凝集试验

1.1.2 胎衣的检查：
取流产和正产的胎衣用清水洗去粪便等污物， 再剪下数个子叶，用灭菌生理盐水冲净，然后 用灭菌研磨器研碎或剪碎，接种在选择培养基 上或做生物学检查。


2 布鲁氏菌的培养基及其制备方法
2.1 土豆琼脂培养基： 蛋白胨 10克 琼脂 15克 氯化钠 5克 牛肉浸膏 5克 葡萄糖 10克 甘油 8~12克 1:2土豆浸液500毫升 蒸馏水500毫升 除葡萄糖外，将上述各成分混合熔化，用多层纱布过 滤，用20%的氢氧化钠调pH7.2,加入葡萄糖，分装， 15磅高压20分钟备用。 1:2土豆浸液的制备：新鲜土豆去外皮，切成块，称 取500克，放1000毫升蒸馏水中加热煮沸，熟了为止 （约10分钟），用纱布过滤，其液体置15磅高压20分 钟备用。
2.2 肝浸液琼培养基： 蛋白胨 10克 氯化钠 琼脂

5克 1000毫升
15克
1:4肝浸液
将上述各成分混合熔化，用多层纱布过滤，用20% 的氢氧化钠调pH7.2,分装，15磅高压20分钟备用。

1:4肝浸液的制备：取新鲜牛肝（羊和猪肝也可以） 去其脂肪和结缔组织后用清水轻轻洗，用绞肉机绞碎 称取250克，加入蒸馏水1000毫升，在冰箱中浸泡24小 时，取出加热煮沸到熟为止，用帆布或纱布脱脂棉过 滤，15磅高压20分钟备用。

1.2 防止经粘膜感染:
这里所指的粘膜感染主要是指性器官粘 膜。实践证明，布氏菌很容易经性器官 粘膜感染发病。
1.3 防止经呼吸道感染： 布氏菌可悬浮在空气中，随空气尘埃经 呼吸道进入体内。因此防止呼吸道感染 对预防布病是非常重要的。



2 个人防护措施
2.1 防护装备的作用在于保护人体，防止布鲁氏菌侵入 人体。因此，必须合理使用，妥善保管，认真消毒， 否则不但起不到保护作用，反而可成为传播因素。工 作结束后，应就地脱下保护装备，洗净消毒。 不要穿 工作服离开工作场所，更不许将其拿回家中。工作服、 帽子、口罩可采用流动蒸气、高压蒸气、煮沸以及氯 亚明、来苏、新洁尔灭溶液浸泡或紫外线照射等方法 消毒。橡胶手套、胶靴等可采用来苏尔或戊二醛溶液 浸泡。工作结束后可用肥皂、高锰酸钾、新洁尔灭、 升汞、来苏等消毒液洗手。


3.3.3.2 牛、马、鹿和骆驼1:100血清稀 释，猪、山羊、绵羊和狗用1:50血清稀 释，出现“++”以上凝集现象时，受检 血清判定为阳性。

3.3.2.3 牛、马、鹿和骆驼1:50血清稀释， 猪、山羊、绵羊和狗用1:25血清稀释，出 现“++”以上凝集现象时，受检血清判定 为可疑反应。
3.3.3 结果判定 3.3.3.1 凝集反应程度分为：


参照比浊管，按各试管上层液清亮度判读
a) ++++ 菌体完全凝集，100%下沉，上层液体 100%清亮； b) +++ 菌体几乎完全凝集，上层液体75%清亮； c) ++ 菌体凝集显著，液体50%清亮； d) + 凝集物有沉淀，液体25%清亮； e) – 凝集物无沉淀，液体均匀浑浊。

3.2.3.4 取0.5ml混合液加入第2管，用该
吸管如前述方法混合。

3.2.3.5 再吸第2管混合液0.5ml至第3管，
如此倍比稀释至第4管，从第4管弃去混
匀液0.5ml。

3.2.3.6 稀释完毕，从第1至第4管的血清 稀释度分别为1:12.5 ; 1:25 ; 1:50 和1:100。 3.2.3.7 牛、马、鹿、骆驼血清稀释法与 上述基本一致，差异是第1管加1. 2ml稀 释液和0.05ml被检血清。

注：试管凝集试验简便方法

试管凝集试验也可用较简便方式进行， 即将血清以0.08毫升、0.04毫升、0.02毫 升及0.01毫升分别加入四支小试管内，然 后每管加入1：40稀释的抗原1毫升，充 分摇匀，这样4管血清的最后稀释度分别 为1：25、1：50、1：100和1：200

