大豆抗原蛋白elisa试剂盒使用方法
大豆抗原蛋白elisa试剂盒使用方法
大豆抗原蛋白elisa试剂盒使用方法检测范围：96T2 ng/L -48 ng/L使用目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中大豆抗原蛋白含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大豆抗原蛋白水平。
用纯化的大豆抗原蛋白抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入大豆抗原蛋白，再与HRP标记的大豆抗原蛋白抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的大豆抗原蛋白呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大豆抗原蛋白浓度。
试剂盒组成1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
ELISA操作规程
ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测和定量分析抗原或抗体的存在。
本文档旨在提供一份详细的ELISA操作规程，以确保实验的准确性和可重复性。
二、材料和试剂1. 微孔板：96孔的聚合物微孔板。
2. 洗涤缓冲液：含有洗涤剂的磷酸盐缓冲液。
3. 标准品：已知浓度的抗原或抗体。
4. 样品：待测的抗原或抗体。
5. 酶标记的二抗：与待测物特异性结合的酶标记二抗。
6. 底物溶液：含有酶底物的缓冲液。
7. 停止溶液：停止底物反应的溶液。
三、实验步骤1. 预处理a. 将微孔板中的96孔填满洗涤缓冲液，轻轻摇动，倒掉液体。
b. 重复上述步骤三次，以确保孔内的洗涤剂充分清洗。
c. 将微孔板倒置在吸水纸上，用纸巾轻轻拍干。
2. 标准曲线制备a. 取出标准品，按照不同浓度分别加入微孔板中的孔中，每个浓度加入3个孔。
b. 加入相同体积的洗涤缓冲液作为空白对照组，每个浓度加入3个孔。
c. 将微孔板盖上密封膜，孵育一段时间（根据实验需求而定）。
d. 将密封膜去除，倒掉孔内液体。
3. 样品处理a. 取出待测样品，根据实验需求适当稀释。
b. 将样品加入微孔板中的孔中，每个样品加入3个孔。
c. 将微孔板盖上密封膜，孵育一段时间（根据实验需求而定）。
d. 将密封膜去除，倒掉孔内液体。
4. 酶标记二抗添加a. 取出酶标记的二抗，按照实验需求适当稀释。
b. 将酶标记二抗加入微孔板中的孔中，每个孔加入相同体积的二抗。
c. 将微孔板盖上密封膜，孵育一段时间（根据实验需求而定）。
d. 将密封膜去除，倒掉孔内液体。
5. 底物反应a. 取出底物溶液，加入微孔板中的孔中，每个孔加入相同体积的底物溶液。
b. 将微孔板盖上密封膜，孵育一段时间（根据实验需求而定）。
6. 反应停止a. 取出停止溶液，加入微孔板中的孔中，每个孔加入相同体积的停止溶液。
b. 轻轻摇动微孔板，确保溶液混合均匀。
7. 测量和分析a. 使用ELISA阅读器测量每个孔的吸光度值。
ELISA试剂盒操作方法
ELISA试剂盒操作方法ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的免疫学试验技术，用于检测体内或体外的蛋白质、抗体、抗原等物质。
ELISA试剂盒是用于进行ELISA实验的一种常见装置。
下面将为您介绍ELISA试剂盒的操作方法。
1.准备工作a.预热-将试剂盒中的所有试剂预热到适当的温度，通常为室温至37°C之间。
b.样品处理-准备好待测样品，可以是血清、细胞上清液、组织提取物等。
如果样品中含有大量的蛋白质或杂质，可以进行样品处理，如稀释、蛋白质去除等。
c.标准品准备-试剂盒通常包含一系列浓度已知的标准品，用于制作标准曲线。
按照说明书的要求，用缓冲液或适当的稀释液将标准品稀释为不同浓度的工作液。
2.涂膜板的处理a.涂膜板选择-根据实验需求选择合适的涂膜板，通常有96孔、384孔等。
b.板钉定位-使用板钉或其他适当的方法将涂膜板固定在适当的工作台上。
c.预涂底物溶液加入-将试剂盒提供的预涂底物溶液加入涂膜板的孔中，注意保持各孔液面平整。
3.样品与试剂添加a.标准品和样品加入-按照实验设计的需要，将标准品和待测样品分别加入涂膜板的孔中。
b.阳性对照和阴性对照加入-根据试剂盒的要求，加入阳性对照和阴性对照。
c.洗涤液加入-在每次试剂或样品加入后，使用专用的洗涤液将孔洗涤，以清除无关物质。
4.反应与显色a.结合抗体加入-按照试剂盒说明书要求，加入适当的结合抗体，用于与待测物质结合形成复合物。
b.二抗加入-加入带有底物标记的二抗，与结合抗体结合形成复合物。
