安捷伦高效液相色谱仪操作说明

安捷伦高效液相色谱仪操作说明

一、校枪及样品处理

1. 校枪

仪器：两个小烧杯、分析天平、移液枪1000μL、100μL

步骤：打开分析天平预热，一只烧杯放到称量盘上调零，一只装入纯水。将移液枪1000μL、100μL调至950μL、50μL，分别吸取纯水称质量，如偏大或偏小，调节移液枪直至准确到0.001g。（如枪使用过久或气密性不好，可以准备一个小烧杯装入纯水，每次先轻轻沾湿枪口，甩掉水或在用卫生纸吸取口上的水，再插上枪头使用。）注意慢吸慢放，不要挂珠。2. 样品处理：用1.5mL离心管取0.5mL发酵液，取出样品后，首现在离心机上离心（13000rap/min 3min）。然后将样品稀释20倍，取950μL纯水、50μL发酵液于离心管中。混匀后在离心机上离心（13000rap/min 3min）。准备自动进样瓶（瓶中放上内衬管），取200μL待测液盖紧盖子。按顺序放到自动进样盘中。

二、开机

1、仪器各组件

将在线脱气器、泵：四元、进样器：自动进样器（六通阀）、柱温箱、检测器：示差折光检测器开关打开。

打开计算机,进入Windows XP 画面,并运行CAC Server程序，打开色谱仪各组件电源，待显示已联上各组件的信息及各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online ，图标打开工作站。化学工作站自动与1200LC通讯。

流动相:将流动相（一般不主张使用偏酸、偏碱的流动相）放入溶剂瓶中，打开冲洗阀，设流速为2ml/min，单击确定，再依次单击泵→控制，选中启动，单击确定，则系统开始冲洗，至管路无气泡为止，切换管路反复操作至所需管路均无气泡。在“控制”选项中选“关闭”，关闭泵，关闭冲洗阀。单击泵下面瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。

每次四元泵开始前，要打开冲洗阀阀门以5ml/min的流速冲洗10分钟，使脱气机与泵之间的流动相从冲洗阀流出，以免隔夜的流动相损伤色谱柱。

每次进样检测前，要用流动相冲洗色谱柱30分钟，达到柱温前20min流速设为

0.2ml/min，达柱温后再改为0.6ml/min。待1—1.5h检测器的基线稳定方可进行进样检测；检测结束后，色谱柱要先用水冲洗20分钟，然后用甲醇或乙腈冲洗至少20分钟，以延长色谱柱的使用寿命。绝对禁止偏酸、偏碱的流动相以及缓冲液在色谱柱中过夜。

三、编辑分析方法

新方法建立：程序菜单显示绿色，即可进行参数设置及操作

泵参数设定：设定流速、比例、运行时间、平衡时间、泵辅助设定（梯度）等。

点击确定进入下一画面

自动进样器参数设定：设定进样量（5μL）、抽取位置（调节针高度3.0mm）、进样方式等。“序列”→序列参数→子目录（日期：年月日时间）

“序列表”：插入/批量输入向导→“追加”、“插入”→“样品位置”、“开始位置”、“增量”、“插入行数”

标准进样：只能输入进样体积，此方式无洗针功能。

抽取位置：3.0mm

洗针进样：可以输入进样体积和洗瓶位置此方式针从样品瓶抽完样品后会在洗瓶中洗针。

柱温箱参数设定：测定时75℃，反冲时80℃。（在”温度”下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击”更多>>”键,选中“与左侧相同”使柱温箱的温度左右一致，点击“确定”进入下一界面。

检测器参数设定－示差参比池

冲洗：10min（校零）。不需要每次都冲洗。

温度设置50℃（不要设很高，与检测器温度相当即可）

选中点击确定进入下一画面

方法保存

单击方法另存为输入一—方法名，如test 单击确认

选择已有方法：点击【Method】，点击【Load method】选项，选取已存的各种操作方法。

四、样品分析与采集数据

将样品放于样品盘中相应位置，所有的样品均需澄清。

“序列”→“序列参数”：按照自动进样盘上的样品瓶的顺序编写参数（样品瓶位置、名称、方法）。

待仪器显示Ready，基线平稳，从【Run control】菜单中选择【Run Method】，开始进样分析。或点击“开始”开始进样分析。

数据处理：单击【View】菜单，单击【Data analysis】选项，进行数据分析。单击【View】菜单，单击【Method and Run control】选项，回到样品分析界面。

数据分析方法编辑

从File 菜单选择Load signal 选中您的数据文件名，单击Ok

积分：从“积分”中选择“积分”,如积分结果不理想,再从菜单中选择“积分事件”选项选择合适的斜率灵敏度、峰宽、最小峰面积、最小峰高

从积分菜单中选择积分选项则数据被积分

如积分结果不理想则修改相应的积分参数直到满意为止

单击左边图标将积分参数存入方法

五、标准曲线的绘制

1.称取葡萄糖、果糖、蔗糖(恒重）各1g准确到0.0001g，稀释到1000mL容量瓶中。

2.将标准溶液摇匀，用离心管取糖标液，准备自动进样瓶（瓶中放上内衬管），取200μL 待测液盖紧盖子。

3.设置：将样品放于样品盘中相应位置，所有的样品均需澄清。

“序列”→“序列参数”：按照自动进样盘上的样品瓶的顺序编写参数（样品瓶位置、名称、方法、进样量: 相应成梯度的量）。

用浓度和峰面积回归，就得到了标准曲线

7、关机

冲洗系统：反相柱用10％的甲醇水冲洗系统30分钟，再用100％甲醇冲洗系统20分钟，然后关泵，正相柱先用合适溶剂冲洗，后用柱保存液冲洗。

退出工作站，关闭计算机。

关闭10％异丙醇溶液控制阀。

关闭仪器各组件

关掉电源开关

8、注意事项

⑴、色谱柱使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相类型等；必须使用保护柱；色谱柱长时间不用时，柱内应充满溶剂，两端封死保存。

⑵、流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。