免疫血液学基础

加入抗人球蛋白抗体，通过抗人球蛋白抗体的 特异性桥连作用，促进红细胞的凝集
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抗人球蛋白实验
+ Anti-Human Globulin (AHG) 试剂 致敏红细胞的IgG抗体 或补体成份
加入抗人球蛋白试剂后 形成肉眼可见的凝集反应
39
抗人球蛋白实验
1. 红细胞致敏反应 2. AHG反应
肉眼不可见

恢复及维持机体的氧(O2)供应


治疗临床上严重的失血性疾病
治疗血液系统紊乱性疾病 新生儿溶血病的治疗
29
如何保证输血安全有效
检测献血员和用血者血液中的抗原和抗体，选择抗 原，抗体尽可能相容的血液进行输血：

红细胞定型 血浆（血清）抗体筛查/抗体鉴定， 红细胞的直接抗人球蛋白试验和吸收放散试验 献血员与受血者之间的交叉配血
wiener
27
输血死亡主要原因分析
(美国，1980)
61%
非ABO溶血性反应 肝炎
10%
循环过载ARDS 移植物抗宿主病 血液处理粗心 感染血
16% 2% 2% 1% 8%
ABO反应
28
免疫血液学能解决什么问题
保证人们用血（输血）,包括血液、血液成分或
血液制品的安全、有效。
输血是一项广泛应用且十分重要的治疗手段
相对应抗原所有人的外周血中
• “天然抗体”临床上可用于反定型
• ABO血型系统亚型
A：A1、A2、A3、Ax、Am，等 B：B2、 B3、Bx、Bm，等
22
ABO血型系统
ABO 血型
O A B RBC 上的抗原 H A B 血清 中的抗体 Anti-A,B Anti-B Anti-A
基因型
14
血型抗体
• • •
只识别相对应的红细胞抗原并与之结合 与红细胞上相对应的抗原结合后，可引起红细 胞的破坏、溶解(溶血反应)
两种表现形式
“天然抗体”：机体自然产生的抗体 如：抗-A、抗-B（可用于反定型） ―免疫性抗体” - “不规则抗体”：经免疫 原刺激后而产生的应答性抗体
如：抗-D、抗-K，等等
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新生儿溶血病血型血清学检查
方法: 婴儿及其父母ABO/RH血型鉴定
婴儿及母亲血清中血型抗体鉴定 (盐水介质法、酶法、抗球蛋白法等) 婴儿红细胞上 血型抗体鉴定 (抗球蛋白法、放散试验)
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谢谢各位！
54
强生OCD 免疫血液学产品发展历程
1937：Philip B. Hofmann在新泽西创建Ortho公司； 1944：Philip Levine博士加入Ortho研究基金会；
肉眼可见
40
抗人球蛋白实验
•
直接抗人球蛋白实验(DAT)
红细胞在体内(in vivo)即被不规则抗体所致敏，因此 直接加入抗人球试剂即可进行测定；如某些过敏性 药物及引起溶血性输血反应的抗体、自身抗体等
•
间接抗人球蛋白实验(IDAT)
红细胞在体外(in vitro)首先被不规则抗体或抗血清试 剂所致敏，然后再加入抗人球试剂进行测定；如抗 体筛查、抗体鉴定、交叉配血等
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医院输血科的主要职责
提供临床所需的血液成份
提供血型相符或配合的血液
为临床提供血型相关的检测诊断
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输血前测试流程
交叉配血阴 性 发血
ABO、Rh
有抗体
抗体鉴定再 继续配血
或送血液中 心 选择洗涤红 细胞
交叉配血阳 性
检查是否有 抗体
送血液中心 无抗体
43
www.sbc.org.cn
45
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ ABO血型鉴定
方法: 红细胞凝集试验
正定型 用已知抗-A或抗-B定型试剂来测定红细
胞上有无相应的A抗原或/和B抗原
反定型 用已知A1型细胞和B型细胞来测定血清中
有无相应的抗-A或/和抗-B
正反定型结果不一致或有疑问，需进一步行ABO血型确 认试验。
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ABO血型鉴定正常反应结果
血型 A B AB O 抗-A + + 抗-B + + A型红细胞 B型红细胞 + + + +
11
血型抗原
K D C
存在于红细胞表面
化学结构：
A
D
蛋白质
B
K
C
蛋白质上的糖类抗原 糖蛋白或脂类（糖脂）
12
血型抗原系统举例
•
ABO – A、B
•
• • • • • •
Rh (Rhesus) – D、C、E、c、e
K (Kell) – K、k (cellano)
Fy (Duffy) – Fya、Fyb
常用输血前测试方法
1. 平板法
- 细胞浓度适宜，避免交叉污染，及时观察结果
2. 试管法
- 加样顺序，反应条件，洗涤细胞注意事项
3. 微量板法 - 加样和振荡避免交叉污染 4. 柱凝集法
- 避免假阳性，使用前观察凝胶板
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常用输血前检测项目

