DIC的造病和实验室检测
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分期：
1.高凝期：凝血酶含量升高，大量微血栓形成。 2.消耗性低凝期：凝血因子和血小板大量消耗，继发性纤
溶系统激活。
3.继发纤溶亢进期：纤溶和抗凝作用增强。
【目的要求】
1.通过DIC动物模型的复制，了解DIC的病因及发 病机制。
2.观察急性DIC各期血液凝固性的变化，并分析这 些变化的原因及其病理意义。
一般状态
表2-3-2
项目 源自文库PC PT(sec) 3P试验 Fbg量
DIC实验指标的测定记录
注射前 注射后（立即）
注射后（30/45min）
血小板计数
家兔正常值为（3～6）×105／mm3
10倍镜下 40倍镜下
凝血酶原时间测定（PT）
TF+ Ca2+ + 被检血浆，使凝血酶原变为凝血酶，再进 一步促进纤维蛋白形成。
■血小板计数：用玻璃纸，接兔血1滴，并立即取10l血放 入2.0ml血小板稀释液内充分混匀，作血小板计数。
■肝素抗凝管：放入兔血2ml，
枸橼酸钠抗凝管：放入兔血3.5ml，
迅速混匀后，离心、取上层血浆，分别另置入干净小试管， 并加上标记。
（ 肝素抗凝所制备的血浆用以测定Fbg；枸橼酸钠抗凝所制 备的血浆用以测定PT和3P试验）
10× 40×
2．凝血酶原时间（Prothrombin Time简称PT）
■取被检血浆0.lml，置于试管内，37℃水浴预温。 ■加入P试液0.2ml，并轻轻地侧动试管，至液体停止流动或出现颗粒为止， 记录PT测定值（秒）。 ■重复3次测定，取平均值作为测定结果。
3．血浆鱼精蛋白副凝试验（3P试验） 枸橼酸钠抗凝
测定值超过对照3s以上为异常。
兔正常值：6~8秒
3P试验
纤维蛋白单体FM可与纤维蛋白（原）的降 解产物X片段形成可溶性复合物SFMC，当 加入硫酸鱼精蛋白或乙醇后可使复合物中的 FM游离，重新聚集，即血浆重凝固。
意义：反映纤溶功能
■肝素抗凝管：放入兔血2ml， 枸橼酸钠抗凝管：放入兔血3.5ml， 迅速混匀后，离心、取上层血浆，分别另置入干净小试管，并加上标 记。
【附录】
1. 血小板计数（BPC）
将试管内已稀释血液滴到计数板上静置10min， 用高倍镜计数。准确数出计数板中央l大方格的血小板数，乘以2000就是 每立方毫米的血小板数。
3．静脉推注兔脑匀浆的速度快慢是实验成败的关键，故密 切注意动物的反应。
4. 兔脑匀浆和P试液用之前必须充分混匀。
4. 作3P试验，应先加血浆，再加鱼精蛋白液，否则易致假 阳性。
5. 纤维蛋白原含量检测时，一旦血浆与饱和盐水接触，应 即混匀，否则易致局部沉淀，影响测定。
【思考题】
1．静脉注入兔脑浸液后为何能复制出家兔DIC模型？ 试述其发生机制。
3.了解DIC的诊断标准，熟悉常用的实验室检查指 标及其意义。
【实验动物】
家兔，体重 1.5～2.0 kg。
【药品与器材】
1%普鲁卡因，血小板稀释液，兔脑匀浆，4%肝素。 兔手术台，显微镜，离心机，721 型分光光度计，水 浴箱、手术器械，微量加样器，动脉插血小板计数板， 注射器、肝素抗凝管、枸橼酸钠抗凝管等。
4. DIC的造病：取兔脑匀浆，以8ml／Kg体重剂量， 经耳缘静脉以1ml/min的速度匀速推注。
5. 兔脑匀浆注射完毕后，立即采集血样，
最先流出的数 滴血应弃去
30或45min后采血样一次。
■血小板计数：用玻璃纸，接兔血1滴，并立即取10l血放入2.0ml 血小板稀释液内充分混匀，作血小板计数。
【实验步骤】
