小肽含量的测定方法

小肽含量的测定方法

1.试剂

标准蛋白溶液：准确称取0.4g牛血清白蛋白，用蒸馏水溶解定容至100mL，贮存于4℃冰箱。

双缩脲试剂：称以1.50g硫酸铜 (CuSO4·5H2O)和6.0g酒石酸钾钠

(KNaC4H4O6·4H2O)，用500mL水溶解，在搅拌下加入300mL 10% NaOH溶液，用水稀释到1L，贮存于塑料瓶中。

10%的三氯乙酸（TCA）：准确称取1.0 TCA，用蒸馏水溶解定容至10mL。

2.小肽含量的测定步骤

2.1 样品前处理

准确称取1.0g样品加入9mL水混匀，然后加入10mL 10%的TCA溶液，

震荡混匀，静置30min，最后离心，取上清液备用。

2.2 标准曲线的制作

蛋白标准溶液（mL）0 1 2 3 4 5 蒸馏水（mL） 5 4 3 2 1 0 双缩脲试剂（mL） 5 5 5 5 5 5

按表1.1所示分别添加上述试剂，混匀，避光反应30min，反应结束后于540nm波长下测定吸光度值，以蛋白浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标作标准

曲线。

2.3 样品测定

用移液枪准确移取1mL 上清液于试管中，加入4mL蒸馏水，混匀，

加入5mL双缩脲试剂，混匀，避光反应30min，反应结束后于540nm波长下测

定吸光度值将吸光度值代入标准曲线计算样品的小肽含量。