左旋丁基苯酞对Aβ1-42诱导的原代培养神经元Caspase-3的影响
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记检测 Ｃ ｓａｅ３的含量变化 ， ａｐｓ一 观察 Ａ 对神经元 的损伤及不 同剂量 的左旋 丁基苯酞对神经元 的影响 。结果 与 ｐ 正常组相 比， 作用 于基底前脑及海 马神经元 ４ ＡＢ ８ｈ后 ， 存活率显著下降 ，ａｐ ｓ一 Ｃ ｓａｅ３增高（ ０ ０ ） 不 同剂量 左 Ｐ＜ ． １ ， 旋丁基苯酞能够显著增 高神 经元存 活率 ， 抑制 Ｃ ｓａｅ３表 达 （ ０ ０ ） 且 以中 、 剂量组 的作 用显著 。结 论 ａｐｓ一 Ｐ＜ ． ５ ， 高 Ａ３ 能够诱导原代 培养 神 经元 Ｃ ｓａｅ Ｉ ａｐｓ一 达 ， 旋 丁 基 苯酞 能 够 降低 Ａｐ 诱 导 的基 底前 脑 和 海 马神 经元 ３表 左
１３２ 分 组 及 药 物 处 理 ．．
Ａ 人 工 重 组 蛋 白质 ｐ
（ ． ｇ 溶 解 于 Ｄ Ｏ 中ｌ ０ １ｍ ） ＭＳ ， 配成 浓 度 为 ０ ５ｍｏ Ｌ， ． ｌ ｆ
Ｉ２ 实 验试 剂 ．
５０ 磷 酸盐缓 冲液 （ Ｈ值 ７４ 稀 释 ， ０ ｐ ．） 即为 Ａ ｐｍ原 液 。将原 液置于 ３ ７℃恒温箱 内孵 育 ３ ， ６ｈ进行老化处 理， 然后 ４℃贮存备用 ， 用时稀释 。ＬＮ Ｐ原液溶解稀 —Ｂ 释于 Ｄ Ｓ Ｍ Ｏ中。实验分为 ５组 ： 正常对照组 、 ｔ 干预 Ａ３
５ Ｃ 箱 中培养 ， ３～５天 加抑 制 胶 质 细 胞 分 ％ Ｏ孵 第
裂 的阿糖胞 苷 （ 终浓度 为 ５ Ｉ ｌＬ 。 ｍｏ ） ￣ ／
１１ 实验 动物 ．
３ ５０ ｇ。
实验 用 Ｗｉａ 孕 鼠 ， 质量 ３ ０— ｓｒ ｔ 体 ０ ＬＮ Ｐ， 度 ＞ ８ ， ．Ｂ 纯 ９ ％ 由石 药集 团
阿尔茨海 默病 （ Ｄ） 老 年 痴 呆 最 常见 的一 种 Ａ 是
类 型 ， 主要 的病 理变 化 是 基 底 前脑 胆碱 能神 经 元 其
１ ３ 实 验方 法 ．
１３ １ 基 底 前脑 神 经 细胞 培养 ．．
戊 巴 比妥 钠 （０ ４
的选 择性 减少 ｊ主要 特 征是 细胞 外 大 量 的 Ｂ淀 粉 ， －
组 、 ｔ４ Ａ３ ２＋ ＬＮ Ｐ ０ １ ｔｎｌＬ Ａ 】 】 － Ｂ ． ｕ ｏ 、 Ｂ４ ／ ２＋ ＬＮ Ｐ １ － Ｂ
恩必 普 药 业 公 司 惠赠 ； Ｉ啦、 聚 赖 氨 酸 、 唑 蓝 Ａ３ 多 噻
（ ｌ 、 甲基 亚 砜 （ ＭＳ 均 购 自美 国 Ｓｇ ａ公 Ｍｒ 二 Ｔ） Ｄ Ｏ） ｉ ｍ
