碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌的耐药机制探讨

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摘要：目的探讨本院存在的碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的耐药机制。方法临床检出碳青霉烯类抗菌药物非敏感肠杆
菌科细菌６。改￣Ｈｏｇ实验、ＥＴ株ｄｅＤＡ协同试验检、改良三维实验检测其耐药表型；引物特异性ＰＲ法检测其碳青霉烯酶耐药Ｃ
基因及外膜蛋白基因存在情况。结果１大肠埃希菌中改￣Ｈｏｇ实验弱阳性，ＥＴ株ｄｅＤＡ协同试验阳性，改良三维实验结果可被ＣＡ单独抑制，ＰＲ扩增结果Ｉ４ＬＣＭＰ碳青霉烯酶基因阳性。５产气肠杆菌改￣Ｈｄｅ验，阴性３，阳性两株，ＥＡ协同试验株ｏｇ实株ＤＴ
培南、美罗培南、厄他培南纸片由美国默沙东制药公
司赠送。溴化乙锭（Ｂ购自Ｓｇ公司，琼脂糖购自Ｅ）ｉｍａＢＯＳ公司，Ｐｅｉ购ＡＴＫＲ生物技术公司。ＩＷＥＴｒｍｘａａａ
Ｄｒｅ（Ｌ２０）白ＴＫａａＮＡＭａｒ．００购ｋＤａＲ生物技术公司。
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ｔｅｐｅｅｃ；ｏｙｒｓｈｉｒａｔｎ（Ｃ）ｏｄｔｃｇｎｓｏｅｃｒａｅｅｓｓｎｕｅｍｂａｅｐｏｅ．ｈｒｓｎｅｐｌｍｅａｅｃａｅｃｉＰＲｔｅｔｅｅｆｈａｂｐｎｍａｅｄｏｔｒｎｏｅｔａｍｅｒｎｒｔｉｎ
合成。
１１对象．
实验菌株为２１年ｌ月至２１年１月期问，本院００００１０临床送检标本中，常规方法培养、分离、鉴定及药敏实验最低抑菌浓度法（Ｃ）ＭＩ法筛选出的碳青霉烯耐药或中介的肠杆菌科菌株，分别为：大肠埃希菌Ｅｌ０ｃ７分离白住院病人痰液，产气肠杆菌Ｅ４３ａ３、ａ２、Ｅ４４
中国抗生素杂志２１年８０２月第３卷第８７期
６３２
文章编号：１０ —６９２１）８０２ —５０１８８（０２０．６３０
碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌的耐药机制探讨
李世杰郭瑞娟邢广栋武晓敏刘大宁
（阳市人民医院检验科，濮阳４７０）濮５００
５ｉｏａｅｅｏｃｅｅｏｎｓｍｏｄｆｅｄｅｔｗｅｅｐｏｉｉｗｏｉｏａｅ，ＥＤＴｓｅｇｅｔｗａｓｌｔｓｏｆＥｎｔｒｂａｔｒａｒｇｅｅｉｄＨｏｇｅｔｓｒｓｔｖｅｏｆｔｓｌｔｓｉＡｙｎｒｙｔｓｓｎｅｔｖＩｈｅｉｒｖｅｈｅ — ｉｅｉｎｔｓ，ａｌｏｆｔｖｅｃｎｂｏｐｅｅｙｉｈｉｉｅｙｔｅＣＬＯｓ＋ｔｇａｉｅ．ｎｔｍｐｏｄｔｒｅｄｍｎｓｏｅｔｌｈｅｆａｅｃｍｌｔｌｎｂｔｄｂｈｉｈｅＣＬＡｍｉｕｒ．ｘｔｅＴｈｅｓｒｐｏｒｅｅｅａｍｂａｅｐｒｔｉｅｅｗａｏｍｐｌｅｎＰＣＲ．ｎｃｕｓｏＴｈｅｉｔｎｅｔｉｆｔｇｔｇｎｎｄｍｅｒｎｏｅｎｇｎｓｎｔａａｉｄｉｉｆＣｏｌｉｎｅｒｓｓａｃｍｅｈａｓｓｏｃｎｉｍｆＥ．ｃｉｆｏｍｈｉｅｏａｂｅｒｌｔｄｔｈｅＩＰ４ｍｅａａｂａｎｅｓ．Ａｎｄ，ｔｅｒｓｓａｏｌｒｔｓｒｇｉｎｍｙｅａｅｏｔＭｔｌｃｒｐｅｍａｅｈｅｉｔｎｔｍｅｈｎｉｍｅｏａｃｅｅｏｅｅｇｓｏｉｔｔｈｅｅｓｉｇｏＢＬｓａｃａｓｏｆＥｎｔｒｂｔｒａｒｇｎｓｍｉｈｔａｓｃａｅｗｉｔｘｉｔｎｆＥＳｈｎｄＡｍｐＣｎｙｓａｈｅｓｍｅｅｚｍｅｔｔａｔｍｅａｄｔｓｉｇｏｔｒｍｅｉｎｈｅｍｉｓｎｆｏｕｅｍｂｒｎｅｎｇａｉｅ．ａｅｔｖＫｅｒＤｒｇｒｓｓａｃ；ｅｈｎｓ；ｒｐｅｍｅｉｔｎｅ０ａｔｒａｅｅＣａｂｐｅｍａｅｙｗｏｄｓｕｅｉｔｎｅＭｃａｉｍＣａｂａｎｅｒｓｓａｔＥｎｔｒｂｃｅｉｃａ：ｒａｎｅｓｓ
