实验5细菌的单染色和革兰氏染色
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氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短， 革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。 5. 菌龄也有影响。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使 革兰氏阳性菌转呈阴性反应。
结果与思考题
1.你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正 确性？其中最关键的环节是什么？
2.涂片用的玻璃片为什么不得有油污？为什么 涂片要求菌膜要均匀、薄？
当在中性、弱碱性、弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷。 而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷， 因此碱性 染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。
实验原理
革兰氏染色法：是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。是 细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法所以能将细菌分为G+菌和 G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。
（高倍镜、油镜）
二、革兰氏染色：
涂片→干燥固定→结晶紫初染→水洗→碘液媒 染→水洗→酒精脱色→水洗→沙黄复染→水洗→干 燥→镜检
单染色法
1. 洗净载玻片：先将载玻片洗净，擦干。 2. 涂片：取干净载玻片一块，在载玻片中央加一滴蒸馏水
(生理盐水)，按无菌操作法取样品菌涂片，做成菌悬液。 （讨论：取菌多少对结果的影响？） 3. 晾干：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文火烘干。 4. 固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固 定（以不烫手为宜）。 （讨论：固定的目的？）
3.革兰氏染色的原理、依据是什么？
实验五 细菌的单染色和革兰氏染色
目的要求
学习对细菌的涂片、染色和无菌操作技 术。
了解染色原理、学习并掌握单染色和革 兰氏染色技术 。
实验原理
微生物学中常用的是单染色法和革兰氏染色法。
单染色法：是用一种染料使细菌着色以显示其形态，不能辨 别细菌细胞的构造，通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性 复红 等）使其着色。
5. 染色：将固定过的涂片放在废液缸上的搁架上，加复红染 色1-2min。
6. 水洗：用水洗去涂片上的染色液。 7. 干燥：将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。
（讨论：干燥的目的？） 8. 镜检：先低倍观察，再高倍观察，最后用油镜。
单染色法视频
革兰氏（Gram）染色法：
1. 涂片-干燥- 固定 2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染12分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。
3. 媒染：先用新配的碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面 1分钟，后水洗。
4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约25秒左右， 后立即用流水冲洗
5. 复染：滴加番红染色液，染2分钟，水洗后用吸水纸吸 干。
6. 镜检：观察染色结果并绘图。
革兰氏Байду номын сангаасGram）染色视频
染色中注意事项：
1.涂片不可太厚，会造成假阳性。 2.固定时不能在火上烤的时间太长，否则菌体收缩变形。 3.染色后必须晾干后才能用油镜镜检 。 4.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰
实验材料
菌种：E.coli （大肠杆菌） 、B.subtilis（枯草芽孢杆菌） 或实验室所培养杂菌
试剂：石炭酸复红染色液、革兰氏染色液(草酸铵结晶 紫、碘液、95%乙醇、沙黄/番红染色液）
其他：显微镜、载玻片、生理盐水、酒精灯、接种环、 吸水纸、擦镜纸等
实验程序
一、单染色法： 涂片→干燥固定→染色→水洗→干燥→镜检
结果与思考题
1.你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正 确性？其中最关键的环节是什么？
2.涂片用的玻璃片为什么不得有油污？为什么 涂片要求菌膜要均匀、薄？
当在中性、弱碱性、弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷。 而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷， 因此碱性 染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。
实验原理
革兰氏染色法：是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。是 细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法所以能将细菌分为G+菌和 G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。
（高倍镜、油镜）
二、革兰氏染色：
涂片→干燥固定→结晶紫初染→水洗→碘液媒 染→水洗→酒精脱色→水洗→沙黄复染→水洗→干 燥→镜检
单染色法
1. 洗净载玻片：先将载玻片洗净，擦干。 2. 涂片：取干净载玻片一块，在载玻片中央加一滴蒸馏水
(生理盐水)，按无菌操作法取样品菌涂片，做成菌悬液。 （讨论：取菌多少对结果的影响？） 3. 晾干：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文火烘干。 4. 固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固 定（以不烫手为宜）。 （讨论：固定的目的？）
3.革兰氏染色的原理、依据是什么？
实验五 细菌的单染色和革兰氏染色
目的要求
学习对细菌的涂片、染色和无菌操作技 术。
了解染色原理、学习并掌握单染色和革 兰氏染色技术 。
实验原理
微生物学中常用的是单染色法和革兰氏染色法。
单染色法：是用一种染料使细菌着色以显示其形态，不能辨 别细菌细胞的构造，通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性 复红 等）使其着色。
5. 染色：将固定过的涂片放在废液缸上的搁架上，加复红染 色1-2min。
6. 水洗：用水洗去涂片上的染色液。 7. 干燥：将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。
（讨论：干燥的目的？） 8. 镜检：先低倍观察，再高倍观察，最后用油镜。
单染色法视频
革兰氏（Gram）染色法：
1. 涂片-干燥- 固定 2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染12分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。
3. 媒染：先用新配的碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面 1分钟，后水洗。
4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约25秒左右， 后立即用流水冲洗
5. 复染：滴加番红染色液，染2分钟，水洗后用吸水纸吸 干。
6. 镜检：观察染色结果并绘图。
革兰氏Байду номын сангаасGram）染色视频
染色中注意事项：
1.涂片不可太厚，会造成假阳性。 2.固定时不能在火上烤的时间太长，否则菌体收缩变形。 3.染色后必须晾干后才能用油镜镜检 。 4.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰
实验材料
菌种：E.coli （大肠杆菌） 、B.subtilis（枯草芽孢杆菌） 或实验室所培养杂菌
试剂：石炭酸复红染色液、革兰氏染色液(草酸铵结晶 紫、碘液、95%乙醇、沙黄/番红染色液）
其他：显微镜、载玻片、生理盐水、酒精灯、接种环、 吸水纸、擦镜纸等
实验程序
一、单染色法： 涂片→干燥固定→染色→水洗→干燥→镜检