司 ； 牛 血 清 及 Ｄ Ｍ 高 糖 培 养 基 购 自海 克 隆 公 胎 ＭＥ 司； 羊抗 大 鼠胆碱 乙酰转 移 酶 （ ｈａｔｓ） 相 应 标 Ｃ ｏｃ ｅ 及 ａ 记二 抗购 自 ＳｎａＣｕ 公 司 ； ａｐｓ一 ａｔ ｒｚ Ｃ ｓａｅ３兔抗 大 鼠多
摘要 ： 目的 护机制 。方法 观察左 旋丁基苯酞对 Ａ 原代 培养海 马及基底前 脑神经元 Ｃ ｓａｅ３表达 影响 ， Ｂ ａｐ ｓ－ 并探 讨其脑保 运用细胞原代培 养 的方 法培 养大 鼠基底 前脑及 海 马胆碱 能神 经元并 进行 鉴定 ，用 ２￣ ＵＬ的 ｍｏ
Ａ 建 立神经细胞损 伤模 型 ， Ｂ 用不 同剂量左旋 丁基苯酞处 理 ４ ， ８ｈ后 噻唑蓝 （ ｒ 法测定细胞 的存活率 ， Ｍｙ ） 免疫 印
山东 医药 ２ １ ０ １年第 ５ 卷 第 ４ １ ４期
左 旋 丁基 苯 酞 对 ｌ４ 诱 导 的原代 培养 Ａ３ ２
神 经元 Ｃ ｓａｅ３的影 响 ａｐｓ一
王瑞 霞 张 ， 镛 ， 徐 杰 付庆 喜 ， （ 天 津 医科 大学第 二 医院神 经 内科 ， 津 ３０ １ ； 东大 学附属省 立 医院 ； １ 天 ０２ １２山 ３天 津 医科 大学 附属 肿瘤 医院 ； ４山东省 临沂 市人 民 医院 ）
Ｃ ｓａｅ３的 激 活 。 ａｐｓ－
关键词 ： 旋丁基苯酞 ； 左 淀粉样蛋 白； 基底前脑 ； 马； ａｐｓ一 海 Ｃ ｓａｅ３
中 图分 类 号 ： ７ ９ １ Ｒ ４ ．６ 文 献 标 志 码 ： Ｂ 文 章 编 号 ：０ ２２ ６ （ ０ ４ ４０ ３３ １０ —６ Ｘ ２ １ ）４ ３４ ４３ １
样蛋 白（ Ｂ 沉积形成的老年斑 （Ｐ 和细胞内神经 Ａ） ｓ）
原纤 维缠 结 。Ａ３ 是 ｓ Ｉ Ｐ中最 先沉 淀并 且最难 溶 解 的淀粉 样 蛋 白。研 究 证 实 ＪＡ 的几 种 分 子 片 段 ，Ｂ 均 可在体 外诱 导离 体培 养 的细胞 中发 生凋 亡 。丁基 苯 酞 （ Ｂ ） 从我 国南 方 的一种水 芹籽 中提取 出来 Ｎ Ｐ是 的有 效 成 分 。２０ ０７年 １ ０月 ～２０ ０８年 ８月 ， 们 研 我 究 了左旋 丁基 苯酞 （ Ｂ ） 由 Ａ ： 导 的大 鼠 ＬＮ Ｐ 对 Ｂ 诱 基底 前脑 和海 马原 代 神 经元 损 伤 的保 护 作 用 ， 对 并 其机 制进 行 了探讨 。
１ 材Fra Baidu bibliotek 与方 法
血清的 Ｄ Ｅ Ｍ Ｍ培养液终止消化。低温 １ ０ ｍｎ ０ｒ ｉ ０ ／ 离心 ３ｍｎ 重复 ２次， ｉ， 吸管吹打制成单个细胞悬液，
加 到 ００ ｒｍ 多 聚赖 氨 酸包 被 的 ９ ．５ｍ， ｌ ／ ６孔 板 （ 种 接
密 度 ２×１ ／＇ｍ ） １ 板 （ ０ ￣ １ 、２孔 ／ 接种 密 度 ６×１ 个／ ０ ｍ ） 培 养皿 （ １及 接种密度 ３ ５×１。爪／ １ 中 ，７℃ 、 ． ０ ｍ） ３