1.称重、麻醉和固定家兔 称重：kg 麻醉：全麻：戊巴比妥钠 ３ml/kg 局麻：1%普鲁卡因 颈部 2ml 固定： 手术：颈前正中切口4-5cm。分离家兔一侧颈总动脉，动脉
插管，备放血用。
2.取肝素抗凝管和枸橼酸钠抗凝管各3个，分别做好标记。
3. 正常血标本各项指标的的制备
最先流出的数 滴血应弃去
■对照管：取生理盐水0.5ml，加入饱和NaCl 4.5ml， 同上操作。
■选用波长520nm，以对照管试液调零点，然后测定被检样品试液的光密 度。
测定光密度值
纤维蛋白原含量：
× 1000 ＝ mg%
0.5
【注意事项】
1．采集抗凝血需掌握好血液与抗凝剂的比例。
2．注射兔脑匀浆前，做好第二次采血的准备工作。
■取被检血浆0.5ml，置于试管内，37℃水浴3min。 ■加入硫酸鱼精蛋白液50l，混匀，37℃水浴15min。
观察有无白色纤维或凝块出现，如纤维或凝块出现为阳性；无纤维或凝 块为阴性。
4．纤维蛋白原定量（饱和氯化钠法）
肝素抗凝
■实验管：取血浆0.5ml，加入饱和NaCl 4.5ml，充分混匀，置37℃水浴 3min，取出后再次摇匀。
2．讨论急性DIC产生的原因、机制及各项结果间的关系。 3．如果先给家兔注入肝素后再注射兔脑粉浸液，能否起到预
防DIC的效果？为什么？ 4. 为什么测定纤维蛋白原用肝素抗凝，测定PT和3P用枸橼
酸钠抗凝？
【实验结果记录】
表2-3-1 注入兔脑匀浆前后动物呼吸与状态观察
注兔脑匀浆前
注兔脑匀浆后
腹式呼吸
DIC的造病和实验室检测
DIC概念
弥散性血管内凝血 (Disseminated Intravascular Coagulation
一种继发的，以广泛微血栓形成并相继出现止、 凝血功能障碍为病理特征的临床综合征。
发生机制：
1.血管内皮广泛受损，凝血、抗凝调控失调 2.大量组织因子入血，外源性凝血系统激活 3.血细胞大量破坏，血小板被激活 4.外源性促凝物质入血
1.高凝期：凝血酶含量升高，大量微血栓形成。 2.消耗性低凝期：凝血因子和血小板大量消耗，继发性纤
溶系统激活。
3.继发纤溶亢进期：纤溶和抗凝作用增强。
【目的要求】
1.通过DIC动物模型的复制，了解DIC的病因及发 病机制。
2.观察急性DIC各期血液凝固性的变化，并分析这 些变化的原因及其病理意义。
一般状态
表2-3-2
项目 源自文库PC PT(sec) 3P试验 Fbg量
DIC实验指标的测定记录
注射前 注射后（立即）
注射后（30/45min）
血小板计数
家兔正常值为（3～6）×105／mm3
10倍镜下 40倍镜下
凝血酶原时间测定（PT）
TF+ Ca2+ + 被检血浆，使凝血酶原变为凝血酶，再进 一步促进纤维蛋白形成。
■血小板计数：用玻璃纸，接兔血1滴，并立即取10l血放 入2.0ml血小板稀释液内充分混匀，作血小板计数。
■肝素抗凝管：放入兔血2ml，
枸橼酸钠抗凝管：放入兔血3.5ml，
迅速混匀后，离心、取上层血浆，分别另置入干净小试管， 并加上标记。
（ 肝素抗凝所制备的血浆用以测定Fbg；枸橼酸钠抗凝所制 备的血浆用以测定PT和3P试验）
10× 40×
2．凝血酶原时间（Prothrombin Time简称PT）
■取被检血浆0.lml，置于试管内，37℃水浴预温。 ■加入P试液0.2ml，并轻轻地侧动试管，至液体停止流动或出现颗粒为止， 记录PT测定值（秒）。 ■重复3次测定，取平均值作为测定结果。
3．血浆鱼精蛋白副凝试验（3P试验） 枸橼酸钠抗凝
测定值超过对照3s以上为异常。
兔正常值：6~8秒
3P试验
纤维蛋白单体FM可与纤维蛋白（原）的降 解产物X片段形成可溶性复合物SFMC，当 加入硫酸鱼精蛋白或乙醇后可使复合物中的 FM游离，重新聚集，即血浆重凝固。
