heparina (Xa)

ACL Futura/ 0,944 0,035 0,989 IL Heparina (Xa)

ACL Advance

Familia ACL TOP 1,012 -0,005 0,992 HemosIL Heparina (Xa)

en ACL Advance

Estos resultados de precisión y correlación se obtuvieron utilizando lotes específicos de reactivos y controles.

Linealidad:

Sistema

Familia ACL y ACL Futura/ACL Advance 0 - 1,0 U/mL

Familia ACL TOP 0 - 1,1 U/mL

Verwendung

Automatisierter chromogener T est zur quantitativen Bestimmung der Aktivität von unfraktionierten oder niedermolekularen Heparinen in menschlichem Plasma auf IL-Analysensystemen.

Testprinzip und Zusammenfassung

Heparin ist der am häufigsten eingesetzte antithrombotische Wirkstoff. Die biologische Aktivität der sulfatierten Glykosaminoglykane beruht auf ihrer Fähigkeit den inhibitorischen Effekt des Antithrombin auf die Gerinnungsproteasen um das bis zu 2000-fache zu beschleunigen. In den letzten Jahren wurde gezeigt, dass niedermolekulare Heparine ebenso wie unfraktionierte Heparine zur Therapie eingesetzt werden können und zudem eine längere Halbwertszeit besitzen.

Der Heparin T estkit basiert auf einem synthetischen chromogenen Substrat über die Inaktivierung von Faktor Xa. Der Heparin-Spiegel des Patientenplasmas wird mit IL Gerinnungssystemen automatisch gemessen:

1. Heparin bildet mit dem in der Probe vorhanden Antithrombin einen Komplex. Die Konzentration dieses

Komplexes ist von der Verfügbarkeit des Antithrombin abhängig. Um eine möglichst konstante Konzentration an Antithrombin zu erhalten, wird gereinigtes menschliches Antithrombin der Probe zugeführt.1 Faktor Xa wird im Überschuss zugegeben und durch den Heparin-Antithrombin-Komplex neutralisiert.

2. Die Restaktivität von Faktor Xa wird mit einem synthetischen chromogenen Substrat gemessen. Das

freigesetzte Paranitroanilin wird kinetisch bei einer Wellenlänge von 405 nm erfasst und ist umgekehrt proportional zum Heparin Spiegel der Probe.2

Da verschiedene Arten von unfraktionierten und niedermolekularen Heparinen unterschiedliche spezifische Anti-Faktor Xa-Aktivitäten aufweisen, sollte bei der Kalibration der Standardkurve immer dasselbe Heparin wie in der Patientenprobe eingesetzt werden.3,4

Inhalt

Die Heparin Packung enthält:

S Chromogenic substrate (Art. Nr. 00020009410): 1 Flasche x 4 mL lyophilisiertes chromogenes Substrat [S-2765, N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA.2HCl (3 mg/Flasche)].

E Factor Xa reagent (Art. Nr. 00020009420): 1 Flasche x 5 mL eines lyophilisierten Präparates, das Faktor

Xa bovinen Ursprungs (68 nkat/Flasche), T ris-Puffer, EDT A, Natriumchlorid und bovines Serum-Albumin enthält.

A Antithrombin (Art. Nr. 00020009430): 1 Flasche x 3 mL eines lyophilisierten Präparates, das Human-

Antithrombin (3 IU/Flasche), T ris-Puffer, EDT A, Natriumchlorid und bovines Serum-Albumin enthält.

B Buffer (Art. Nr. 00020009440): 1 Flasche x 8 mL einer konzentrierten Lösung, die T ris-Puffer, pH 8,4,

EDT A, Natriumchlorid und Detergenz enthält.

WARNUNG:

Das verwendete Material wurde mit FDA anerkannten T estmethoden auf HIV 1/2-Antikörper, Hepatitis-B-Antigen und HCV-Antigen geprüft. Bitte beachten Sie die Bestimmungen zum Umgang mit potentiell infektiösen Materialien.5

Gefahrenklasse: keine

Risikoeinstufung: keine

Sicherheitseinstufung: keine

Alle Tierprodukte sollten als potentiell infektiös behandelt werden.

Dieses Produkt ist nur für die in vitro Diagnostik geeignet.

Herstellung

Chromogenic substrate: Zum Inhalt einer Flasche wird 4 mL CLSI Wasser (CLRW) oder vergleichbares (z. B. Aqua bidest.) pipettiert und durch leichtes Schwenken gelöst.6 Nach vollständiger Rekonstitution wird das Reagenz 30 Minuten bei 15-25°C inkubiert und dann unter vorsichtigem Schwenken erneut gemischt.

