成人骨髓源内皮祖细胞的体外分离培养及鉴定

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细胞（Ｐｓ后，多研究陆续证实ＥＣ对创伤ＥＣ）许Ｐｓ
生起重要作用。目前关于大鼠、和犬骨髓来源Ｊ兔ＥＣ的体外分离、Ｐｓ培养及鉴定方法已有报道］，但关于成人骨髓ＥＣ体外纯化、Ｐｓ培养及鉴定的报道较少。２１５月，００年我们对成人骨髓源ＥＣ进Ｐｓ行了体外分离培养及鉴定，旨在为其临床研究和应用奠定基础。
ｂｎｒｗｃｃｌｅａｏｆｒｃｌｃｕｔｒ３ｄｙｔｒｃｌｓｒｎｎｅｌｍｏｐｏｏｙｆｒｅｙｉａｔｎ — ｆｏｅｍａｒＤｏｅｌｂｇｎｔｏｍｅｌｌｓｅｓａｓａｅｅｌｏｉｇａｄｃｌｓｆｔｒｈｌｇｏｍｄｔｐｃｓｇｏ－ｌｒｉ
ＥＧＭ－２ＭＶ．Ｔｅｃｌｇｏｔｕｖｓｒｗｎａｔｒｓｐｒｔｎａｄｐｓａｅｔｂｅｖｅｌｇｏｈｃｐｃｔ．ＦｏｃｔｍｅｒｈｅｌｒｗｈｃｒｅｗａｄａｆｅｅａａｉｎａｓｇｏｏｓｒｅｃｌｒｗａａｉｏｔｙｌｗｙｏｔｙｗｓｕｅｅｅｔｈｕｔｆａｄｃＤｃｉ．ＣｌｓｅｉｃｍｏｅｕｅＣＤ１ａｓｄｔｄｔｃｅｐｒｙｏｏｔｉｃＤｎｅｌｓｅｌｐｃｆｌｃｌｉＣＤａｄＶｃｄｅｎｅｐｅｓｎｗｅｅｎＥ－ａｈｒｘｒｓｉｒｉｏ
２％ＦＳ的ＤＥ —Ｇ于体外进行全骨髓培养，０ＢＭＭＬ传代后采用Ｃ免疫磁珠分选ｃ细胞，ＤＤ，将得到的纯化骨髓ｃ细胞加入含ＥＭＭ２的培养瓶中Ｄ。Ｇ．Ｖ培养，细胞生长至８％～０融合时ＰＳ洗涤２０９％Ｂ次，．５０２％胰酶３７℃消化１ｉ，ｎ吸管吹打至细胞完ｍ全脱壁为单细胞悬液，００ｒｍｎ１０ｉ离心５ｍｎ弃上／ｉ，清；Ｇ — ＶＥＭＭ２重悬细胞，１２ × ０／ｌ以（～）１ｍ重新接
达，电子显微镜观察分选细胞超微结构，Ｅ－和ＤｌｃＤ透射ＵＡ１ｉａ— Ｌ双染色法检测分选细胞的吞噬功能。结果分 — Ｌ选后细胞培养第３天出现集落样生长，落边缘细胞形态伸展呈梭形或多边形，集传代后呈现串珠样排列；至５培养
～
６ｄ细胞连接成大片条索状结构；Ｄｃ细胞百分率分别为２．３、３２％，表面特异性表达Ｃ、，ｃ、Ｄ４１％９．９其Ｄ成人骨髓来源的ＥＣ经体外培Ｐｓ
ｗｒ４１％ａｄ９．９ｅｅ２．３ｎ３２％ｒｓｅｔｅｙｈｅｌｐｅｅｔｄＣ３，Ｃ４ａｄＶＥ— ａｈｒ．Ｔｅｃｌｏｌｈｇｃｔｓｅｐｃｉｌ，ｔｅｃｌｒｓｎｅＤｌｖｓ３Ｄ３ｎｃｄｅｉｈｅｌｃｕｄｐａｏｙｏｅｎｓ
ｂａｓｌｅ３ｄｙｆｅａｓｇ；ｃｌｅｔｉｔｌｔｒｈｓｎｄｙ５６ａｔｒｐｓａｅｈｅｒｔｆｃＤａｄｃＤｅｄ — ｋａｓａｔｒｐｓａｅｅｌｗｎｎｏｐａｏｐａｅｏａ－ｅａｓｇ．Ｔａｅｏｎｃｌｉｓｆｍｆｅｌｓ