ABO血型鉴定


Rh血型鉴定
红细胞血型抗体筛查/鉴定 交叉配血试验 HDN血型血清学检查
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五、柱凝集技术检测法
是微柱凝集技术与上述
所有技术相结合的产物
1986年由法国人
柱凝集技术原理
Dr.Yves Lappierre发明
1994年获得美国FDA认
证，目前在许多发达国 家已经作为常规技术应 用于临床
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六、抗人球蛋白试验 Coombs试验
在盐水凝集法或低离子强度盐水法的基础上，
15
血型抗体
免疫性抗体根据应答机制又可分为两大类:
自身抗体(Auto-antibody)
可凝集或致敏机体自身的红细胞，常见于自身 免疫性溶血性贫血、药物性溶血性贫血或各种 自身免疫病
• 同种抗体(Allo-antibody)
可凝集或致敏机体外来的红细胞，常见于各种 输血引起的溶血性疾病
16
血型抗体
Jk (Kidd) – Jka、Jkb Le (Lewis) – Lea、Leb MNS系统 P1
13
血型抗原的免疫原性
•
当某种抗原分子进入不含该决定簇的机体时，刺激机 体产生相应抗体的能力 免疫原 = 抗原 D抗原：强免疫原 Fya抗原：弱免疫原
•
•
免疫原性的强弱与以下因素有关
抗原分子的氨基酸序列(一级结构)及空间构象(二 级结构及三、四级结构) 红细胞上该抗原分子的表达数量
1947：推出第一个Rh血清凝集试剂及抗人血清；
1956：建立、推广全球第一个标准化交叉配血方法及程序； 1960：在美国成立了第一家正规的血型技术学院； 1968：第一个防止新生儿Rh系统溶血的药物－RhoGAM上市； 1985：BioClone抗人球蛋白试剂及抗A、抗B试剂上市； 1992：更简便及标准化操作的柱凝集技术（CAT）血型及交叉配血试剂
C、c、D、E、e
• 根据D抗原是否存在，一般将Rh系统定义为
Rh阳性：D抗原阳性 Rh阴性：D抗原阴性
25
Rh阴性知多少
15％
4％ 0.4％
26
Rh血型对输血影响有多大？
ABO血型发现后40年才
发现Rh血型
无数Rh阴性人输了Rh
阳性血后无反应
landsteiner
Levine
•输血前检测 •（1）住院患者血型定型（正定） •（2）用血患者血型在此定型（正 反定型）， •（3）交叉配血，抗体筛查，抗体 鉴定 •多数医院输血前不再进行传染病检测 31
红细胞血型血清学检测技术
盐水凝集法 低离子强度盐水法 酶技术 凝聚胺技术
抗人球蛋白检测法
柱凝集技术检测法
免疫血液学基础知识
1
主要内容
临床输血发展简史
免疫血液学基础概念
红细胞血型抗原系统 红细胞血型血清学检测技术 医院血库的工作职责
2
人类历史上早期输血尝试
1667年法国御医Jean用羊血治疗精神病患者
3
早期的床边直接输血
1818年英国产科医生James 首次用人血输治患者
34
三、酶技术
利用木瓜酶或菠萝酶破坏红细胞表面唾液酸，使红细
胞失去电荷，缩小细胞间距离
同时改变红细胞膜表面结构，使某些隐蔽的抗原暴露，
从而增强凝集反应
主要用于一些不完全抗体的检测
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四、凝聚胺技术
利用多聚季胺盐在介质溶液中产生大量正电荷中和红
细胞表面的负电荷，减少红细胞间排斥，促进凝集
4
血型之父
1901发现ABO血型 又发现MN，P，Rh等血
Karl Landsteiner
(1868.06.14～1943.06.26)
型，赢得了“血型之父” 的誉称。
1930年因发现人类ABO
血型系统而获得诺贝尔 奖金
5
真正使输血变得容易的人卢因森 （1915年1月）
纽约的卢因森博士发明了实用的柠檬酸钠抗凝
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Rh血型鉴定
原理: Rh血型系统最常见的抗原主要有C,c,D,E,e 5种。 可分别用抗C、抗c、抗D、抗E、抗e这5种Rh 定型试剂通过血凝试验来检查红细胞上是否存
在相应抗原。在临床输血中，一般只做D抗原
的鉴定。凡被检红细胞和抗D试剂凝集者为
RhD阳性，不凝集者为RhD阴性。
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抗体筛查/抗体鉴定
制备用于输血的成分血 献血员的筛查：肝功能，传染性疾病 评价溶血性贫血 母婴相容性检测