Factor Xa reagent: Zum Inhalt einer Flasche wird 5 mL CLSI Wasser (CLRW) oder vergleichbares (z. B. Aqua bidest.) pipettiert und durch leichtes Schwenken gelöst.6 Nach vollständiger Rekonstitution wird das Reagenz 30 Minuten bei 15-25°C inkubiert und dann unter vorsichtigem Schwenken erneut gemischt. Antithrombin: Zum Inhalt einer Flasche wird 3 mL CLSI Wasser (CLRW) oder vergleichbares (z. B. Aqua bidest.) pipettiert und durch leichtes Schwenken gelöst.6 Nach vollständiger Rekonstitution wird das Reagenz 30 Minuten bei 15-25°C inkubiert und dann unter vorsichtigem Schwenken erneut gemischt.

Buffer: Die benötigte Menge des konzentrierten Diluents 1:10 (1+9) mit CLSI Wasser (CLRW) oder vergleichbares (z. B. Aqua bidest.) verdünnen.6 Vor dem Gebrauch mischen.

Working buffer (Arbeitslösung): Zu 24 mL verdünntem Puffer wird 1 mL des rekonstituierten Antithrombin Reagenzes zugegeben.

Hinweis: Auftretende T rübungen verschwinden innerhalb kurzer gerung und Haltbarkeit

Die ungeöffneten Reagenzien sind bei Lagerung zwischen 2-8°C bis zu dem auf dem Etikett angegebenen

Verfallsdatum haltbar.

Chromogenic substrate - Haltbarkeit nach Rekonstitution:

- bei 15°C in der Originalflasche: 7 T age

- bei 2-8°C in der Originalflasche: 3 Monate

- bei 15°C in ACL Futura/ACL Advance und Systemen der ACL TOP® Familie: 48 Stunden

Factor Xa reagent - Haltbarkeit nach Rekonstitution:

- bei 15°C in der Originalflasche: 7 T age

- bei 2-8°C in der Originalflasche: 3 Monate

- bei 15°C in ACL Futura/ACL Advance und Systemen der ACL TOP® Familie: 48 Stunden

Antithrombin - Haltbarkeit nach Rekonstitution:

- bei 2-8°C in der Originalflasche: 3 Monate

Buffer - geöffnetes Reagenz:

- bei 2-8°C in der Originalflasche: 3 Monate

Working buffer (Arbeitslösung) - Haltbarkeit nach Herstellung:

- bei 15°C im geschlossenen Behälter: 7 T age

- bei 2-8°C im geschlossenen Behälter: 7 T age

- bei 15°C in ACL Futura/ACL Advance und Systemen der ACL TOP® Familie: 48 Stunden

Für eine optimale Haltbarkeit sollten die Reagenzien nach dem Gebrauch aus dem Gerät entnommen und im

Kühlschrank bei 2-8°C in der Originalflasche aufbewahrt werden.

Bestimmungsansatz

Die ausführliche Beschreibung des Bestimmungsansatzes ist dem Geräte-Bedienerhandbuch und/oder dem

Applikationshandbuch zu entnehmen.

Hinweis: Es wird empfohlen im Anschluss an den Heparin T est einen Reinigungszyklus am ACL Classic (ACL

100-7000) durchzuführen.

Probenmaterial und -gewinnung

9 T eile frisches venöses Blut und 1 T eil T rinatriumcitratlösung werden sorgfältig in einem silikonisierten

Glasröhrchen gemischt. Hinweise zur Aufbereitung des Blutes sind den Empfehlungen des Deutschen Instituts

für Normung - DIN 58 905 - oder dem CLSI Document H21-A5 zu entnehmen.7

Standardisierung

Zur Herstellung des 0,8 U/mL Standards sollte dasselbe Heparin wie in der Patientenprobe eingesetzt werden.

Hinweis: Zur Herstellung des 0,8 U/mL Standards wird in Abhängigkeit vom verwendeten Gerät entweder

Kalibrationsplasma oder Normalpoolplasma (NPP) eingesetzt.

ACL TOP Familie: Normalpoolplasma (NPP) sollte zur Herstellung des 0,8 U/mL Standards eingesetzt werden.

ACL Futura/ACL Advance: Wie dem Bedienerhandbuch zu entnehmen ist, sollte Kalibrationsplasma zur

Herstellung des 0,8 U/mL Standards eingesetzt werden.