c.显色底物加入-加入含有适当底物的显色底物试剂，使底物与酶结合并发出信号。
5.反应停止与测量a.反应停止液加入-在适当的时间点，根据试剂盒的说明，加入反应停止液，停止底物的酶反应。
b.光密封膜或保护板加盖-加盖光密封膜或保护板，防止溶液蒸发或污染。
6.读取和数据处理a.读取吸光度-使用ELISA读板仪读取各孔的吸光度值。
ELISA试剂盒操作方法
6.结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
三、加血清样本及反应试剂
在现在的ELISA商品试剂盒中，血清样本的加入几乎是唯一的要使用微量加样器加入样本的步骤。使用微量加样器加样必须注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。试剂的加入在国产试剂盒中基本上均是从滴瓶中滴加，除了要注意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很容易出现重复滴加或加在两孔之间的现象，这样就会在孔内的非包被区出现非特异吸附，从而引起非特异显色。所以，有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，往往就是上述加样及试剂的错误所致。
ELISA 是一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法，由于其试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素，以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测，既可以做定性试验也可以做定量分析等优点，已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域。
如何正确进行ELISA操作
一、临床标本的收集和保存
2.加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3.加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
ELISA操作规程
ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测特定抗原或抗体在样本中的存在量。
本操作规程旨在提供详细的ELISA实验步骤，确保实验的准确性和可重复性。
二、材料和试剂准备1. 微孔板：96孔或其他规格的微孔板。
2. 抗原或抗体：根据实验需求选择适当的抗原或抗体。
3. 样本：待测样本，如血清、尿液等。
4. 酶标记抗体：选择与待测抗原或抗体特异性结合的酶标记抗体。
5. 酶标记底物：选择适当的酶标记底物，如TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）。
6. 停止液：选择适当的停止液，如硫酸。
三、实验步骤1. 预处理a. 将微孔板的孔洗净，并将待测样本、阳性对照和阴性对照分别加入孔中。
b. 将微孔板密封或覆盖，孵育一定时间，使抗原或抗体与样本中的特定成分结合。
c. 弃去孔中液体，将孔洗净。
2. 添加酶标记抗体a. 将酶标记抗体加入每个孔中，使其与已结合在孔中的抗原或抗体结合。
b. 将微孔板密封或覆盖，孵育一定时间，使酶标记抗体与抗原或抗体结合。
3. 洗涤a. 弃去孔中液体，将孔洗净，重复2-3次，以去除未结合的酶标记抗体。
4. 添加酶标记底物a. 将酶标记底物加入每个孔中，使其与酶标记抗体结合。
b. 将微孔板密封或覆盖，孵育一定时间，使底物与酶反应产生显色。
5. 反应停止a. 加入适量的停止液，停止底物与酶的反应，防止进一步显色。
b. 使用酶标仪测量吸光度，记录各孔的光密度值。
6. 数据分析a. 根据实验设计和标准曲线，计算待测样本中特定抗原或抗体的浓度。
b. 统计数据并进行统计学分析，如平均值、标准差、t检验等。
四、实验注意事项1. 所有操作都应在洁净的实验室环境中进行，避免污染。
2. 严格按照实验步骤和操作规程进行，确保实验的准确性和可重复性。
3. 注意使用适当的阴性对照和阳性对照，以验证实验结果的准确性。
4. 注意控制实验条件，如温度、时间等，以保证实验结果的可比性。
ELISA检测试剂盒使用指南
ELISA检测试剂盒使用指南ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测体内特定抗原或抗体的存在和浓度。
ELISA检测试剂盒是用于进行ELISA实验的组合套装，包括抗体或抗原、酶标记物、底物、缓冲液等。
本文将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南，以帮助用户顺利进行ELISA实验。
