银染 protocol

试剂准备（所有试剂均用超纯水制备）：

1）固定液：甲醇50ml，乙酸12ml，甲醛（37%）135ul，加水至100ml；

2）35% 乙醇；

3）2% Na2S2O3：0.1克Na2S2O3用水稀释到5ml使用；

4）染色液（现配现用）：AgNO3 0.1g，甲醛（37%）100ul，加水至50ml；

5）显色液（现配现用）：Na2CO36g，甲醛（37%）135ul，Na2S2O3（2%）20ul，加水至100ml；

6）终止液：甲醇50ml，乙酸12ml，加水至100ml。

步骤：

1）取下2.7电泳分离蛋白样品后的聚丙烯酰胺凝胶，泡在固定液中，摇床上低速、室温固定2h或过夜（以下步骤均可摇床上低速晃动完成）；

2）弃去固定液，加入35%乙醇洗涤，隔20min换新的35%乙醇再次洗涤，共洗三次；

3）弃去35%乙醇，于0.02%的Na2S2O3溶液中激活凝胶，2min；

4）弃去3）的Na2S2O3溶液，用高纯水洗涤凝胶三次，每次5min；

5）弃去高纯水，用染色液浸泡凝胶，染色20min；

6）弃去染色液，用高纯水洗涤凝胶两次，每次1min；

7）弃去高纯水，加入显色液，密切关注显色情况，以清晰看到条带为宜；

8）弃去显色液，加入终止液，5min；

9）弃去终止液，凝胶可泡在1%的乙酸溶液中，4℃保存。