ｍｇｋ ） ／ ｇ 经腹 腔麻 醉 Ｗｉａ 孕 鼠 ， 无菌 操 作下 取 出 ｓｒ ｔ 在 胎 鼠， 用显微 镊 子 分 离 出基 底 前 脑 和 海 马 ， 于 Ｄ 置 ． Ｈａｋ液 中显 微镜下 去 除脑膜 ， ｎ 然后将 脑组 织 剪成 碎 块 ，．２ ％胰 酶 ３ ０ １５ ７℃ 消 化 １ ｉ， 含 １％ 胎 牛 ５ｍｎ 用 ５
１３２ 分 组 及 药 物 处 理 ．．
Ａ 人 工 重 组 蛋 白质 ｐ
（ ． ｇ 溶 解 于 Ｄ Ｏ 中ｌ ０ １ｍ ） ＭＳ ， 配成 浓 度 为 ０ ５ｍｏ Ｌ， ． ｌ ｆ
Ｉ２ 实 验试 剂 ．
５０ 磷 酸盐缓 冲液 （ Ｈ值 ７４ 稀 释 ， ０ ｐ ．） 即为 Ａ ｐｍ原 液 。将原 液置于 ３ ７℃恒温箱 内孵 育 ３ ， ６ｈ进行老化处 理， 然后 ４℃贮存备用 ， 用时稀释 。ＬＮ Ｐ原液溶解稀 —Ｂ 释于 Ｄ Ｓ Ｍ Ｏ中。实验分为 ５组 ： 正常对照组 、 ｔ 干预 Ａ３
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裂 的阿糖胞 苷 （ 终浓度 为 ５ Ｉ ｌＬ 。 ｍｏ ） ￣ ／
１１ 实验 动物 ．
３ ５０ ｇ。
实验 用 Ｗｉａ 孕 鼠 ， 质量 ３ ０— ｓｒ ｔ 体 ０ ＬＮ Ｐ， 度 ＞ ８ ， ．Ｂ 纯 ９ ％ 由石 药集 团
阿尔茨海 默病 （ Ｄ） 老 年 痴 呆 最 常见 的一 种 Ａ 是
类 型 ， 主要 的病 理变 化 是 基 底 前脑 胆碱 能神 经 元 其
１ ３ 实 验方 法 ．
１３ １ 基 底 前脑 神 经 细胞 培养 ．．
戊 巴 比妥 钠 （０ ４
的选 择性 减少 ｊ主要 特 征是 细胞 外 大 量 的 Ｂ淀 粉 ， －
组 、 ｔ４ Ａ３ ２＋ ＬＮ Ｐ ０ １ ｔｎｌＬ Ａ 】 】 － Ｂ ． ｕ ｏ 、 Ｂ４ ／ ２＋ ＬＮ Ｐ １ － Ｂ
恩必 普 药 业 公 司 惠赠 ； Ｉ啦、 聚 赖 氨 酸 、 唑 蓝 Ａ３ 多 噻
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司 ； 牛 血 清 及 Ｄ Ｍ 高 糖 培 养 基 购 自海 克 隆 公 胎 ＭＥ 司； 羊抗 大 鼠胆碱 乙酰转 移 酶 （ ｈａｔｓ） 相 应 标 Ｃ ｏｃ ｅ 及 ａ 记二 抗购 自 ＳｎａＣｕ 公 司 ； ａｐｓ一 ａｔ ｒｚ Ｃ ｓａｅ３兔抗 大 鼠多
摘要 ： 目的 护机制 。方法 观察左 旋丁基苯酞对 Ａ 原代 培养海 马及基底前 脑神经元 Ｃ ｓａｅ３表达 影响 ， Ｂ ａｐ ｓ－ 并探 讨其脑保 运用细胞原代培 养 的方 法培 养大 鼠基底 前脑及 海 马胆碱 能神 经元并 进行 鉴定 ，用 ２￣ ＵＬ的 ｍｏ