1.准备实验材料：-ELISA检测试剂盒：根据实验需要选择适当的ELISA检测试剂盒，确保其在储存和运输过程中无损坏。
-样本：准备需要检测的样本，如血清、尿液、组织提取物等。
确保样本的质量和浓度满足实验要求。
-微孔板：根据试剂盒的要求选择合适的微孔板，同时注意其质量有无污染。
-基本实验设备：如计量器、洗板机、显微镜等。
2.实验步骤：-取出储存在4℃的试剂，确保其达到室温（一般为20-25℃），再根据实验步骤进行下一步操作。
-预处理样本：根据试剂盒的说明书，进行样本的预处理，包括稀释、纯化、稳定化等步骤。
-加样：将样本按照试剂盒要求的体积加入微孔板中，通常每个孔需要加入100-200μL的样品。
-洗板：使用洗板机或手工操作，将孔中的杂质洗净。
洗板时应注意洗涤缓冲液的使用浓度和洗涤次数。
-加入特异性抗体：根据试剂盒的说明书，将稀释好的特异性抗体加入各孔中，确保操作的准确性和每孔的稀释倍数。
-洗板：重复第4步的操作，将未结合的抗体洗净。
-加入酶标记物：根据试剂盒的说明书，将稀释好的酶标记物加入各孔中，确保加入的量准确无误。
-洗板：重复第4步的操作，将未结合的酶标记物洗净。
-加入底物：将稀释好的底物加入各孔中，使其与酶标记物反应，生成可视化的颜色。
-终止反应：根据试剂盒的要求，在一定的反应时间后，加入终止剂停止反应。
终止剂的选择需符合试剂盒的要求。
-检测结果：使用酶标仪或目视观察检测孔中的颜色变化，通过测量吸光度或颜色强度来确定样本中目标物的浓度。
3.数据分析：-计算样本的结果：根据试剂盒的说明书，根据吸光度或颜色强度测量结果，计算样本中目标物的浓度。
ELISA检测试剂盒操作流程
定量测定人血清中幽门螺杆菌（Hp）IgG抗体
ELISA检测试剂盒操作流程
一、操作流程：
1.根据需要，将若干孔德条带放置在支架上；
2.将标本、阴性质控、阳性质控以及标准品作1：200稀释（将５μｌ样品加稀
释液稀释到1ml，混匀）；
3.取100μl已稀释的血清样品、标准品和阴性质控、阳性质控加入相应得孔板
内（质控和标准品至少需做两孔），A1孔不加液体作为空白底色；
4.在37℃温箱中放置30分钟；
5.到时间后将孔被液体甩去，并用1X洗涤液反复清洗4次，最后用蒸馏水洗
一次；
6.在每孔内加100μl酶结合物（需按比例稀释，除A1孔外），轻微混匀；
7.在37℃温箱中放置30分钟；
8.甩去孔内酶结合物，用1X洗涤液反复清洗4次，最后用蒸馏水洗一次；
9.在每孔内加100μlTMB（使用前混合Ａ液和Ｂ液）（包括A1孔也加），轻微
混匀；
10.37℃放置15分钟；
11.每孔加50μl 1N硫酸终止液（包括A1孔），轻微混匀；
12.在15分钟内，用酶标仪在450nm处读取吸光度值（OD值）（将酶标仪A1
孔设定为空白孔）。
二、结果换算：
以标准样品的OD值为轴，标准样品的数值为X轴，在方格纸或计算机上作出标准曲线，然后根据标本的OD值读数在标准曲线上读出相应的IgG抗体浓度。
三、结果判定：
阴性：抗体浓度≤20u/ml为正常
阳性：抗体浓度＞20u/ml为阳性。
ELISA操作规程
ELISA操作规程一、实验目的本实验旨在通过酶联免疫吸附试验（ELISA）的操作，检测目标物质的存在与浓度，以实现对生物样本中特定抗原或抗体的定量分析。
二、实验材料1. 96孔ELISA板2. 目标抗原或抗体样本3. 特异性一抗和二抗4. 辅助试剂：洗涤缓冲液、稀释缓冲液、底物和停止液5. 高精度微量移液器和相应的移液器头6. 高精度电子天平7. 显微镜和酶标仪三、实验步骤1. 预处理：将96孔ELISA板放置在实验台上，加入稀释缓冲液，轻轻震荡混合，然后倒掉液体。
重复此步骤3次。
2. 样本添加：将待测样本加入96孔ELISA板中，每孔加入相同体积的样本。
3. 孵育：将ELISA板盖上密封膜，置于恒温箱中孵育一定时间，使样本中的抗原或抗体与固相特异性一抗结合。
4. 洗涤：将洗涤缓冲液加入96孔ELISA板中，轻轻震荡混合，然后倒掉液体。
重复此步骤3次，以洗去未结合的物质。
5. 二抗结合：将特异性二抗加入96孔ELISA板中，轻轻震荡混合，然后盖上密封膜，继续孵育一定时间，使二抗与固相特异性一抗结合。
6. 洗涤：重复步骤4。
7. 底物添加：将底物加入96孔ELISA板中，轻轻震荡混合，然后暗处孵育一定时间，使底物与二抗结合的酶发生反应。
8. 反应停止：加入停止液，终止底物与酶的反应。
9. 测量：将96孔ELISA板放入酶标仪中，根据实验要求选择相应波长进行测量。
记录各孔的吸光度值。
10. 数据分析：根据实验目的，利用标准曲线或其他方法，计算出目标物质的浓度。
四、实验注意事项1. 实验前需准备好所有试剂和材料，确保实验环境清洁和无尘。
2. 操作过程中需佩戴手套，避免污染样本和试剂。