Ｋｅｒｓｏｅｍａｒｗ；ｅｄｔｅｉｌｒｇｎｔｒｃｌ；ｃｌｃｈｒ；ｃｌｉｅｔｃｔｎｙｗｏｄ：ｂｎｒｏｎｏｈｌｏｅｉｅｌａｐｏｓｅｌｕｕｅｅｌｄｎｉａｉｉｆｏ
自Ａａａ等发现并分离培养外周血中内皮祖ｓｒｈａ
ｄｔｃｅｙｉｅｅｔｄｂｍｍｕｏｕｒｓｅｃ．ＴａｓｓｉｎｅｅｔｎｍｉｒｓｏｅＷａｓｄｔｂｅｖｈｌａｔｃｕｅｏｏｔｄｃｌ．ｎｆｏｅｃｎｅｒｎｍｉｓｌｃｒｃｏｃｐｓｕｅｏｏｓｒｅｔｅｕｔｓｒｔｒｆｓｒｅｓｌｏｏｒｕｅＦＴａｅｅＡ一ｎｌｌｂｌｄａ — ＤＬｗｒｓｄｔａｅｅｌｎｅｅｔｃｌｐａｏｙｏｉ．ＲｅｕｔＴｅｈｍａＩＣｌｂｌｄＵＥ１ａｄＤｉａｅｅｃＬｅｅｕｅｏｌｂｌｃｌａｄｄｔｃｅｌｈｇｅｔｓｓｓｓｌｓｈｕｎ
Ｉｏａｉｎ．ｃｌｒｎｄｎｉｃｔｎｏｄｌｈｍａｏｎａｒｗｅｉｅｎｏｈｌｌｓｌｔｏｕｔｅａｄｉｅｔｉａｉｆａｕｔｕｕｆｏｎｂｅｍｒｏｄｒｄｅｄｔｅｉｖａ
ｐｏｅｉｒｃｌｉｏｒｇｎｔｅｌｉｖｔｏｓｎｒＷＥＮｕ．ＹＢｉＤＡｕ —ｈｈ，ＺＮＧＣｕｎｓｎｎ，ＮＧＲｉａｓＨＡｈａ．ｅ
Ｃ、Ｅｃｄｅｎ具有ＥＣ形态特征，ＤＶ —ａｈｆ，ｉＰｓ能吞噬ＤｌｃＬＬ并结合ＵＡ１ｉａ—Ｄ－Ｅ一。结论
疗。
养后形态、增殖率、生存能力、表面标志表达、功能等均较为稳定，可作为心血管组织工程种子细胞或用于干细胞治关键词：骨髓；内皮祖细胞；细胞培养；细胞鉴定中图分类号：３９２Ｒ２．文献标志码：Ａ文章编号：０２２６（０４－０６０１０－Ｘ２１）３００－３６１
Ｄｉａ — ＤＬａｄｃｍｂｎｉＡ一．ＣｏｃｕｉｎＥＣｓｌｔｄａｄｃｌｒｄｆｏｈｍａｏｅｍａｒｗｓｏｄｍａｙｌｃＬｎｏｉｅｗｔＵＥ１ — ｈｎｌｓｏｓＰｓｉｏａｅｎｕｔｅｒｍｕｎｂｎｒｏｈｗｅｎｕｓａｌｉｌｇｃｌｃａａｔｒｔｓｕｈａｄｌｙｒｌｅａｉｎｒｔ，ｃｌｇｏｈｃｐｃｔ，ｅｐｅｓｏｆｕｆｃｒｋｒａｄｔｂｅｂｏｏｉａｈｃｅｓｉ，ｓｃｓｍｏａｉ，ｐｏｉｒｔａｅｅｌｒｗａａｉｒｉｃｔｆｏｔｙｘｒｓｉｎｏｒｅｍａｅｎｓａｆｎｔｎ，ａｄｍａｅｕｅｓａｋｎｆｉｅｌｃｌｆｒｔｓｅｅｇｎｅｎｒｓｅｃｌｔｅａｙｕｃｉｏｎｙｂｓｄａｉｄｏａｅｌｓｕｎｉｅｒｇｏｔｍｅｌｈｒｐ．ｄｏｉｉ
ｃｌｒｄｉｉｏｕｔｅｎｖｔ．Ａｆｒｐｍａｙｃｌｅｅｐｓａｅｕｒｔｒｒｅｌｗｒａｓｇｄ，ｃｃｌｅｅｓｒｅｙｍｉｒｂａｓｉｓｒｍｅｔａｄｃｌｒｄｗｔｅｉｓＤｅｌｗｒｏｔｄｂｃｏｅｄｎｔｕｎｕｔｅｉｓｎｕｈ
