He染色切片制作(各动物、全过程、操作要点、注意事项)

石蜡切片制备基本步骤

一、准备工作

（一）洗涤实验所需器皿：（玻璃器皿的清洗）

1、用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷

2、将器皿在自来水下冲洗干净

3、将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干

注：一般情况下，经以上步骤后，用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用，如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时，再经自来水彻底冲洗，再用蒸馏水过洗1~3次烘干备用。

（二）配制：硫酸洗液的配制

清洁液（洗液）的配制：

成分强酸液次强酸液弱酸液

浓硫酸（ml）1000 200 100

重铬酸钾（mg）63 120 100

蒸馏水（ml）200 200 1000

重铬酸钾1200g

蒸馏水2000ml

将2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中，边倒边用木棒轻轻搅拌

（三）载玻片与盖玻片的处理

1.将所需载玻片与盖玻片清洗后，放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时

2.流水冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍

3.95%~100%酒精浸泡24小时，用绸布擦干备用

注：在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时，要一片片地投入，使其不致重叠。

二、常用液体的配制

（一）缓冲溶液：

1．磷酸盐缓冲液

A液：0.1mol/L磷酸二氢钠

B液：0.1mol/L磷酸氢二钠

A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（3：7≈PH7.0）

2．枸椽酸缓冲溶液

A液：0.1mol/L枸椽酸

B液：0.1mol/L枸椽酸钠

A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（6.2：42.8≈PH6.2）

（二）固定剂：

1．甲醛：10%甲醛

福尔马林100ml

蒸馏水900ml

注：实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。

2．10％中性福尔马林钙固定液

甲醛液10ml

蒸馏水90ml

加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充分振荡混合后，放置24小时取上清液使用。

3．4%多聚甲醛：

8%多聚甲醛

多聚甲醛8g

蒸馏水100ml

加温至60℃左右，不时搅拌，成为乳白色溶液。滴加1N NaOH，并不停搅动至液体清明。

1N NaOH

lN等于1L溶液中某种物质1mol除以该物质的氢当量价所得数值的量

氧化钠(NaOH )；分子量＝40．005，当量价＝1

1N Na0H的配制方法为：m＝40．005／1＝40．005g。取40．005gNaOH溶解于1L蒸馏水中

4%多聚甲醛

8%多聚甲醛50ml

0.1M磷酸盐缓冲液50ml

PH7.2

先取50 ml 8%多聚甲醛，用0.1M磷酸二氢钠和0.1M磷酸氢二钠将PH值调至7.2

4．Bouin液：

苦味酸饱和水溶液75ml

36％~40％福尔马林液25ml

冰醋酸5m1

5．改良Bouin氏固定液

苦味酸饱和水溶液45ml

95%酒精45ml

36％~40％福尔马林液5ml

冰醋酸5m1

6．Carnoy液：

冰醋酸10 m1

氯仿30 m1

无水乙醇60 m1

以上三者临用前混合，预冷至4℃后使用。24小时后固定液失效。

（三）染色液

1．Harris苏木精液

A液：

苏木精1g

无水酒精10ml

B液：

铵矾或钾矾20g

蒸馏水200ml

氧化汞0.5ml

冰醋酸8ml

将矾溶于水，加热溶解（B液），稍冷后将苏木精酒精液（A液）混入B液，加热，稍冷却，加氧化汞，再继续加热1分钟，染液变为紫色，注意在加氧化汞时宜逐渐少量加入，防止染液溅出。全冷后呈深紫色，将烧杯口用纱布盖好，隔夜过滤，在过滤

液内每96 ml中加4 ml冰醋酸，放置1周后成熟，即可用于染色，保存期1~2个月。此染液在加醋酸后，对核染色特具选择性，故很适于脱落细胞的核染色。由于染液内已加有氧化剂，故不能长期储存，但利于配后即用。

2．Mayer苏木精掖

苏木精1g

钾矾或铵矾50g

碘酸钠0.2g

蒸馏水1000ml

水合氯醛50g

枸橼酸1g

将苏木精，钾矾及碘酸钠依次加入水内，略加热并搅拌，此时液体呈蓝色，待全溶后过夜。再加入水合氯醛及枸橼酸并加热至煮沸5分钟，冷后过滤备用。如不急用可不煮沸而在室温待其成熟，染液可较长期贮存使用。核染色鲜明，染色时间5—10分钟。用该染液染色后，不需分化，充分水洗蓝化后即可，伊红复染细胞质，使用一段时间后就要换新溶液。

3．Hasnsen甲矾苏木精的配制

A液：苏木精1g

无水乙醇10ml

B液：钾矾20g

蒸馏水200ml

C液：高锰酸钾1g

蒸馏水16ml

三液分别溶化后，将A液倒入B液，再加入C液3ml，充分搅拌均匀后加热至沸腾，1分钟左右，将容器置于冷水中使其迅速冷却，此液配后即可使用，染后无需碱化，细胞核即为蓝色，效果较好，高锰酸钾可以迅速氧化苏木精（每1g苏木精需0.177g 高锰酸钾氧化）。

4．伊红

0.5~1%水溶液或酒精溶液。

1．水溶性伊红

伊红5~10g

蒸馏水1000ml

冰醋酸10滴

先将水溶性伊红加入蒸馏水中，用玻璃棒搅起泡沫后过滤，再加冰醋酸。

2．醇溶性伊红

伊红5~10g

70%~90%酒精1000ml

冰醋酸10滴

（四）其它

1．麻醉剂：

2~4%戊巴比妥钠，1ml/kg体重（45mg/kg）。

2．各级浓度酒精的配制

75%；85%；95%；100%酒精。75%和85%酒精用95%酒精配制；（取75ml95%酒精，加水至95ml，即为75%酒精）

3．盐酸洒精

多用于多种染色过程中的分色，如苏木精染色后分色。配法是在100ml的70％酒精内加0.5~1ml的浓盐酸(Hcl)。用盐酸酒精分色后要经自来水充分冲洗组织切片，去除所含的酸再作其他处理。

4．碘酒

取碘5g，溶于95％酒精80ml，再加入20ml蒸溜水即成

5．生理盐水