3. 洗涤步骤中，确保洗涤缓冲液充分覆盖每个孔，且每次洗涤液倒掉后，孔内无残留液体。
4. 孵育和暗处孵育步骤中，需控制好时间和温度，以确保反应的充分进行。
5. 底物和停止液需按照说明书的要求配制和使用，避免使用过期或变质的试剂。
家用抗原试剂盒使用方法
家用抗原试剂盒使用方法
1、采样前：通常在做抗原检测前需注意确认试剂盒的有效期，从试剂盒中取出内容物，一般包含说明书、检测卡、拭子、样本提取液、样本提取管。
且使用前要阅读说明书，不同品牌操作可能有细微区别。
另外，在采样前应注意洗手或用75%酒精等快速消毒。
把样本提取液打开后全部倒入样本提取管内。
打开检测卡包装，取出检测卡。
检测结果出来前，尽量不要再触碰检测卡，以免污染，影响检测结果。
如果鼻腔内分泌物较多，在测试前可以擤鼻涕。
2、采样中：取出拭子，注意不要触碰到拭子头。
头部向后抬高，将拭子贴着鼻内壁慢慢推进1厘米-1.5厘米，一直推到看不见拭子头为止，贴着鼻腔黏膜轻轻转动4圈，停留15秒，这主要是为了在采样时增加接触面和采样的量。
然后将同一拭子在另一鼻孔采样，也是转动4圈，停留足15秒。
将拭子放入样本提取管内，拭子头浸入提取液内，边挤压边转动拭子15秒。
将拭子放入原来的包装袋中，不再使用，避免污染周围环境。
将样本提取管的盖子盖紧。
将提取管翻转过来，从盖口处滴3滴提取液到检测卡上。
等待10-15分钟后即可判断结果，期间不要触碰检测卡。
3、采样后：若C和T处均显示出红色或紫色条带，则为阳性。
C处显示出红色或紫色条带，而T处未显示条带，则为阴性。
C处若不显示红色条带，则提示检测无效。
ELISA试剂盒操作方法
ELISA试剂盒操作方法1.准备工作-将所需试剂和物质取出，并按照使用说明书中的要求进行储存和保存。
确保试剂完整无损，并严格遵守保存条件。
2.样品处理-根据试剂盒的要求，处理待测样品。
这可能涉及到稀释、离心、过滤等步骤，以确保样品符合试剂盒的要求。
注意避免样品的污染和损坏。
3.准备试剂和标准曲线-根据试剂盒的要求，准备所需的试剂和标准曲线。
试剂通常由酶标板和洗涤缓冲液组成。
标准曲线是用于确定未知浓度样品的参考标准。
4.酶标板涂层-先加入涂层抗体或抗原到酶标板的孔中，然后将其在室温下孵育一段时间。
这会使孔中形成抗原或抗体的层，以便后续的反应。
5.吸附溶液去除-将酶标板颠倒并用纸巾轻轻拍干，以将未吸收的溶液去除。
6.样品和标准品加入-根据试剂盒的要求，将样品和标准品加入到孔中。
同时留有几个孔作为空白对照。
注意将样品和标准品加入到正确的孔中，避免交叉污染。
7.孵育和洗涤-放置酶标板在孵育箱中（一般在37摄氏度）孵育一段时间，以促使样品中的目标物质与酶标记的抗体结合。
然后将液体从孔中洗涤掉，以去除未结合的物质。
8.酶标记的二抗加入-加入酶标记的二抗（通常是抗人IgG的辣根过氧化物酶）到酶标板中的每个孔中，使其与目标物质结合。
9.孵育和洗涤-将酶标板重新放回孵育箱中孵育，然后再次进行洗涤，以去除未结合的物质。
10.底物添加-向每个孔中加入底物，使其与酶发生反应，产生颜色的变化。
反应时间根据试剂盒的要求进行控制。
11.反应终止-加入反应停止液，停止酶的反应，防止进一步的颜色变化。
具体的反应停止方法要根据试剂盒的要求进行。
12.颜色的测定-使用酶标仪或光度计测量各个孔中颜色的强度，并将其与标准曲线上的标准值进行比较，以确定样品中目标物质的浓度。
以上是ELISA试剂盒的基本操作步骤。
不同的试剂盒可能略有不同的要求和步骤，因此在操作之前务必仔细阅读和遵守试剂盒的使用说明书。
ELISA操作规程
ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测特定抗原或抗体的存在和浓度。
本文旨在提供一份详细的ELISA操作规程，以确保实验的准确性和可重复性。
二、材料与试剂1. 微孔板：96孔的高透明度微孔板。
2. 酶标仪：用于测量吸光度的仪器。
3. 酶标板洗涤缓冲液：用于洗涤微孔板。
4. 酶标板稀释液：用于稀释样品和标准品。
5. 酶标记的抗体或抗原：用于与待测样品中的目标分子发生特异性反应。
6. 酶标记的二抗：用于与酶标记的抗体或抗原结合。
7. 底物溶液：用于产生可测量的信号。
8. 停止液：用于停止底物反应。
三、实验步骤1. 准备样品和标准品a. 收集待测样品，并按照实验要求进行必要的处理和稀释。
b. 准备一系列浓度已知的标准品，用于绘制标准曲线。
2. 涂覆微孔板a. 将微孔板放在工作台上，标记孔位。
b. 向每个孔中加入适量的酶标记的抗体或抗原溶液。
c. 封闭孔板，放置在4℃的冰箱中过夜。
3. 洗涤微孔板a. 将微孔板倒扣在吸水纸上，轻轻拍打以去除残留液体。
b. 用酶标板洗涤缓冲液洗涤孔板，重复3次。
c. 倒扣孔板并拍打，以去除洗涤缓冲液。