ACL ELITE/ELITE PRO/8/9/10000: Wie dem Bedienerhandbuch zu entnehmen ist, sollte Kalibrationsplasma

zur Herstellung des 0,8 U/mL Standards eingesetzt werden.

ACL Classic (ACL 100-7000): Wie dem Bedienerhandbuch zu entnehmen ist, sollte Normalpoolplasma (NPP)

zur Herstellung des 0,8 U/mL Standards eingesetzt werden.

Zusätzliche Reagenzien und Kontrollplasmen

Die folgenden Reagenzien sind nicht in der Packung enthalten und müssen zusätzlich bestellt werden:

Amerikan. und Pazifischer Raum Europa

Art. Nr. Art. Nr.

Kalibrationsplasma 0020003700 0020003700

Reinigungslösung 0009831700 0009831700

Reinigungslösung 0009832700 0009832700

Qualitätskontrolle

pathologischen Bereich zu überprüfen.8 Es wird empfohlen, als Kontrollmaterial die oben angegebenen

Kontrollen zu verwenden. Die Bereiche sind der jeweiligen Packungsbeilage zu entnehmen. Jedes Labor sollte

seinen eigenen Kontrollbereich ermitteln. Spätestens nach jeweils 8 Stunden sollte eine Qualitätskontrolle

durchgeführt werden. Algorithmen zur Beurteilung der Qualitätskontrollergebnisse siehe z.B Westgard et al.9

Siehe auch “Richtlinien der Bundesärztekammer zur Qualitätssicherung quantitativer

laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen” in der jeweils gültigen Fassung.

Ergebnisse

Heparin Ergebnisse werden in U/mL dargestellt. Zusätzliche Informationen sind dem Bedienerhandbuch zu

entnehmen.

Einschränkungen

Heparin Ergebnisse auf ACL- und ACL Futura/ACL Advance-Analysensystemen werden durch Konzentrationen

an Hämoglobin bis zu 200 mg/dL, Bilirubin bis zu 20 mg/dL und T riglyceriden bis zu 700 mg/dL nicht beeinflusst.

Heparin Ergebnisse auf Systemen der ACL TOP® Familie werden durch Konzentrationen an Hämoglobin bis zu

375 mg/dL, Bilirubin bis zu 25 mg/dL und T riglyceriden bis zu 1630 mg/dL nicht beeinflusst.

Referenzbereiche

Um einen optimalen Effekt bei einem minimierten Risiko bezüglich Blutungen oder thrombotischen

Komplikationen zu erzielen, sollte die Heparin-Aktivität in dem vom Heparin-Hersteller empfohlenen Bereich

liegen.10

Testcharakteristik

Präzision Die Präzision im Lauf und von T ag zu T ag wurde in mehreren Läufen unter Verwendung von je

zwei unterschiedlichen Konzentrationen mit unfraktioniertem (UFH) und niedermolekularem Heparin (LMWH)

ermittelt.

ACL Familie Mittelwert (U/mL) VK % (im Lauf) VK % (Tag zu Tag)

unfrakt. Heparin 0,77 1,84 2,18

unfrakt. Heparin 0,23 7,76 8,23

niedermolek. Heparin 0,79 2,68 3,09

niedermolek. Heparin 0,23 7,99 9,69

ACL Futura/

ACL Advance Mittelwert (U/mL) VK % (im Lauf) VK % (Tag zu Tag)

unfrakt. Heparin 0,79 3,0 6,6

unfrakt. Heparin 0,52 5,7 7,3

unfrakt. Heparin 0,26 9,1 10,0

niedermolek. Heparin 0,76 4,1 4,5

niedermolek. Heparin 0,42 6,2 7,9

niedermolek. Heparin 0,22 10,7 11,9

ACL TOP Familie Mittelwert (U/mL) VK % (im Lauf) VK % (Tag zu Tag)

unfrakt. Heparin 0,82 1,8 6,4

unfrakt. Heparin 0,53 3,4 4,3

unfrakt. Heparin 0,25 4,6 8,5

niedermolek. Heparin 0,86 2,4 4,4

niedermolek. Heparin 0,49 6,1 8,2

niedermolek. Heparin 0,25 5,7 11,3

Korrelation:

System Steigung Ordinatenabschnitt r Referenzmethode

ACL Familie 0,968 0,014 0,988 IL Heparin (Xa)

ACL Futura/ 0,944 0,035 0,989 IL Heparin (Xa)

ACL Advance

ACL TOP Familie 1,012 -0,005 0,992 HemosIL Heparin (Xa) am

ACL Advance

D ie Präzisions- und Korrelationsergebnisse sind mit spezifischen Reagenzien- und Kontrollchargen ermittelt

worden.

