仪器分析实验实验分子荧光分析法
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A1,A2 吸收: 10-15 s VR 振动松弛： 10-12 s ic 内转化： 10-11 s isc 系间窜越：
10-6 ~ 10-2 s F 荧光： 10-9 ~ 10-6 s
P 磷光： 10-6 ~ 100 s
编写教师：郑洪副教授
化学实验教学示范中心
编写日期：2006年9月
1.2 荧光光谱
★在碱性介质中不稳定
★易发生光降解
编写教师：郑洪副教授
化学实验教学示范中心
编写日期：2006年9月
2.2 实验流程
１、试液配制 ２、VB6的荧光光谱的绘制 ３、标准工作曲线的制作 ４、未知液的配制
编写教师：郑洪副教授
化学实验教学示范中心
编写日期：2006年9月
2.3 注意事项：
☆注射液的移取与稀释 ☆系列标液的测定顺序 ☆即放即测，防光降解 ☆荧光仪的开关机顺序
编写教师：郑洪副教授
化学实验教学示范中心
编写日期：2006年9月
2.4 数据处理
1. 从荧光光谱图上读出最大激发（λex）和发射波长（ λem） 2. 用标准工作曲线法算出所配实测试液的浓度 3. 计算注射液中维生素B6的含量， 病计算测定量占
标示量 的百分数
编写教师：郑洪副教授
化学实验教学示范中心
编写日期：2006年9月
Relative Fluorescence Intensity
任何荧光化合物，都具有两种特征的光谱：激发光谱和发 射光谱。
激发光谱 发射光谱
组成、结构与衍化信息
800
Ex.
600
☆ 物质的化学结构 ☆ 环境与介质条件
400
☆ 与其它溶质的相互作用
200
☆ 反应动力学
0
250 300 350 400 450 500 550 600
I0：光源强度； φf：荧光量子产率； C：荧光体浓度）
Fluorescence Intensity
4800
4200
3600
3000
C
2400
1800
1200
600
0 550 560 570 580 590 600 610 620
Wavelength(nm)
（☆注意：在一定浓度范围内适用）
? 问题：
1.5 分子荧光分析法的应用简介
★ 常规分析应用：
☆ 定性分析：φf；λex；λem；峰形等 ☆ 定量检测： F = K﹒I0﹒φf﹒C ☆ 其它（略）
★ 高端生化研究：
☆ 分子相互作用研究； ☆代谢动力学跟踪； ☆ 显微成像（物理迁移与化学衍化的原位“显迹”）
编写教师：郑洪副教授
化学实验教学示范中心
Wavelength (nm)
编写教师：郑洪副教授
化学实验教学示范中心
编写日期：2006年9月
1）共轭结构
萘 紫外区
2）刚性的平面结构 -O
蒽 蓝区
O
-O
3）取代基
COO荧光黄会发荧光
NH2
丁省 绿区 O
COO酚酞不发荧光
编写教师：郑洪副教授
化学实验教学示范中心
编写日期：2006年9月
1.3 荧光定量 F = K﹒I0﹒φf﹒C
编写日期：2006年9月
编写教师：郑洪副教授
化学实验教学示范中心
编写日期：2006年9月
二、维生素B6注射液中维生素B6含量的 荧光法测定
2.1 实验原理
R
HO
CH2OH
H3C
N
R = CH2NH2, CH2OH, CHO.