4. 加入样品和标准品a. 向每个孔中加入适量的待测样品或标准品，注意分配好对照组。
b. 封闭孔板，放置在室温下孵育一定时间。
5. 洗涤微孔板a. 重复步骤3中的洗涤操作，确保去除未结合的物质。
6. 加入酶标记的二抗a. 向每个孔中加入适量的酶标记的二抗溶液。
b. 封闭孔板，放置在室温下孵育一定时间。
7. 洗涤微孔板a. 重复步骤3中的洗涤操作，确保去除未结合的物质。
8. 底物反应a. 向每个孔中加入适量的底物溶液。
b. 封闭孔板，放置在室温下孵育一定时间。
9. 反应终止a. 向每个孔中加入适量的停止液，停止底物反应。
b. 使用酶标仪测量吸光度。
10. 数据分析a. 使用酶标仪测量各孔的吸光度值。
b. 绘制标准曲线，根据吸光度值计算待测样品中目标分子的浓度。
ELISA操作规程
ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测和定量分析生物样本中的特定抗原或抗体。
本操作规程旨在提供一套标准化的ELISA操作步骤，以确保实验结果的准确性和可重复性。
二、材料和试剂准备1. 微孔板：96孔的酶联免疫吸附板。
2. 样本：待测试的生物样本，如血清、尿液等。
3. 标准品：已知浓度的目标抗原或抗体。
4. 缓冲液：适用于特定ELISA试剂盒的缓冲液，如PBS（磷酸盐缓冲液）。
5. 洗涤缓冲液：含有洗涤剂的缓冲液，如PBS-T（磷酸盐缓冲液-0.05% Tween-20）。
6. 酶标记的二抗：与目标抗原或抗体特异性结合的二抗，如HRP（辣根过氧化物酶）标记的抗人IgG。
7. 底物：与酶标记结合并产生可测量信号的底物，如TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）溶液。
8. 停止液：用于停止底物反应的溶液，如2M硫酸。
三、操作步骤1. 准备微孔板a. 将微孔板放置在工作台上。
b. 标记每个孔的编号，以便记录结果。
c. 添加适量的样本和标准品至不同的孔中，每个孔的体积应相同。
d. 添加适量的缓冲液至空白对照孔中。
2. 孵育a. 将微孔板盖好，使用封闭膜密封。
b. 将微孔板置于恒温孵育箱中，在适当的温度下孵育一段时间，通常为1小时。
3. 洗涤a. 将微孔板倒置，轻轻拍打以除去孔内液体。
b. 使用洗涤缓冲液，将每个孔洗涤3-4次，每次洗涤约200μL。
c. 在洗涤完成后，轻轻拍打微孔板以除去多余的洗涤缓冲液。
4. 添加酶标记的二抗a. 加入适量的酶标记的二抗至每个孔中，注意避免交叉污染。
b. 盖好微孔板，继续在恒温孵育箱中孵育一段时间，通常为1小时。
5. 再次洗涤a. 重复第3步的洗涤步骤，确保洗净未结合的二抗。
6. 底物反应a. 加入适量的底物（TMB溶液）至每个孔中。
b. 在暗处孵育一定时间，通常为15-30分钟，直至产生明显的颜色反应。
大豆β-伴球蛋白(β-conglycinin)ELISA试剂盒说明书
操作步骤
1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自 封袋密封放回 4℃。 2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μ L； 3. 样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；空白孔不 加。 4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶 （HRP）标记的检测抗体 100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅 或恒温箱温育 60min。 5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去 洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。 6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 7. 每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。 结果判断 绘制标准曲线：在 Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应 OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样 本浓度值。
1. Can’t detect the samples which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断 大豆β-伴球蛋白（β-conglycinin）ELISA 检测试剂
