凝血酶时间(TT)测定

凝血酶时间（TT）测定

（分析仪器法）

1实验原理：凝固法

确定量的血浆样本（100μl），加入凝血酶时间（TT）反应试剂（50μl）经过一定时间（3min）加湿后，采用波长660nm的光照射样本，凝血过程中血浆的混浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定，然后通过标准曲线求出凝血酶时间。

2标本采集

2.1早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血。

2.2

3.8％(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀。

3标本存放

1小时内(3000r/min×15min)分离血浆,室温放置不超过2小时,2～8℃保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70℃不超过6个月）,只能冻融1次，在37℃迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试。4标本运输：低温条件下运输。

5标本拒收的标准:抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固,溶血,脂血标本不能作测定。

6. 实验材料:

6.1 德国Dade Behring Marburg 公司凝血酶时间测定试剂,每瓶5ml（用配套稀

释液溶解）共50人份,未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，复溶试剂2～8℃保存不超过7天。

6.2 Dade Citrol质控血浆.用蒸馏水1ml溶解后放置30分钟,才能使用或分装。

复溶后,室温保存2小时,2～8℃4小时。

7. 仪器设备:

7.1 仪器名称: Sysmex CA-1500全自动血液凝固分析仪

7.2 仪器厂家:日本Sysmex公司

7.3 仪器型号:Sysmex CA-1500

7.4 仪器技术参数:

7.4.1 速度:最快检测速度180测试/小时,组合检测约140测试/小时

7.4.2 试剂位:36个,具冷藏功能。

7.4.3 样本位:50个,可自动连续添加。

7.5 仪器校准程序:

7.5.1 校准频率:当方法改变,试剂厂家或试剂型号改变,仪器维修影响测定结果

等情况时,必须进行校准。

7.5.2 校准操作:设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)

8. 操作步骤:

8.1 检查前准备:

8.1.1 清空废液瓶,清空反应杯抛弃槽。

8.1.2 添加足够反应杯(不能超出警告线)。

8.1.3 添加清洁液试剂,清洗用蒸馏水等。

8.2 开机

先开打印机再开主机,开机后仪器自检,约15分钟,屏幕上方“Not Ready”

变为“Ready”,表示仪器预热完成,进入系统准备工作状态,可进行测定。8.3 输入工作清单:

从主菜单选,选

输入第一个样本号→按相应实验项目名称键并同时输入此标本的其他

测试项目,若选“凝血四项（PT、APTT、Fbg、TT）”，可按

选项选择，选中项目相应位置标记为“○”，选完项目后按

删除某项目时只需按该项目（按键如

同样输入其他标本编号项目。（快速输入可用

复制同样项目的输入。

8.4 放置样本

按8.3所设好的工作清单顺序将离心分离好的样本放置于样本架上,并按顺序把样本架排列于Sampler进样器右边位置(最多同时放5架共50个样本)

8.5 按.

盖好遮光盖,确认仪器为准备状态(显示屏正上方显示“Ready”)按

键,进样开始,→测定进行,仪器显示为“Analying”(被选择项目背景变为

“◎”，此时可重复8.3,8.4,继续输入其他架样本工作清单,按

继续确认测试任务,添加样本架继续测试,→测定完成,测定项目背景变为“●”，打印机打印出测定结果，所有测定清单完成，系统恢复“Ready”状态。

8.6 每日维护:完成每日的测定后,关机前维护。

8.6.1 冲冼针Rinse Probe

8.6.2 清空废液瓶,和已使用过的反应杯。

8.6.3 将试剂架连用试剂放入冰箱。

8.7关机:先关主机,再关打印机。

9．检验结果的判断与分析:

9.1 仪器测定TT的线性范围在5-600秒,测定完成后仪器显示TT秒数，若不能

对参数进行正确计算,将出现下列信息:

﹡﹡﹡.﹡出现错误,不能得到分析数据

ˉˉˉ.ˉ不能计算参数

＋＋＋.＋数值超出线性范围.

9.2 仪器设定TT参考范围在14-20秒,如果得不到一个正常数值,在数据的左侧

将出现下列标记:

﹡出现错误信息

< 数据低于可报告的低限

> 数据高于可报告的高限

10. 质量控制:每批样本同时测定两个浓度水平(高值和正常值)的质控品,以2S

为警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。质控规则详见室内质控作业指导书。

11 临床意义：

11.1参考范围：14-20秒（不同厂家试剂有不同参考范围，请参照试剂说明书）11.2TT延长：患者血循环中AT-Ⅲ活性明显增高，肝素增多或类肝素抗凝物质

存在，如SLE、肝病肾病等，异常纤维蛋白原血症，低（无）纤维蛋白原血症，FDP增多（如DIC），异常球蛋白增多（如MM）等。

11.3TT缩短：常见于血样本有微小凝块或钙离子存在时。

12变异的潜在来源

12.1抗凝剂：草酸盐、EDTA、肝素不适用于PT检查

12.2标本采集处理不当,如血与抗凝剂未充分混匀，出现凝块，混匀时过分用力，

使标本溶血，造成结果变异。

12.3纤溶药物的影响，如双香豆素、链激酶、尿酶等。

12.4超剂量使用肝素使凝固时间延长。

12.5FDP增加使凝固时间延长。

12.6某些药物，如口服避孕药、雌激素、天门冬酰胺酶、钠络酮等影响测试结

果。

13. 操作注意事项:干粉试剂及质控血浆溶解

13.1确认溶剂类型，一般溶解液包括：蒸馏水、生理盐水、缓冲液、厂家特定

溶解液，必须按说明书要求使用。

13.2溶解时，轻轻转动容器，保证干粉完全溶解，避免剧烈振荡。

13.3复溶后，室温放置5-10分钟方可使用。

14. 仪器维护与保养

14.1日常维护（见8.6）

14.2每周维护

14.2.1液路冲洗：仪器在“Ready”状态下，从主菜单按

→按键运行此程序→完成后按

返回。

14.2.2清洁仪器：定期用擦布擦干净仪器内外，包括试剂槽。

14.3需要时维护：

14.3.1调整压力：仪器在“Ready”状态下，以主菜单按

→按键，显示压力是否在其调整范围内？若不在，则打开仪器右侧相应压力调整旋钮，旋动调整好压力，再锁紧旋钮。

14.3.2更换灯泡：关机→从仪器右侧取下灯泡外盖及内盖→换上好的灯泡→装

认关上遮光盖，按

14.3.3更换保险管：关机→从仪器左侧旋下保险盖→更换上好的保险管→装上

保险管盖。

15. 参考文献

15.1叶应妩.王毓三等《全国临床检验操作规程》第三版，东南大学出版社. 15.2 Sysmex公司《Sysmex CA-1500操作手册》1998.6修订本.