VB6 的化学结构
★ 在近中性的水溶液中
有较强的荧光发射:
（323nm/392nm 附近）
1）影响相对荧光强度的因素有哪些？
2）试比较荧光法与紫外-可见分光光度法的分析性能。
编写教师：郑洪副教授
化学实验教学示范中心
编写日期：2006年9月
1.4 荧光仪的基本构造
？问题：荧光光度计与紫外-可见分光光度计在光路设置
上有什么不同？为什么？
编写教师：郑洪副教授
化学实验教学示范中心
编写日期：2006年9月
分子
光谱
光致发光
分子发光
荧光、磷光
其它发光形式 如：化学发光等
编写教师：郑洪副教授
化学实验教学示范中心
编写日期：2006年9月
1.1 荧光的产生
S2
2 1
Baidu Nhomakorabea
V=0
2
S1
1 V=0
VR
ic
VR
A1
A2
F
发生激发 态反应
isc
T1
2
1
V=0
P
3
S0
2 1
V=0
分子内的激发和衰变过程
激发态能量的跃迁与转 化的形式和速率：
厦门大学精品课程 仪器分析(含实验)
《仪器分析实验》
实验10 分子荧光分析法
编写教师：郑洪副教授
Molecular Fluorimetry For short: M-F
化学实验教学示范中心
编写日期：2006年9月
一、分子荧光分析法简介
原子光谱（略）
光
谱
UV-Vis（紫外-可见）
分
分子吸收
析
(对光的吸收) IR（红外）
10-6 ~ 10-2 s F 荧光： 10-9 ~ 10-6 s
P 磷光： 10-6 ~ 100 s
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1.2 荧光光谱
★在碱性介质中不稳定
★易发生光降解
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编写日期：2006年9月
2.2 实验流程
１、试液配制 ２、VB6的荧光光谱的绘制 ３、标准工作曲线的制作 ４、未知液的配制
编写教师：郑洪副教授
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编写日期：2006年9月
2.3 注意事项：
☆注射液的移取与稀释 ☆系列标液的测定顺序 ☆即放即测，防光降解 ☆荧光仪的开关机顺序
编写教师：郑洪副教授
化学实验教学示范中心
编写日期：2006年9月
2.4 数据处理
1. 从荧光光谱图上读出最大激发（λex）和发射波长（ λem） 2. 用标准工作曲线法算出所配实测试液的浓度 3. 计算注射液中维生素B6的含量， 病计算测定量占
标示量 的百分数
编写教师：郑洪副教授
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Relative Fluorescence Intensity
任何荧光化合物，都具有两种特征的光谱：激发光谱和发 射光谱。
激发光谱 发射光谱
组成、结构与衍化信息
800
Ex.
600
☆ 物质的化学结构 ☆ 环境与介质条件
400
☆ 与其它溶质的相互作用
200
☆ 反应动力学
0
250 300 350 400 450 500 550 600
I0：光源强度； φf：荧光量子产率； C：荧光体浓度）
Fluorescence Intensity
4800
4200
3600
3000
C
2400
1800
1200
600
0 550 560 570 580 590 600 610 620
Wavelength(nm)
（☆注意：在一定浓度范围内适用）
? 问题：
1.5 分子荧光分析法的应用简介
★ 常规分析应用：
☆ 定性分析：φf；λex；λem；峰形等 ☆ 定量检测： F = K﹒I0﹒φf﹒C ☆ 其它（略）
★ 高端生化研究：
☆ 分子相互作用研究； ☆代谢动力学跟踪； ☆ 显微成像（物理迁移与化学衍化的原位“显迹”）
编写教师：郑洪副教授
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Wavelength (nm)
编写教师：郑洪副教授
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编写日期：2006年9月
1）共轭结构
萘 紫外区
2）刚性的平面结构 -O
蒽 蓝区
O
-O
3）取代基
COO荧光黄会发荧光
NH2
丁省 绿区 O
COO酚酞不发荧光
编写教师：郑洪副教授
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编写日期：2006年9月
1.3 荧光定量 F = K﹒I0﹒φf﹒C
编写日期：2006年9月
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二、维生素B6注射液中维生素B6含量的 荧光法测定
2.1 实验原理
R
HO
CH2OH
H3C
N
R = CH2NH2, CH2OH, CHO.
VB6 的化学结构
★ 在近中性的水溶液中
有较强的荧光发射:
（323nm/392nm 附近）
1）影响相对荧光强度的因素有哪些？
2）试比较荧光法与紫外-可见分光光度法的分析性能。
编写教师：郑洪副教授
化学实验教学示范中心
编写日期：2006年9月
1.4 荧光仪的基本构造
？问题：荧光光度计与紫外-可见分光光度计在光路设置
上有什么不同？为什么？
编写教师：郑洪副教授
化学实验教学示范中心
编写日期：2006年9月
分子
光谱
光致发光
分子发光
荧光、磷光
其它发光形式 如：化学发光等
编写教师：郑洪副教授
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编写日期：2006年9月
1.1 荧光的产生
S2
2 1
Baidu Nhomakorabea
V=0
2
S1
1 V=0
VR
ic
VR
A1
A2
F
发生激发 态反应
isc
T1
2
1
V=0
P
3
S0
2 1
V=0
分子内的激发和衰变过程
激发态能量的跃迁与转 化的形式和速率：
厦门大学精品课程 仪器分析(含实验)
《仪器分析实验》
实验10 分子荧光分析法
编写教师：郑洪副教授
Molecular Fluorimetry For short: M-F
化学实验教学示范中心
编写日期：2006年9月
一、分子荧光分析法简介
原子光谱（略）
光
谱
UV-Vis（紫外-可见）
分
分子吸收
析
(对光的吸收) IR（红外）