3.3 判定 3.3.1 供判定参照比浊管制备方法

Байду номын сангаас


2.3 判定 2.3.1 在阴、阳性血清对照成立的条件下， 方可对被检血清进行判定。 2.3.2 受检血清在4min内出现肉眼可见的 凝集现象者判为阳性（+），无凝集现象， 呈均匀粉红色者判为（-）。

虎红平板凝集试验照片
虎红平板凝集试验照片
虎红平板凝集试验照片
虎红平板凝集试验照片

1.1 防止家畜流产物引起感染：接羔助产人员， 在接种羔助产和处理胎儿，死羔时，应做好个 人防护，除备有工作服，橡皮围裙、帽子、口 罩和胶鞋外，还应该戴乳胶手套和线手套，备 有接羔袋和消毒液，严禁赤手抓拿流产物。家 畜的流产胎儿、胎盘、胎衣或死胎等，不要随 意丢弃，以防污染环境或被狗吃掉引起布病传 播。
3 1:100 0.5
4 1:200 0.5
5 1:400 0.5
-
n
1:25 1.15
0.5
弃去0.5
0.1
0.75
弃去0.25
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5 0.5
0.5 0.5
0.5 0.5
0.5 0.5
0.5 0.5
0.5 0.5
加抗原 （1：20）
充分混匀37℃18-24小时温育
结果 判定

2.1.2 受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无 溶血和腐败气味。

2.1.3 洁净的玻璃板，其上划分成4cm的方 格。 2.1.4 吸管或分装器，适用于滴加0.03ml。


2.1.5 牙签或火柴杆，供搅拌用。

2.2 操作方法 2.2.1 将玻璃板上各格标记受检血清号，然 后加相应血清 0.03ml 。 2.2.2 在受检血清旁滴加抗原 0.03ml 。 2.2.3 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混 合。 2.2.4 每次试验应设阴、阳性血清对照。
++++
+++
++
+
-
-

3.2.3.10 每次检验均应设阳性血清、阴性 血清和抗原对照，即
a) 阴性血清对照：阴性血清的稀释和加抗原 的方法与受检血清同。


b) 阳性血清对照：阳性血清须稀释到原有滴 度，加抗原的方法与受检血清同。
c) 抗原对照： 1:20稀释抗原液0.5ml ，再加 0.5ml 稀释液，观察抗原是否有自凝现象。
法运送血清。

3.2.3 受检血清的稀释 3.2.3.1 第1管标记检验编码后加1.15ml稀 释液。 3.2.3.2 第2~4管各加入0.5ml稀释液。


3.2.3.3 然后用1ml 吸管取被检血清0.1ml； 加入第1管内，并混合均匀。混合方法是 将该试管中的混合液吸入吸管内，再沿 试管壁吹入试管中，如此吸入、吹出3~4， 充分混合后以该吸管吸混合液0.25ml弃 去。
虎红平板凝集试验照片
3

布病试管凝集试验
3.1 材料准备
3.1.1 稀释液
0.5%石炭酸生理盐水，检验羊血清时用含 有0.5% 石炭酸的10%盐溶液，如果稀释用含 0.5%石炭酸的10%盐溶液，抗原的稀释亦用含 0.5%石炭酸的10%盐溶液。

3.1.3 凝集试验管（三分管）、试管架、
检验人员：
复核人：
年
月
日
病原学技术


一、分离培养和培养基
1 分离培养 凡从可疑病畜、野生动物或者可疑物中分离 到布鲁氏菌，即可诊断为布鲁氏菌病或带菌。 目前已清楚了解，除了外界环境中有布鲁氏菌 存在外，还在60多种家畜和野生动物中分离到 了布鲁氏菌。 分离到布鲁氏菌是了解疫情、分 析疫情、判断疫情的最可靠资料。
1：40稀释 抗原液mL
管号
稀释液mL
清亮度
记录标记
1 2 3 4 5
0.00 0.25 0.50 0.75 1.00
1.00 0.75 0.50 0.25 0.00
100 75 50 25 0
++++ +++ ++ + -

3.3.2 置37 ℃~ 40℃温箱24h，取出检查并 记录结果。



3.2.3.8 将0.5ml 20倍稀释的抗原加入已 稀释好的各血清管中，并振摇均匀，羊 和猪的血清稀释则依次变为1:25 ; 1:50 ; 1:100和1:200，牛、马和骆驼的血清稀释 度则依次变为1:50 ; 1:100；1:200和1:400。 大规模检疫时也可只用2个稀释度，即牛、 马、骆驼用1:50 和1:100，猪、山羊、绵 羊和狗用1:25 和1:50 。