盒
即可检测。 4. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存 于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 自备物品
使用说明书
1. 酶标仪（450nm）
检测原理
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
ELISA操作规程
ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种常用的生物化学分析方法，用于检测特定抗原或抗体的存在。
本操作规程旨在提供ELISA实验的详细步骤和操作要点，以确保实验的准确性和可重复性。
二、实验材料1. 96孔ELISA板2. 酶标仪3. 微量移液器和相应的移液器枪头4. 高纯度去离子水5. 洗涤缓冲液（含有洗涤剂）6. 试剂盒（包括抗原或抗体）7. 酶标记二抗8. 显色底物9. 停止液三、实验步骤1. 准备工作a. 准备工作台和实验仪器，确保无菌无尘。
b. 检查实验材料的完整性和质量。
c. 根据实验设计，准备所需的试剂和标准品。
2. 样品处理a. 收集样品，并根据实验需求进行适当的处理，如离心沉淀、稀释等。
b. 将处理后的样品分配到ELISA板中，每个孔的样品量保持一致。
3. 标准曲线制备a. 准备一系列已知浓度的标准品，涵盖实验所需浓度范围。
b. 将标准品加入ELISA板中的相应孔中，每个浓度至少重复3次。
c. 使用高纯度去离子水作为空白对照。
4. 抗原或抗体结合a. 将ELISA板密封，并在37摄氏度恒温箱中孵育一定时间，使抗原或抗体与样品中的目标物结合。
b. 根据实验需求，调整孵育时间和温度。
5. 洗涤步骤a. 轻轻倾斜ELISA板，将孵育液倒掉。
b. 向每个孔中加入洗涤缓冲液，使其充满孔底。
c. 快速倒掉洗涤缓冲液，重复此步骤3-5次，以充分去除非特异性结合物。
6. 添加酶标记二抗a. 向每个孔中加入适当稀释的酶标记二抗，使其与特异性结合物结合。
b. 将ELISA板重新密封，并在37摄氏度恒温箱中孵育一定时间。
7. 洗涤步骤a. 重复第5步中的洗涤步骤，以去除未结合的酶标记二抗。
8. 显色反应a. 向每个孔中加入适量的显色底物，使其与酶标记二抗发生反应。
b. 在适当的时间内观察颜色的变化，并在反应终止前进行测量。
9. 反应终止a. 向每个孔中加入适量的停止液，停止显色反应。
ELISA试剂盒操作方法
ELISA试剂盒操作方法ELISA（酶联免疫吸附法）是一种常用的实验技术，用于检测目标物（如蛋白质、抗原或抗体）的存在和浓度。
ELISA试剂盒是ELISA实验的核心，包括特定的试剂和材料，用于执行特定的步骤和操作。
以下是一般ELISA试剂盒的操作方法，包含以下步骤：1.准备实验样品：收集所需分析物的样品（例如血清、细胞上清液或组织提取液等），并适当保存或稀释以便后续操作。
2.预处理步骤：根据实验的目的和试剂盒的要求，进行样品的预处理。
这可能包括去除干扰物质、离心、稀释或加热等处理步骤。
3.涂覆酶联免疫板：打开试剂盒中提供的酶联免疫板，将其放置在工作台上。
将涂覆物质（如抗体或抗原）加入到每个酶联免疫孔中，通常使用多通道移液器或微量移液器进行操作。
涂覆后，尽量避免泡沫和交叉污染。
4.触发剂孵育：将涂覆后的酶联免疫板放入孵育箱或板上孵育器中，在适当的温度下孵育一段时间。
此步骤的目的是固定涂覆物质，并优化其活性。
5.洗涤：将试剂盒中提供的缓冲液加入酶联免疫孔中，并倾斜孔盘轻轻敲打或使用洗板仪进行洗涤，以去除未结合的物质和杂质。
通常，洗涤液需要多次更换，充分洗涤以获得更好的准确性和灵敏度。
6. 过量引物（Block）：加入试剂盒提供的阻断缓冲液至孔中，目的是防止非特异性结合的发生。
阻断时间可以根据试剂盒的要求进行调整。
7.加入样品和控制物质：将处理好的样品和控制物质，如阳性对照和阴性对照，加入到各个酶联免疫孔中。
注意要根据试剂盒的要求进行适当的稀释。
8.孵育和洗涤：将孔盘放回孵育箱或板上孵育器中，按照试剂盒的要求进行孵育。
完成孵育后，继续进行洗涤步骤，以去除未结合的物质。
9.检测剂加入：将检测试剂（通常是特异性抗体或酶标记物质）加入酶联免疫孔中。
如有需要，可以进一步稀释试剂以适应实验要求。
10.再次孵育和洗涤：将孔盘放回孵育箱或板上孵育器中，对要求进行的步骤进行孵育。
完成孵育后，进行洗涤步骤以去除未结合的物质。
ELISA操作规程
ELISA操作规程
标题：ELISA操作规程
引言概述：ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种常用的生物化学分析技术，用于检测特定蛋白质、抗体或其他生物分子的存在和浓度。