Linearität:

System

ACL Familie und ACL Futura/ACL Advance 0 - 1,0 U/mL

ACL TOP Familie 0 - 1,1 U/mL

Intended use

Automated chromogenic assay for the quantitative determination of unfractionated heparin (UFH) and low molecular weight heparin (LMWH) activity in human citrated plasma on the IL Coagulation Systems. Summary and principle

Heparin is the most frequently used antithrombotic drug. The biological activity of this sulphated glycosaminoglycan resides in its ability to accelerate (up to 2000-fold) the inhibitory effect of antithrombin on coagulation proteases. In recent years, it has been shown that LMWH, besides being as useful therapeutically as UFH, also has a longer half-life.

The Heparin kit is an assay based on a synthetic chromogenic substrate and on Factor Xa inactivation. Heparin levels in patient plasma are measured automatically on IL Coagulation Systems in two stages.

1. Heparin is analyzed as a complex with antithrombin present in the sample. The concentration of this

complex is dependent on the availability of antithrombin. In order to obtain a more constant concentration of antithrombin, purified human antithrombin is added to the test plasma.1 Factor Xa is added in excess and is neutralized by heparin-antithrombin complex.

2. Residual Factor Xa is quantified with a synthetic chromogenic substrate. The paranitroaniline released is

monitored kinetically at 405 nm and is inversely proportional to the heparin level in the sample.2

Since different kinds of UF- and LMW- Heparins have their own specific anti-Factor Xa activity, the same kind of heparin as is used in the patient sample should also be used for calibrating the standard curve.3,4 Composition

The Heparin kit consists of:

S Chromogenic substrate (Cat. No. 00020009410): 1 x 4 mL vial of the lyophilized chromogenic substrate S-2765, N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA.2HCl (3 mg/vial) and bulking agent.

E Factor Xa reagent (Cat. No. 00020009420): 1 x 5 mL vial of a lyophilized preparation containing purified

bovine Factor Xa (68 nkat/vial), T ris-buffer, EDT A, sodium chloride and bovine serum albumin.

A Antithrombin (Cat. No. 00020009430): 1 x 3 mL vial of a lyophilized preparation containing human

antithrombin (3 IU/vial), T ris-buffer, EDT A, sodium chloride and bovine serum albumin.

B Buffer (Cat. No. 00020009440): 1 x 8 mL vial of a concentrated solution containing T ris-buffer, pH 8.4,

EDT A, sodium chloride and detergent.

PRECAUTIONS AND WARNINGS:

The material in this product was tested with FDA cleared methods and found nonreactive for Hepatitis B surface Antigen (HBsAg), Anti-HCV and HIV antibodies. Handle as if potentially infectious.5

Hazard class: None

Risk phrases: None

Safety phrases: None

All animal products should be treated as potentially infectious.

This product is For in vitro Diagnostic Use.

Preparation

Chromogenic substrate: Dissolve the vial contents with 4 mL of CLSI T ype CLR water or equivalent.6 Replace the stopper and swirl gently. Make sure of the complete reconstitution of the product. Keep the substrate at 15-25°C for 30 minutes and invert to mix before use.

Factor Xa reagent: Dissolve the vial contents with 5 mL of CLSI T ype CLR water or equivalent.6 Replace the stopper and swirl gently. Make sure of the complete reconstitution of product. Keep the reagent at 15-25°C for 30 minutes and invert to mix before use.

Antithrombin: Dissolve the vial contents with 3 mL of CLSI T ype CLR water or equivalent.6 Replace the stopper and swirl gently. Make sure of the complete reconstitution of product. Keep the reagent at 15-25°C for 30 minutes and invert to mix before use.

Buffer: Dilute the necessary quantity of concentrated buffer 1:10 (1+9) with CLSI T ype CLR water or equivalent.6 Mix before use.

Working buffer: T o 24 mL of diluted buffer add 1 mL of reconstituted antithrombin reagent.

Note: An instant opalescence will occur in the lyophilized reagents but it will fade away within 2 minutes.Reagent storage and stability

Unopened reagents are stable until the expiration date shown on the vial when stored at 2-8°C.

Chromogenic substrate - Stability after reconstitution: 7 days at 15°C, 3 months at 2-8°C in the original vial or

48 hours at 15°C on the ACL Futura/ACL Advance Systems and ACL TOP® Family.

Factor Xa reagent - Stability after reconstitution: 7 days at 15°C, 3 months at 2-8°C in the original vial or 48

hours at 15°C on the ACL Futura/ACL Advance Systems and ACL TOP Family.

