病毒的接种

注意事项

消毒小白鼠时不要碰到眼睛 注射时不要扎的太深以免刺伤对侧手指 磨卵壳及钻孔时力量要适中 看过的鸡胚不要倒入水池，倒入指定的 大烧杯中
鸡胚接种

接种途径
尿囊腔接种法 卵黄囊接种法 绒毛尿囊膜接种法 羊膜囊接种法


可根据病毒种类选择适宜接种部位，如分离 流感病毒常用羊水囊和尿囊同时接种法，而 痘病毒常采用绒毛尿囊膜接种法
绒毛尿囊膜 气 室
卵膜
羊膜腔
鸡 胚
卵黄囊 尿囊腔 卵 白
判断鸡胚是否存活
⑴ 在检卵灯下观察能否看到清晰的血管； ⑵ 胚胎是否移动； ⑶ 若胚龄过长，则需观察其胎盘部分，胎 盘部分变苍白说明胚胎死亡，正常时胎 盘发暗，蛋白部分透亮。
绒毛尿囊膜接种法

卵窗
定位：将胎盘部分
及自然气室部分用铅 笔画出，在胎盘与蛋 白交界处（无血管区） 画一直径约1cm的等
边三角形。
绒毛尿囊膜
卵膜
气 室
羊膜腔
鸡 胚
卵黄囊 尿囊腔 卵 白

取卵壳：消毒后取下所画三角形区域的
卵壳，注意卵膜不要碰破，于卵膜中央刺 一小口（不要伤及绒毛尿囊膜），

造人工气室：在自然气室部分用大注射


新型隐球菌：菌落属酵母型菌落，圆形、 较大、白色、边缘整齐，表面湿润光滑， 与一般细菌菌落相似。 白色念珠菌：菌落属类酵母样菌落，圆 形、较大、白色、菌落底层有假菌丝长 入培养基内。


絮状表皮癣菌：菌落属丝状菌落，在沙 保琼脂斜面培养基上菌落开始为白色， 颗粒状，以后变为绒毛样甚至粉末状， 有许多辐射状沟，呈草绿色，且培养基 常有皱裂。 石膏样小孢子菌：菌落属丝状菌落，在 沙保培养基上菌落为棉絮状、羊毛状或 粉末状。
小鼠脑内接种
1、以无菌0.25ml注射器抽取流行性乙型脑炎 病毒悬液0.1ml，去除注射器内的气泡。 2、取出小鼠，左手将小鼠固定（固定时用大 拇指和食指握住小鼠的头部，左手手掌轻 轻按住小鼠的体部）。 3、右手用棉签蘸以碘酒，消毒小鼠的右侧颞 部皮毛（不碰到眼）。
4、右手拿注射器在小鼠颞部（眼与耳根联 线的中点略偏耳朵的方向）注入，进入 颅腔即可（一般进针2－3mm），不要插 得太深，注射量为0.02－0.03ml。 5、注射完毕，将用过的注射器放入煮沸消 毒器内，煮沸消毒。实验动物置于防蚊 设备的室内饲养，逐日观察动物发病情 况。
器针头钻一孔，用橡皮头自气室端小孔将 气室中空气吸出，使绒毛尿囊膜下陷形成 一“人工气室”

接种：去除卵膜，于绒毛尿囊膜上滴上
病毒0.1~0.2ml。

封口：用胶布封口，胶布事先用碘酒消
毒，并通过wenku.baidu.com焰烧去余碘。

培养：放入温箱培育4天，然后收获病
毒。
真菌菌落的观察（示教）


真菌培养营养要求不高，在一般培养基 上能生长 常用沙保弱（Sabouraud）培养基（含 4%葡萄糖、10%蛋白胨、琼脂），真 菌的最适酸碱度是pH4.0~6.0，最适生 长温度浅部真菌22~28℃，深部真菌 37℃ 。
真菌菌落类型

酵母型菌落（yeast colony）

菌落光滑、湿润。无菌丝 隐球菌菌落

类酵母型菌落（yeast-like colony）

外观和酵母型菌落相似，显微镜下 可看到假菌丝 白色念株菌菌落

丝状型菌落（filamentous colony）

菌落系由多细胞菌丝体所组成 大多数丝状真菌或霉菌的菌落
动物接种
动物接种（Animal inoculation）是最早应用的病 毒培养法，在病毒学研究中主要有三方面用途： 分离鉴定病毒、通过传代增殖或减弱病毒毒力、 制备免疫血清。在分离病毒时由于动物自身可 能带有病毒，而且许多病毒没有敏感动物，因 而目前多被组织培养所代替。
常用的动物有小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、家兔、 羊和猴等。接种的途径有鼻内、皮内、脑内、 腹腔内和静脉注射等。
病毒的接种
新乡医学院微生物学教研室
实验目的

了解 病毒的培养方法 掌握 病毒的鸡胚绒毛尿囊膜接种法及小 鼠脑内接种方法。

概述

病毒结构简单，缺乏完整的酶系统，不 能在无生命的人工培养基中生长，必须 在活的组织细胞中才能增殖。
常用的分离、 培养、鉴定 病毒的方法
动物接种法 鸡胚培养法 组织细胞培养法