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我国的采供血程序 及输血前检测
志愿献血员 筛选合格 献血员 血液中心（中心血站） 采血 初检 复检 医院 随机检测 输血
• 问卷 • 快速测试
•传染病检测：HBs • 进口或 Ag, HCV, HIV ,ALT, 国产试剂 Syphilis •红细胞定型（正定）
• 检测目的
对受血者的血清或血浆做常规的抗体筛查试验， 发现有临床意义的不规则抗体。
• 实验方法
让受检的血清/血浆与特殊的试剂红细胞组（已 知抗原表型的筛选红细胞）一起反应，以发现 样品中可能存在的不规则抗体。
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抗体筛查/抗体鉴定
• 测定结果
反应阳性：抗体存在 反应阴性：抗体不存在
• 抗体鉴定
抗体一旦被检出，应作抗体鉴定
剂
–方便献血
–方便输血 –方便保存 –方便运输 –使建立血库成为可能
6
临床输血发展简史
1901、1940年奥地利科学家Landsteiner等人先后
发现了ABO和RH血型系统，使输血治疗有了 牢固的科学基础，从而极大地提高了临床输血 的安全性
1937年世界上第一个血库在芝加哥Cock County
我国输血事业的发端
1944年 我国第一个冻干血库中心在昆明
建立。
1947年 我国第一个医院血库在南京建立。 1953年 我国第一个大型中心血库在沈阳
建立。
10
免疫血液学
免疫血液学（Immunohematology，IH），
是一门研究人体血型抗原及抗体，并通 过输血前测试血型抗原-抗体反应，找到 合适的血液源，从而达到安全输血目的 的实验室医学分支学科。
50
交叉配血
• 检测目的
分析受者和供者血液是否完全相符
• 反应原理
主侧：受者血清/血浆 + 供者红细胞 次侧：受者红细胞 + 供者血清/血浆
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新生儿溶血病血型血清学检查
新生儿溶血病(HDN)是由母婴血型不合引起, 胎 儿和新生儿红细胞被来自母体的 IgG抗体致敏, 并 在其自身网状内皮系统受到免疫性破坏。
IgM = ―完全抗体”
= 室温下发生发应 = 如：抗-A、抗-B、抗-M、抗-Lea、抗-P1 = 大部分的血型分析试剂及“冷”抗体是IgM类抗体 IgG = ―不完全抗体” = 37oC下反应 = 如：抗-D、抗-K、抗-Jka、抗-Fya，等
= 几乎所有临床有意义的不规则抗体都是IgG抗体
17
32
一、盐水凝集法
孵育30分钟
红细胞和抗血清在盐水溶液中直接反应
特点是操作简便，设备简单，缺点是影响因素多，灵
敏度低
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二、低离子强度盐水法
通过降低介质溶液的离
子强度，减少红细胞外 围离子云的强度，促进 IgG分子在两个红细胞间 桥联，而促进凝集
特点是缩短抗原抗体反
孵育1分钟
应时间，提高反应灵敏 度
血型抗体模式图
IgM
IgG
18
完全抗体 可以直接凝集红细胞
IgM分子 的跨度可 达34nm
19
不完全抗体 不能直接凝集红细胞
IgG分子的 跨度仅为 14nm
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血型抗原-抗体反应
抗-A抗体破坏A型红细胞
缩短红细胞寿命 破坏红细胞 溶血
抗-A抗体
死亡
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ABO血型系统
• 目前所发现的人类最重要的血型抗原系统 • ABO血型系统的“天然抗体”几乎存在于不含
医院建立，标志着输血开始成为临床医学的重 要组成部分和常规治疗手段
现在输血已经发展成一门涉及多学科的独立的
边缘学科 - 输血医学
7
二战促进了输血医学的发展
失血是战场死亡的主要原因 朝鲜战场上90％的士兵死于没有及时输血 输血的早期实践者之一 — 白求恩
8
在二战中战场输血非常普遍
9
O/O A/A or A/O B/B or B/O
AB
A&B
None
A/B
23
ABO以外 重要的血型系统及其抗体
Duffy Kidd Mur Dia Tja
P Lewis
MNS
Rh
2005年，29个红细胞血型系统274个抗原
24
Rh血型系统
• 除ABO外与输血有关的最重要的血型系统之一
• 最重要的五种抗原