正确的操作规程对于获得准确可靠的实验结果至关重要。
一、实验前准备
1.1 准备实验室基本设备：ELISA板阅读器、洗板机、移液器等。
1.2 准备实验试剂：包括底物、酶标记的抗体、洗涤缓冲液等。
1.3 根据实验方案准备样本：如血清、细胞上清液等。
二、板涂覆
2.1 将试剂均匀涂覆在ELISA板上。
2.2 封闭未被试剂覆盖的部分，防止非特异性结合。
2.3 将板在4℃下保存一段时间，促使试剂充分吸附。
三、样本加样
3.1 样本需按照实验方案稀释，避免过高或过低浓度。
3.2 每孔加样量要准确，避免交叉污染。
3.3 混匀样本后，避免气泡产生。
四、洗板
4.1 使用洗板机进行洗板，确保每孔洗涤充分。
4.2 每次洗板后用吸头吸去残留液，避免残留物干扰实验结果。
4.3 洗板缓冲液的配制与使用要按照规定比例和方法进行。
五、显色和读板
5.1 加入底物后，保持暗处孵育一段时间。
5.2 在适当波长下读板，记录吸光值。
5.3 根据实验方案计算样本浓度，注意结果的解读和分析。
结语：ELISA操作规程的正确执行对于实验结果的准确性至关重要。
只有严格按照规程操作，才能获得可靠的实验数据，为科研工作提供有力支持。
希望本文提供的ELISA操作规程能够对您的实验工作有所帮助。
ELISA实验步骤小结
人血清中NELIN蛋白的测定
一、实验前准备：
1、取出试剂盒，室温下放置至少30分钟，底物Ｂ避光放置。
2、准备物品：
恒温箱（37℃提前预热）酶标仪、微量移液器(多道加样槽)及吸头、一次性试管或EP管（标准品稀释）、蒸馏水、吸水纸、盛放液体的容器、加样槽。
二、实验步骤
1、配置标准品溶液；取5个EP管，各加入120μ稀释液，然后倍比稀释（注意混匀，吹打混匀时注意避免产生气泡、避免用力过大将液体吹出管外）。
5号（8ng/ml）120μl原倍标准品+ 120μl稀释液
4号（4ng/ml）120μl 5号标准品+ 120μl稀释液
3号（2ng/ml）120μl 4号标准品+ 120μl稀释液
2号（1ng/ml）120μl 3号标准品+ 120μl稀释液
1号（0.5ng/ml）120μl 2号标准品+ 120μl稀释液
问题：稀释过程中是否要更换枪头？
2、加样。
空白孔：只加显色剂A、B和终止液。
标准品孔：标准品50μl（已有抗体）+链霉素亲和素-HRP
样品孔：样品40μl+抗NELIN抗体10μl+链霉素亲和素-HRP
问题：空白孔及标准孔怎么选择？复孔怎么选择？。
Elisa实验报告
Elisa实验报告一、引言二、材料与方法1.样品制备：收集目标蛋白样品，将其加入适当的缓冲液中，并离心去除杂质。
2.准备试剂和工具：包括抗原涂板、试剂盒、显色底物、酶标仪等。
3. Elisa过程：a.将样品加入抗原涂板中，与涂板表面的抗体结合。
b.洗涤抗原涂板，除去未结合的物质。
c.加入检测抗体，与样品中的抗原结合。
d.再次洗涤抗原涂板，除去未结合的物质。
e.加入显色底物，使反应物质变色。
f.结束反应后，使用酶标仪测量样品的吸光度。
三、结果与讨论1.实验结果：根据测量的吸光度值，计算出目标蛋白质的浓度。
2.数据处理：使用相关软件或公式对实验结果进行数据处理和统计分析。
四、结论通过Elisa方法，成功检测并定量了目标蛋白质的含量。
实验结果表明该方法可用于快速、准确地检测目标蛋白质，具有较高的灵敏度和特异性。
然而，实验中可能存在的误差需要进一步探究和改进，以提高实验结果的准确性和可靠性。
五、实验改进建议1.优化样品准备过程，确保样品中的目标蛋白质不受污染或降解。
2.优化抗原涂板的选择和处理，以提高抗原与抗体的结合效率和稳定性。
3.准确定量样品的吸光度值，增加测量几组数据以降低实验误差。
4.定期校准酶标仪，确保测量结果的准确性和可重复性。
六、总结Elisa实验是一种常用于检测目标蛋白质含量的方法，通过酶作为报告信号，实现了定量性分析。
本实验通过Elisa方法成功检测到目标蛋白质，并完成了浓度的定量分析。
然而，实验中还存在一些潜在误差，需要进一步改进和优化实验方法。
我们相信通过不断的实验改进和优化，Elisa方法将在临床和科研应用中发挥更大的作用。
ELISA操作规程
ELISA操作规程引言概述：ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种常用的生物化学分析技术，用于检测蛋白质、抗体、激素等生物份子的存在和浓度。
ELISA操作规程是指在进行ELISA实验时需要遵循的一系列操作步骤和注意事项，以确保实验结果的准确性和可靠性。
一、实验前准备1.1 准备实验室工作台、试剂、试管、移液器等实验器材，并保持实验环境清洁整洁。
1.2 检查试剂的保存条件和有效期，确保试剂的质量和稳定性。
1.3 根据实验方案准备好样品，标记清晰每一个样品的编号和处理方法。
