实验二普通显微镜的使用及细菌的简单染色法

实验二普通显微镜的使用及细菌的简单染色法

一、实验目的

1.学习并掌握油镜的原理和实使用方法。

2.复习普通台式显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。

二、实验原理

（一）.普通显微镜普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。它们由机械装置和光学系统两大部分组成。在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。而在普通光学显微镜通常配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大。使用油镜时，需在载玻片与镜头之间加滴油，原因：1.增加照明亮度。2.增加显微镜的分辨率。（二）.简单染色法简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。它适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。

常用碱性染料进行简单染色，因为：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带有负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更容易于识别。常用做染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。

三、实验器材

1.菌种细菌营养琼脂平板培养物。

2.染色剂结晶紫染液。

3.仪器或其他用具显微镜，酒精灯，接种环，擦镜纸，生理盐水等。

四、操作步骤

1.涂片取两块载玻片，各滴一滴生理盐水于玻片中央，用接环以无菌操作从细菌平板上挑取少许菌体于水滴中，混匀并涂成薄膜。

2.干燥室温自然干燥。

3.固定涂面朝上，通过火焰2~3次。

此操作过程称热固定，其目的是使细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。

4.染色将玻片平放于玻片搁架上，滴加染液于涂片上。

5.水洗倒去染液，用自来水冲洗，直至图片上流下的水无色为止。

6.干燥自然干燥，或用电吹风吹干，也可用吸水纸吸干。

7.镜检涂片干燥后镜检。

（1）在低倍镜下观察。

（2）在高倍镜下观察。

（3）在油镜下观察：在高倍镜或低倍镜下找到要观察的样品区域后，用粗调节器将镜筒升高，然后将油镜转到工作位置。在待观察的样品区域加香柏油，从侧面注视，用粗调节器将镜筒小心地降下，使油镜浸在镜油中并几乎与标本相接。将聚光器升至最高位置并开足光圈，若所用聚光器的数值孔径超过1.0，还应在聚光镜与载玻片之间也加滴香柏油，保证器达到最大的

效能，调节照明使视野的亮度合适，用粗调节器将镜筒徐徐上升，直至视野中出现物像并用细调节器使器清晰准焦为止。

五、实验报告

1.结果根据观察结果，绘出两种细菌的形态图。

2.思考题

（1）.实验的注意事项有哪些？

（2）为什么要制片完全干燥后才能用油镜观察？

（3）如果涂片未经固定，将会出现什么问题？如果温度过高、时间太长，又会怎样呢？