Ａ 建 立神经细胞损 伤模 型 ， Ｂ 用不 同剂量左旋 丁基苯酞处 理 ４ ， ８ｈ后 噻唑蓝 （ ｒ 法测定细胞 的存活率 ， Ｍｙ ） 免疫 印
山东 医药 ２ １ ０ １年第 ５ 卷 第 ４ １ ４期
左 旋 丁基 苯 酞 对 ｌ４ 诱 导 的原代 培养 Ａ３ ２
神 经元 Ｃ ｓａｅ３的影 响 ａｐｓ一
王瑞 霞 张 ， 镛 ， 徐 杰 付庆 喜 ， （ 天 津 医科 大学第 二 医院神 经 内科 ， 津 ３０ １ ； 东大 学附属省 立 医院 ； １ 天 ０２ １２山 ３天 津 医科 大学 附属 肿瘤 医院 ； ４山东省 临沂 市人 民 医院 ）
Ｃ ｓａｅ３的 激 活 。 ａｐｓ－
关键词 ： 旋丁基苯酞 ； 左 淀粉样蛋 白； 基底前脑 ； 马； ａｐｓ一 海 Ｃ ｓａｅ３
中 图分 类 号 ： ７ ９ １ Ｒ ４ ．６ 文 献 标 志 码 ： Ｂ 文 章 编 号 ：０ ２２ ６ （ ０ ４ ４０ ３３ １０ —６ Ｘ ２ １ ）４ ３４ ４３ １
样蛋 白（ Ｂ 沉积形成的老年斑 （Ｐ 和细胞内神经 Ａ） ｓ）
原纤 维缠 结 。Ａ３ 是 ｓ Ｉ Ｐ中最 先沉 淀并 且最难 溶 解 的淀粉 样 蛋 白。研 究 证 实 ＪＡ 的几 种 分 子 片 段 ，Ｂ 均 可在体 外诱 导离 体培 养 的细胞 中发 生凋 亡 。丁基 苯 酞 （ Ｂ ） 从我 国南 方 的一种水 芹籽 中提取 出来 Ｎ Ｐ是 的有 效 成 分 。２０ ０７年 １ ０月 ～２０ ０８年 ８月 ， 们 研 我 究 了左旋 丁基 苯酞 （ Ｂ ） 由 Ａ ： 导 的大 鼠 ＬＮ Ｐ 对 Ｂ 诱 基底 前脑 和海 马原 代 神 经元 损 伤 的保 护 作 用 ， 对 并 其机 制进 行 了探讨 。
１ 材Fra Baidu bibliotek 与方 法
血清的 Ｄ Ｅ Ｍ Ｍ培养液终止消化。低温 １ ０ ｍｎ ０ｒ ｉ ０ ／ 离心 ３ｍｎ 重复 ２次， ｉ， 吸管吹打制成单个细胞悬液，
加 到 ００ ｒｍ 多 聚赖 氨 酸包 被 的 ９ ．５ｍ， ｌ ／ ６孔 板 （ 种 接
密 度 ２×１ ／＇ｍ ） １ 板 （ ０ ￣ １ 、２孔 ／ 接种 密 度 ６×１ 个／ ０ ｍ ） 培 养皿 （ １及 接种密度 ３ ５×１。爪／ １ 中 ，７℃ 、 ． ０ ｍ） ３
ｍｇｋ ） ／ ｇ 经腹 腔麻 醉 Ｗｉａ 孕 鼠 ， 无菌 操 作下 取 出 ｓｒ ｔ 在 胎 鼠， 用显微 镊 子 分 离 出基 底 前 脑 和 海 马 ， 于 Ｄ 置 ． Ｈａｋ液 中显 微镜下 去 除脑膜 ， ｎ 然后将 脑组 织 剪成 碎 块 ，．２ ％胰 酶 ３ ０ １５ ７℃ 消 化 １ ｉ， 含 １％ 胎 牛 ５ｍｎ 用 ５