抗凝血酶测定

抗凝血酶（AT）测定

1. 实验原理

在待测血浆中加入过量的凝血酶，凝血酶与血浆中的AT形成1:1的复合物，剩余的凝血酶作用于显色肽S2765，裂解出显色基团对硝基苯胺(pNA)，用405nm测吸光度，显色程度与剩余凝血酶的量成正相关，而与血浆AT的量呈负相关。

2. 标本采集

2.1 早晨空腹采血(空腹12小时左右)，静脉采血。

2.2

3.8％(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml，混匀。

3. 标本存放：全血贮存在4～10oC不超过2小时，最好1小时内(3000r/min×15min)分离血浆，此血浆在室温22～24oC下可存放2小时，在2～4oC可存放4小时，在-20oC 可存放2周，长时间保存需在冰冻条件下，在-70oC可存放6个月。

冷冻血浆融化时，应将盛血浆的容器置37oC水浴中，并轻轻摇动，使其迅速融化，以免凝血因子消耗，解冻后立即测试。冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果不准确。

4. 标本运输：低温条件下运输。

5. 标本拒收的标准：抗凝剂不符合，采血量不准确，凝固，溶血，脂血标本不能作该项目检测。

6. 实验材料：

6.1每个试剂均购自德国Dade Behring Marburg公司。

1）AT测定试剂盒（代号P/N:20008900）

冻干发色底物S2765 2瓶（6mg/瓶)

冻干活化X因子试剂（包括牛活化X因子、肝素、缓冲液、牛血清白蛋白）2瓶

2）定标血浆Calibration Plasma（代号P/N:8467300）

3）正常质控血浆Normal control plasma（代号P/N:8467011）4）异常水平发色底物法质控血浆Abnormal chromogenic control plasma level I/II（代号P/N:8467600）

5）Cleaning agent（代号P/N:9832700）

6）Cleaning solution（代号P/N:9831700）

6.2试剂准备

发色底物：用2mL NCCLS II型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶冻干发色底物，盖上盖子，轻摇至完全溶解，置15～25oC30分钟，用前摇匀，勿用力振摇。

活化X因子试剂：用2.5mL NCCLS II型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶冻干活化X因子试剂，盖上盖子，轻摇至完全溶解，置15～25oC30分钟，用前摇匀，勿用力振摇。

6.3试剂保存

未开封的试剂可保存在2～8 oC至试剂盒上标明的有效期。试剂溶解后，于原瓶中15 oC ，7天内有效；2～8 oC，3月内有效；-20 oC，6月内有效。

建议试剂不使用时，最好将其倒回原瓶中，保存于2～8 oC，不要将试剂冷冻。

7. 仪器设备：

7.1 仪器名称：syxmex CA7000全自动血凝仪

7.2 仪器厂家：日本希森美康公司

7.3 仪器型号：CA7000

7.4 仪器技术参数：

7.4.1 试剂位：18个，具冷藏功能。

7.4.2 样本位：40个，可通过换盘连续添加。

7.5 仪器校准程序：

7.5.1 校准频率：当方法改变，试剂厂家或试剂型号改变，仪器维修影响测定结果等情况时，必须进行校准。

7.5.2 校准操作：设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)。

8. 操作步骤：

8.1 开机：CA7000的开关在仪器的右侧。开机后仪器自检，当屏幕上边显示Ready时可进行试检

8.2洗针：在主屏幕上选Rinse Probe键，然后按Execute进行洗针

8.3 检查消耗品：

1.准备反应杯：打开仪器上盖装反应杯的盖子查看反应杯是否够量，不足时，需及时添加。

2.准备试剂：按照仪器对试剂的要求，把每一项的试剂准备好，放到仪器内相应位置，注意查看试剂的量和有效期。如还不熟悉试剂位置时，可在主屏幕上选Reagent Setting，按屏幕显示位置放置试剂。注意：共三个位置放清洗液。

3.查看仪器的洗液瓶和废液瓶

8.4 准备标本：将样本离心好，放入样本架，再将样本架放到仪器进样器上。

8.5 输入检测项目：

主菜单上的按下Work list键，进入工作菜单。输入项目，直接点击相应的实验项目键

重复：按屏幕下菜单的REPEAT键，在屏幕弹出的键盘上输入相应测试数，仪器会自动重复与光标所在位置相同的测试信息。

输入样本号：按屏幕下菜单的ID NO.Entry按顺序输入样本的序号或病人的病历号。

开始检测：录入完所有测试信息，按下屏幕右上角START 键，开始检测

查看结果：返回到主屏幕，检测的项目如果由○变成●表明此试验已经完成。按下Stored Date键，出现已存储结果界面，屏幕显示已完成的测试的信息。如果查看反应曲线，按下边菜单第一项Gragph查看凝集趋势、吸光度、错误信息等。

8.6 洗针：当做完一批标本后，需要洗针，按下Rinse Probe 然后按下Execute进行洗针

8.7 关机：回到主屏幕下，在洗完针后方可关机，切断电源，同时关闭压力泵和总电源。

9. 质量控制：每批样本同时测定三个浓度水平(正常值低值和高值)的质控品，以2S为警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。每个实验室均应建立自己的质控均值和SD值以检测实验质量。至少每8小时做一次质控分析。用Westgard等方法进行质控数据的分析和处理，评定质量情况。请参考CA7000全自动血凝仪操作手册。

10. 临床意义：

参考值75-122%

血浆凝血酶-抗凝血酶Ⅲ复合物：一旦凝血酶形成后，由于机体的调控和防御作用，迅速与AT-Ⅲ以1：1摩尔浓度的比例关系结合成TAT以消除凝血酶的影响。AT-Ⅲ是血浆中最重要的生理性抗凝物质，约占血浆中总抗凝血酶活性的50%-70%。肝素作用于AT-Ⅲ的赖氨酸残基而使抗凝血酶活性增强1000倍。ATⅢ是一种多功能的丝氨酸蛋白酶抑制物，除能抑制凝血酶之外，对Ⅸa、Ⅹa、Ⅺa、Ⅻa、Ⅶa、KK及纤溶酶等也有抑制作用。

11. 变异的潜在来源

11.1影响因素：