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１方法＿３
作用。但近几年来，碳青霉烯类耐药问题逐渐凸显。
尤其碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌（ａｂｐｍｅｓｓｎＥｒａｅｒｅｉａｅｔＥｔｏａｔｉ，ＣＥ的出现，冲击了临床以碳青霉烯ｎｅｂｅｒｅＲ）ｒｅａ类抗菌药物作为治疗肠杆菌科细菌终极用药屏障的观念：并因肠杆菌科细菌中某些菌种可能存在的特殊分子生物学行为，曾引起世界范围内的关注［。本文旨１＿在研究本院肠杆菌科细菌中碳青霉烯类耐药菌株存在的耐药机制，制定合理有效的临床治疗方案及医院感
６４２
碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌的耐药机制探讨李世杰等
研究细菌对抗菌药物的耐药机制是解决细菌耐药性问题的重要途径。碳青霉烯类抗菌药物是一类广谱的Ｄ内酰胺类抗生素。对革兰阴性菌、革兰阳性．菌、厌氧菌，以及多重耐药或产Ｂ内酰胺酶的细菌及一持续高产Ｃ类头孢菌素酶（ＡｍｐＣ酶）株均有良好抗菌菌
ＲｅｕｔＴｅＥｃｅｉｈａｃｌｍｏｉｅｄｅｔｓｓｗｅｋｐｓｔｅＥＡｙｅｇｅｔｗａｏｉｖ，ｍｐｏｅｓｌｓｈｓｈｒｃｉｏｉｄｆｄＨｏｇｅｔｉｗａａｏｉｖ，ＤＴｓｎｒｙｔｓｓｐｓｉｅｉｒｖｄｉｔ
收稿日期：２１—３Ｏ０２０一ｌ
基金项目：濮阳市科技攻关资助项目（．１４５Ｎｏ１０３１作者简介：李世杰，男，－１６￣，学士，副主任医师，主要从事临床微生物学检验，Ｅｍａｌｊｋｓ＠ｓａｃｍ］９４ｇ＝－ｉｙｌｉ．ｏ：ｊｎ
ｔｅ — ｍｅｉｎｔｓｅｕｌｅｙＣＬＡｌｎｅｉｂｔｈｒｅｄｉｎｓｏｅｔｒｓｔｄｂａｏｎｈｉｉ．ＴｈｅＰＣＲｍｐｉｃｔｏｅｕｌｅＭＰ４ｇｅｒａｌｆａｉｎｒｓｔｄＩｉｎｅｗｅｅｐｏｓｔｖｅｉｉ．
ｗｅｅｄｔｒｉｄ．ＭｏｉｅｄｅｔｒｅｅｍｎｅｄｆｄＨｏｇｅｔｓ，ＥＤＴｓｎｅｇｅｔａｍｐｏｄｔｒｅｄｉｅｉｎｔｓｒｓｄｔｅｅｔｉＡｙｒｙｔｓｎｄｉｒｖｅｈｅ－ｍｎｓｏｅｔｗｅｅｕｅｏｄｔｃ
达缺失及其他未检测到的碳青霉药肠杆菌科细菌；碳青霉烯酶
中图分类号：Ｒ３８Ｒ４．１７，４６６文献标识码：Ａ
ＲｅｉｔｎｃｅｈａｓｆｃｒｐｅｅｒｓｓａｅｉｓｓａｅｍｃｎｉｍｏａｂａｎｍｅｉｔｎｃｎＥｎｔｒｂａｔｒａｅｅｅｏｃｅｉｃａ
Ｅ５６ａ５均分离白住院病人痰液，产气肠杆菌ａ３、Ｅ６７
Ｅ６６离白住院病人中段尿。阴性对照菌株大肠埃ａ２分希菌Ｅ６９ａ５，产气肠杆菌Ｅ１５临床分离的对Ｄ内酰ａ为６一胺类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类等临床常用抗菌药物均敏感的 “ 敏感株 ”。指示菌大肠埃希菌ＡＣ２９２ＴＣ５２
染控制工作的开展。
１对象及方法
１．耐药表型检测．１３
（）改￣Ｈｏｇ试验１ｄｅ
依据ＣＳ（０９试验方法及判定标准。ＬＩ０年）２
（）ＥＴ协同试验２ＤＡ
参考Ｌｅｅ等文献［所示试验方法及判定标准。３］（）改良三维试验试验３参考耿燕等文献［］示试验方法及判断方法。４所
１．耐药基因检测．２３
（）ＤＡ的提取１Ｎ煮沸法提取菌株，ＮＱＤＡ（１Ｃ扩增目的基因２ＰＲ根据ＧｅＢｎ数据库收录的序列，参考文献［—］ｎａｋ５６设计引物见表１，扩增碳青霉烯酶基因片段，包括ＫＣ，金属酶Ｉ、ＮＤＭ—、ＶＩＰ酶ＭＰＩＭ型碳青霉烯酶，合成特异性引物，引物序列由上海生工生物工程公司
阴性；改良三维实验中，５均可被ＣＯ＋Ｌ株ＬＣＡ混合液完全抑制，ＰＲＣ未扩增出目的基因条带和膜蛋白基因。结论本地区大肠埃希菌的耐药机制可能与Ｉ４ＭＰ型金属碳青霉烯酶存在有关，产气肠杆菌耐药机制可能与ＥＢｓＨＳＬ４Ａｍｐ酶同时存在、膜蛋白表￣Ｃ