二、ELISA板的处理2.1 将ELISA板放置在工作台上，按照实验方案的要求将标准品和样品加入到板的相应孔中。
2.2 使用洗板机或者手动洗板的方法洗涤板，去除未结合的物质。
2.3 加入底物溶液，根据底物的颜色变化来测定样品中目标物质的浓度。
三、数据处理和分析3.1 记录实验过程中的每一个步骤和操作，包括试剂的使用量、操作时间等信息。
3.2 使用ELISA阅读器读取板上的吸光度值，根据标准曲线计算出样品中目标物质的浓度。
3.3 对实验结果进行统计分析，比较不同样品之间的差异性，并进行结果的解释和讨论。
四、实验安全和废物处理4.1 在实验过程中要注意个人防护，避免接触有害物质或者溶液。
4.2 实验结束后，对实验器材和废液进行正确的处理，避免对环境造成污染。
4.3 定期清洁实验室环境，保持实验室的卫生和安全。
五、实验结果报告5.1 撰写实验报告，包括实验目的、方法、结果和讨论等内容。
5.2 结果报告要清晰准确，遵循学术规范，确保实验结果的可信度和可重复性。
5.3 将实验结果与文献进行比较和分析，为后续研究提供参考和启示。
总结：ELISA操作规程是进行ELISA实验时必须遵循的一系列操作步骤和注意事项，通过正确的实验操作和数据处理，可以获得准确可靠的实验结果，为科研工作和临床诊断提供重要参考。
希翼本文的内容可以匡助读者更好地掌握ELISA实验技术，提高实验效率和结果的质量。
ELISA检测试剂盒使用指南
ELISA检测试剂盒使用指南ELISA检测试剂盒使用指南1.简介：1.1 本文档旨在提供ELISA检测试剂盒的详细使用指南，以帮助用户正确、高效地进行ELISA检测。
1.2 ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫测定方法，用于检测体液中特定抗原或抗体的存在与浓度。
1.3 本文档将涵盖ELISA检测试剂盒的准备、样本处理、试剂操作、结果读取等详细步骤。
2.准备：2.1 确保实验室环境整洁，无污染。
2.2 检查所需试剂、仪器和设备是否完整，并检查有效期和储存条件。
2.3 根据实验需要，准备所需样本和质控品，并储存于适当的条件下。
3.样本处理：3.1 根据实验目的选择合适的样本类型，如血清、血浆、尿液等。
3.2 根据试剂盒说明书的要求，对样本进行适当的稀释和预处理。
3.3 严格控制操作条件，避免样本污染和交叉污染。
4.试剂操作：4.1 根据试剂盒说明书，将所需试剂从冰箱中取出，并在室温下适当恢复。
4.2 严格按照说明书的要求，对试剂进行稀释和混合。
4.3 操作过程中注意洁净实验台面，避免试剂交叉污染。
5.检测步骤：5.1 将适量的稀释后的样本、质控品和标准品分别装入试管中。
5.2 添加适量的酶标记抗体或底物，并充分混匀。
5.3 按照试剂盒说明书的要求，进行孵育和洗涤步骤。
5.4 添加底物并进行反应，控制反应时间。
5.5 停止反应，并使用酶标仪测量吸光度。
6.结果读取：6.1 根据试剂盒说明书，根据吸光度值和标准曲线，计算样本中目标物质的浓度。
6.2 将测量结果记录，并进行统计和分析。
6.3 评估实验结果的可靠性，并进行结果的解释和报告。
7.注意事项：7.1 严格按照试剂盒说明书的要求进行操作，避免任何操作步骤的误差和误操作。
7.2 注意实验室安全，避免接触有害化学物质，正确使用防护设备。
7.3 在实验过程中遵循生物安全操作规范，避免潜在的感染风险。
此外，本文档涉及附件，请在附件部分查看相关详细信息。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
大豆抗原蛋白elisa试剂盒使用方法
检测范围：96T
2 ng/L -48 ng/L
使用目的：
本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中大豆抗原蛋白含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大豆抗原蛋白水平。
用纯化的大豆抗原蛋白抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入大豆抗原蛋白，再与HRP标记的大豆抗原蛋白抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的大豆抗原蛋白呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大豆抗原蛋白浓度。
试剂盒组成
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好
控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月。