胰岛素抗体简介

胰岛素抗体简介

目录

•1拼音

•2英文参考

•3概述

•4胰岛素抗体的医学检查

o 4.1检查名称

o 4.2分类

o 4.3胰岛素抗体的测定原理

▪ 4.3.1酶联免疫吸附法

▪ 4.3.2免疫酶斑点法

o 4.4试剂

▪ 4.4.1酶联免疫吸附法

▪ 4.4.2免疫酶斑点法

o 4.5操作方法

▪ 4.5.1酶联免疫吸附法

▪ 4.5.2免疫酶斑点法

o 4.6正常值

o 4.7化验结果临床意义

▪ 4.7.11型糖尿病的早期发现

▪ 4.7.2诊断胰岛素抵抗，指导糖尿病治疗▪ 4.7.3胰岛素自身免疫综合征

o 4.8附注

o 4.9相关疾病

1拼音

yí dǎo sù kàng tǐ

2英文参考

InsAb

insulin antibody

3概述

胰岛素抗抗体的出现有两种情况，一种出现于接受外源性胰岛素治疗的病人，主要和胰岛素制剂的纯度有关系，一种出现于从未接受胰岛素治疗的病人，称为胰岛素自身抗体。

4胰岛素抗体的医学检查

4.1检查名称

胰岛素抗体

4.2分类

激素类测定 > 胰腺内分泌功能检查

4.3胰岛素抗体的测定原理

4.3.1（1）酶联免疫吸附法

以聚苯乙烯反应板为载体，用胰岛素卵清蛋白交联物为包被抗原，加待测血清后，如待测血清中有抗胰岛素抗抗抗体（antiinsulin antibody，AIAb），则与包被抗原结合，再与随后加入的酶标记葡萄球菌A蛋白反应，在酶底物作用下显色，显色强度可反映抗胰岛素抗抗抗体水平。

4.3.2（2）免疫酶斑点法

用硝酸纤维素膜为载体，胰岛素卵清蛋白交联物为包被抗原，如待测血清中有抗胰岛素抗抗抗体，则与包被抗原结合，再与HRPSPA 反应，在酶底物作用下显色。如检样中无抗胰岛素抗抗抗体，则包被抗原处不呈色。

4.4试剂

4.4.1（1）酶联免疫吸附法

①胰岛素卵清蛋白交联物：取普通猪胰岛素注射液（40u/ml＝

1.6mg/ml，市售商品）5ml加3ml pH8.6，0.06mol/L巴比妥缓冲液（内含卵清蛋白160mg），混匀后，滴加0.25%戊二醛0.24ml，室温搅拌1h。分装，－20℃保存，用作包被抗原。

②豚鼠抗胰岛毒抗体：按上法制备胰岛素牛血清白蛋白交联物，加等量福氏完全佐剂充分乳化，交替注射豚鼠（体重400～500g/只）的背部，两后肢肌肉内等处，每只豚鼠每次注射胰岛素量约20u，10

天注射1次，免疫4次后，抽心血观察血清效价，一般免疫5～6次后用不加佐剂的胰岛素一片血清白蛋白作加强注射3天后，抽血，分离血清，－20℃保存备用，作为阳性对照。

③辣根过氧化物酶标记的葡萄球菌A蛋白（HRPSPA），最适稀释度预试选定。

④包被液、稀释液、洗涤液、底物溶液同一般酶联免疫吸附法。

4.4.2（2）免疫酶斑点法

①胰岛素卵清蛋白交联物、豚鼠抗胰岛素抗抗抗体制备参见酶联免疫吸附法。

②HRPSPA，最适稀释度预试选定。

③包被液、稀释液、洗涤液同一般酶联免疫吸附法。

④底物溶液：3，3＇二氨基联苯胺四盐酸盐（DAB）5mg，用

0.2ml二甲基亚砜溶解后，补加pH7.4，0.01mol/L PBS10ml，30%H2O2 0.05ml，使用前新鲜配制。

4.5操作方法

4.5.1（1）酶联免疫吸附法

将胰岛素卵清蛋白用包被液稀释至20μg/ml，包被聚苯乙烯反应板微孔，每孔100μl，4℃过夜。洗涤液洗3次，每次3min，用pH7.4，0.01mol/L PBS（内含15%小牛血清）封闭，43℃ 1h。同上法洗后加待测血清（1∶100）或阴性、阳性对照，每孔100μl，43℃ 1h（37℃ 2h）。同上法洗后加最适稀释度的HRPSPA，每孔100μl，45℃ 1h （37℃ 2h）。同上法洗后加底物（OPDH2O2）溶液，每孔100μl，37℃ 10min显色。用2mol/L H4SO4终止反应。

酶联免疫检测仪检测492nm波长吸光度值。

4.5.2（2）免疫酶斑点法

将NC膜划成5mm×5mm的小方格，浸于pH7.4，0.01mol/L PBS中30min，滤纸吸干。取2μl胰岛素卵清蛋白交联物点样于小方格中央，室温自然干燥。用pH7.4，0.01mol/L PBS（内含卵清蛋白10.0g/L）封闭，45℃ 1h，滤纸吸干。加待测血清2μl于抗原包被处，45℃ 30min后，用pH7.4，0.01mol/L PBS洗3次，每次3min，滤

纸吸干。将膜置于最适浓度HRPSPA中，45℃ 30min，同上法洗后滤纸吸干。浸于新配底物中5～10min，显色后流水冲洗，终止反应。4.6正常值

阴性。

4.7化验结果临床意义

胰岛素抗抗体对糖尿病和低血糖的诊断、鉴别诊断及治疗具有非常重要的意义。

4.7.1（1）1型糖尿病的早期发现

正常人群如在血中发现胰岛素抗抗体则很容易罹患1型糖尿病。胰岛素自身抗体可能系β细胞破坏所产生，因此胰岛素自身抗体的检测可作为自身免疫性β细胞损伤的标志，可用于早期发现和预防1型糖尿病。

4.7.2（2）诊断胰岛素抵抗，指导糖尿病治疗

血液中存在胰岛素抗抗体是产生胰岛素抵抗的重要原因，糖尿病患者在使用胰岛素治疗的过程中可因胰岛素抗抗体的产生而出现胰岛素抵抗，表现为胰岛素用量逐日增加但血糖控制并不理想。此时应检测胰岛素抗抗体，若出现阳性或滴度增高可作为胰岛素抵抗的客观依据。换用单组分胰岛素、高纯度胰岛素及停用胰岛素、口服降糖药或应用糖皮质激素皆有助于降低胰岛素抗抗体的浓度，改善胰岛素抵抗。

4.7.3（3）胰岛素自身免疫综合征

自Hirata等于1970年首次报告后，国内外报告逐年增多。胰岛素自身免疫综合征（insulin autoimmune syndrome，IAS）的特征为严重低血糖、高胰岛素血症、胰岛素抗抗体（IAA）阳性及从未接受外源性胰岛素治疗。IAS低血糖发作呈自限性，82%不经治疗1年内自行缓解，但发作时多较严重且诊断困难。除对症治疗外，应用肾上腺皮质激素可能有一定价值。遗传易感性在IAS发生中可能起重要作用。

4.8附注

胰岛素依赖性糖尿病抗胰岛细胞抗抗胰岛细胞抗体阳性率为20%～40%，活动期阳性率可达60%～70%；非胰岛素依赖性糖尿病阳性率仅为6.2%。因此，检测抗胰岛细胞抗体可区分2型糖尿病。