Antithrombin - Stability after reconstitution: 3 months at 2-8°C in the original vial.

Buffer - Opened reagent is stable 3 months at 2-8°C.

Working buffer - Stability after preparation: 7 days at 15°C and 2-8°C in a closed container or 48 hours at 15°C

on the ACL Futura/ACL Advance Systems and ACL TOP Family.

For optimal stability remove reagents from the system and store them at 2-8°C in the original vial.

Instrument/test procedures

procedure instructions.

Note: A cleaning cycle is recommended after running the Heparin assay on the ACL Classic (100-7000)

Systems.

Specimen collection and preparation

Nine parts of freshly drawn venous blood are collected into one part trisodium citrate. Refer to CLSI Document

H21-A5 for further instructions on specimen collection, handling and storage.7

Standardization

For preparation of the 0.8 U/mL standard use the same heparin as used for patient therapy.

Please Note: When preparing the 0.8 U/mL standard depending on the instrument being used either calibration

plasma or Normal Pooled Plasma (NPP) should be used.

ACL TOP Family: Normal Pooled Plasma (NPP) should be used in preparation of the 0.8 U/mL standard.

ACL Futura/ACL Advance: As indicated in the Operator’s manual, calibration plasma should be used in

preparation of the 0.8 U/mL standard.

ACL ELITE/ELITE PRO/8/9/10000: As indicated in the Operator’s manual, calibration plasma should be used in

preparation of the 0.8 U/mL standard.

ACL Classic (100-7000): As indicated in the Operator’s manual, Normal Pooled Plasma (NPP) should be used

in preparation of the 0.8 U/mL standard.

Additional reagent and control plasmas

The following are not supplied with the kit and must be purchased separately.

Americas and Pacific Rim Europe

Cat. No. Cat No.

Calibration plasma 0020003700 0020003700

Cleaning solution 0009831700 0009831700

Cleaning agent 0009832700 0009832700

Quality control

8

establish its own mean and standard deviation and should establish a quality control program to monitor

laboratory testing. Controls should be analyzed at least once every 8 hour shift in accordance with good

laboratory practice. Refer to the instrument’s Operator’s Manual for additional information. Refer to Westgard et

al for identification and resolution for out-of-control situations.9

Results

Heparin results are reported in U/mL. Refer to the instrument’s Operator’s Manual for additional information.

Limitations/interfering substances

Heparin results on the ACL and ACL Futura/ACL Advance Systems are not affected by hemoglobin up to 200

mg/dL, bilirubin up to 20 mg/dL and triglycerides up to 700 mg/dL.

Heparin results on the ACL TOP Family are not affected by hemoglobin up to 375 mg/dL, bilirubin up to 25

mg/dL and triglycerides up to 1630 mg/dL.

Expected values

T o obtain an optimal effect with minimum risk of bleeding or thromboembolic complications the heparin activity

should be in the range recommended by the heparin manufacturer.10

Performance characteristics

Precision:

Within run and total (run to run and day to day) precision was assessed over multiple runs using two levels of

sample of both UFH Heparin and LMWH Heparin.

ACL® Family Mean (U/mL) CV % (Within run) CV % (Total)

UFH 0.77 1.84 2.18

UFH 0.23 7.76 8.23

LMWH 0.79 2.68 3.09

LMWH 0.23 7.99 9.69

ACL Futura/ACL Advance Mean (U/mL) CV % (Within run) CV % (Total)

UFH 0.52 5.7 7.3

UFH 0.26 9.1 10.0

LMWH 0.76 4.1 4.5

LMWH 0.42 6.2 7.9

LMWH 0.22 10.7 11.9

ACL TOP Family Mean (U/mL) CV % (Within run) CV % (Total)

UFH 0.82 1.8 6.4

UFH 0.53 3.4 4.3

UFH 0.25 4.6 8.5

LMWH 0.86 2.4 4.4

LMWH 0.49 6.1 8.2

LMWH 0.25 5.7 11.3

Correlation:

System slope intercept r Reference method

ACL Family 0.968 0.014 0.988 IL Heparin (Xa)

ACL Futura/ACL Advance 0.944 0.035 0.989 IL Heparin (Xa)

ACL TOP Family 1.012 -0.005 0.992 HemosIL Heparin (Xa)

on ACL Advance

The precision and correlation results were obtained using specific lots of reagent and controls.

Linearity:

System

ACL Family and ACL Futura/ACL Advance 0 - 1.0 U/mL

ACL TOP Family 0 - 1.1 U/mL