1、凝集反应
抗原与抗体之间具有特异性的化学亲和力， 当它们比例合适时，则构成一个大复合物，在 电解质(一般用生理盐水)的作用下,形成肉眼看 可见凝集现象，因此称为凝集反应。
2、虎红平板凝集试验 2.1 材料准备 2.1.1 抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标 单位提供，按说明书使用。

2.3 胰蛋白胨琼脂培养基：
胰蛋白胨20克
氯化钠 蒸馏水
葡萄糖
5克
10克
20克
琼脂
1000毫升
先把琼脂放在蒸馏水中加热熔化，然后将上 述其余各成分加入熔化，用纱布脱脂棉过滤， 调pH6.8 ~ 7.0，分装，13磅高压30分钟备用。

二、防止与个人防护 1 防止经皮肤感染、粘膜感染和呼吸道 感染
布鲁氏菌病检测
一、概念：
布鲁氏菌病（以下简称布病）是由 布鲁氏菌引起的人、畜共患的传染病。 在家畜中，牛、羊、猪最常发生，且可 由牛、羊、猪传染给人和其他家畜。其 特征是生殖器官和胎膜发炎，引起流产、 不育和各种组织的局部病灶。
二、检测技术 血清学检测技术 病原学检测技术

（一）血清学检测技术
布病试管凝集试验照片
布病试管凝集试验照片
布病试管凝集试验照片
布病试管凝集试验照片
布病试管凝集试验照片

可疑反应家畜经3周~4周后重检，如果 仍为可疑，该牛、羊判为阳性。猪和马 经重检仍保持可疑水平，而农场的牲畜 没有临床症状和大批阳性患畜出现，该 畜被判为阴性。

猪血清偶有非特异性反应，须结合流行 病学调查判定，必须要时应配合补体结 合试验和鉴别诊断，排除耶森氏菌交叉 凝集反应。
结果分析：共检样品多少,其中阳性多少,可疑多少,阴性多少 备 注（使用方法）:使用方法,使用试剂厂家及批号 检验人员： 复核人： 年 月 日
试管凝集反应试验原始结果记录表
稀 释 度 编号 1 2 3 1 2 3 阳性 对照 阴性 对照
1:50
1:100
1:200
1:400
4 5
# -
# -
# -
# -
0.5
0.5 0.5
0.5 0.5
0.5 0.5
0.5 0.5
0.5 0.5
0.5 0.5
充分混匀37℃18-24小时温育
结果
判定
++++
+++
++
+
-
-
布鲁氏菌病试管凝集反应试验（羊）
1 血清稀 释度
0.5% 石 炭酸 10%盐水 被 检 血 清 或 阳 阴 性 血 清对照 总 量
2 1:50 0.5
布鲁氏菌病试管凝集反应试验（牛）
1 血清稀 释度
0.5% 石 炭酸生 理盐水 被检血 清或阳 阴性血 清对照 总 量 加抗原 （1：20）
2 1:100
3 1:200
4 1:400
5 1:800
-
n
1:50
1.2
0.5
0.75
0.5
0.5
0.5
0.5
弃去 0.5
0.05
弃去 0.25
0.5
0.5
0.5


1.1 牲畜材料中的布鲁氏菌分离培养方法
1.1.1 流产胎儿培养方法:

流产胎儿取来后，先用清水把泥土等污物洗净，然 后在3%的来苏儿中浸泡半小时以上，取出在无菌条件 下进行解剖。分别取出淋巴结、肝、脾、胃内容物、 肺和骨髓等接种在普通培养基或者选择性培养基上， 置37 ℃温箱培养。一般情况下3~5天即可获得阳性结 果。2周内无阳性结果可停止培养。牲畜流产胎儿或者 死羔犊是布鲁氏菌分离培养最可靠、最有价值的细菌 学材料。在流产胎儿的细菌分离中各种器官均有较高 的分离率，尤其肺、脾和胃内容物。
吸管及温箱。

3.1.2 抗原、阳性血清和阴性血清由制标
单位提供，按说明书使用。

3.2 操作方法 3.2.1 按常规方法采血分离血清。 3.2.2 运送和保存血清样品时防止冻结和
受热，以免影响凝集价。若3d内不能送
到实验室，按每9ml血清加1ml 0.5%石炭
酸生理盐水（徐徐加入）防腐，也可用冷藏方
布鲁氏菌病检测结果记录表
检品编号： **号 检测方法： 虎红平板凝集、试管凝集 备 注: GB/T 18646-2002 检测编号 1 2 3 4 5 6 原始编号 1 2 3 4 阳性对照 阴性对照 + 检测结果 样品名称： 检测时间： 共 页第 原始编号
页 检测结果
检测编号 7 8 9 10 11 12