一
９％融合需５～。传代细胞形态为短梭形，０６ｄ生
长潜伏期不足１，倍增时间约为２ｄ第６— 达ｄ；７ｄ
６％融合，０细胞多数分散均匀生长，呈典型串珠样排
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
胞生长培养基（Ｇ－Ｖ，ＭＭ低糖培养基ＥＭ）Ｍ２ＤＥ－（Ｇ血管内皮细胞钙依赖性黏附素（ＥｃｄｅＬ）Ｖ — ｈｒａ．
１材料与方法
愈合、肢体缺血、心肌梗死、血管移植物再血管化、随
意皮瓣存活、移植皮肤血管新生等过程中的血管再
基金项目：国家自然科学基金资助项目（０７０５。３６２４）通讯作者
６
山东医药２１年第５卷第４０１１３期１１材料Ｃ一抗及微珠，Ｄ３－ＩＣ，Ｄ — ．Ｄ３３Ｃ。ＦＴＣ３ＰＦＴ－抗，ｙ－抗，Ｄ４Ｃ３，Ｄ３，Ｅ，ＩＣ二Ｃ３二Ｃ３，Ｄ１Ｃ１内皮细３
摘要：目的探讨成人骨髓源内皮祖细胞（Ｐｓ体外分离培养的可行性。方法ＥＣ）抽取成年男性骨髓，体外全
骨髓培养，传代后采用免疫微珠分选方法收集ｃ细胞，ＧＭＶＤＥＭ— ２条件培养基诱导培养ＥＣ，Ｐｓ观察细胞形态、生长情况；采用流式细胞技术检测分选细胞纯度，免疫荧光法检测ＥＣ特殊分子标志物ＣＣ和Ｖ．ａｈｒ表ＰｓＤＤＥｃｄｅｉｎ
山东医药２１年第５卷第４０１１３期
成人骨髓源内皮祖细胞的体外分离培养及鉴定
温昱ｈ，李彬党瑞山张传森。，。
（１中国医科大学组织胚胎学教研室，沈阳１００；１１２中国医科大学附属盛京医院；０３中国人民解放军第二军医大学解剖学教研室）
（ｅａｔｅｔｆＨｓｅｒｏｇ，ＣｉａＭｅｉｌＵｉｒｔ，ｈｎａｇ１００，．．ｈｎ）１ＤｐｒｎｉｏｍｂｌｙｈｎｄｃｎｅｉＳｅｙｎ１０１ＰＲＣｉａｍｏｔｙｏａｖｓｙ
ＡｓａｔＯｂｅｆｅＴｖｓｇｔｔｅｆａｉｉｔｏｄｌｈｍｎｂｎａｏ－ｅｖｄｅｄｔｅｉｒｇｎｔｅｌｂｔｃ：ｊｃｖｏｉｅｔａｅｈｓｌｙｆｕｔｕａｏｅｍｒｗｄｒｅｎｏｌｌｏｅｉｒｃｌｒｉｎｉｅｂｉａｒｉｈａｐｏｓ（ＰｓｓｌｅｎｕｕｅｉｏＥＣ）ｉａｄａｄｃｌｒｄｉｖｒ．ＭｅｏｓＡｕｔｕａｏｅｍｒｗｗｓｘａｔ，ｔｅｅｗｏａｒｗｗｓｏｔｔｎｔｔｄｄｌｈｍｎｂｎａｒａｅｔｃｅｈｎｔｈｌｍｒａｈｏｒｄｈｅｏ
ｉ）成年男性纯化骨髓ｃ细胞。ｎ；Ｄ１２细胞扩增、化将成年男性骨髓采用含．纯
列；经过２— 代后可获得（ — ）Ｘ０个细胞，３１２１基本可达移植和细胞诱导分化要求的数量。
２２细胞生长周期．ＥＣ接种第２天细胞数量即Ｐｓ