意义：反映纤溶功能
■肝素抗凝管：放入兔血2ml， 枸橼酸钠抗凝管：放入兔血3.5ml， 迅速混匀后，离心、取上层血浆，分别另置入干净小试管，并加上标 记。
【附录】
1. 血小板计数（BPC）
将试管内已稀释血液滴到计数板上静置10min， 用高倍镜计数。准确数出计数板中央l大方格的血小板数，乘以2000就是 每立方毫米的血小板数。
3．静脉推注兔脑匀浆的速度快慢是实验成败的关键，故密 切注意动物的反应。
4. 兔脑匀浆和P试液用之前必须充分混匀。
4. 作3P试验，应先加血浆，再加鱼精蛋白液，否则易致假 阳性。
5. 纤维蛋白原含量检测时，一旦血浆与饱和盐水接触，应 即混匀，否则易致局部沉淀，影响测定。
【思考题】
1．静脉注入兔脑浸液后为何能复制出家兔DIC模型？ 试述其发生机制。
3.了解DIC的诊断标准，熟悉常用的实验室检查指 标及其意义。
【实验动物】
家兔，体重 1.5～2.0 kg。
【药品与器材】
1%普鲁卡因，血小板稀释液，兔脑匀浆，4%肝素。 兔手术台，显微镜，离心机，721 型分光光度计，水 浴箱、手术器械，微量加样器，动脉插血小板计数板， 注射器、肝素抗凝管、枸橼酸钠抗凝管等。
4. DIC的造病：取兔脑匀浆，以8ml／Kg体重剂量， 经耳缘静脉以1ml/min的速度匀速推注。
5. 兔脑匀浆注射完毕后，立即采集血样，
最先流出的数 滴血应弃去
30或45min后采血样一次。
■血小板计数：用玻璃纸，接兔血1滴，并立即取10l血放入2.0ml 血小板稀释液内充分混匀，作血小板计数。
【实验步骤】
1.称重、麻醉和固定家兔 称重：kg 麻醉：全麻：戊巴比妥钠 ３ml/kg 局麻：1%普鲁卡因 颈部 2ml 固定： 手术：颈前正中切口4-5cm。分离家兔一侧颈总动脉，动脉
插管，备放血用。
2.取肝素抗凝管和枸橼酸钠抗凝管各3个，分别做好标记。
3. 正常血标本各项指标的的制备
最先流出的数 滴血应弃去
■对照管：取生理盐水0.5ml，加入饱和NaCl 4.5ml， 同上操作。
■选用波长520nm，以对照管试液调零点，然后测定被检样品试液的光密 度。
测定光密度值
纤维蛋白原含量：
× 1000 ＝ mg%
0.5
【注意事项】
1．采集抗凝血需掌握好血液与抗凝剂的比例。
2．注射兔脑匀浆前，做好第二次采血的准备工作。
■取被检血浆0.5ml，置于试管内，37℃水浴3min。 ■加入硫酸鱼精蛋白液50l，混匀，37℃水浴15min。
观察有无白色纤维或凝块出现，如纤维或凝块出现为阳性；无纤维或凝 块为阴性。
4．纤维蛋白原定量（饱和氯化钠法）
肝素抗凝
■实验管：取血浆0.5ml，加入饱和NaCl 4.5ml，充分混匀，置37℃水浴 3min，取出后再次摇匀。
2．讨论急性DIC产生的原因、机制及各项结果间的关系。 3．如果先给家兔注入肝素后再注射兔脑粉浸液，能否起到预
防DIC的效果？为什么？ 4. 为什么测定纤维蛋白原用肝素抗凝，测定PT和3P用枸橼
酸钠抗凝？
【实验结果记录】
表2-3-1 注入兔脑匀浆前后动物呼吸与状态观察
注兔脑匀浆前
注兔脑匀浆后
腹式呼吸
DIC的造病和实验室检测
DIC概念
弥散性血管内凝血 (Disseminated Intravascular Coagulation
一种继发的，以广泛微血栓形成并相继出现止、 凝血功能障碍为病理特征的临床综合征。
发生机制：
1.血管内皮广泛受损，凝血、抗凝调控失调 2.大量组织因子入血，外源性凝血系统激活 3.血细胞大量破坏，血小板被激活 4.外源性促凝物质入血