耐碳青霉烯肺克雷伯菌和大肠埃希菌耐药机制研究
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ｃｌｉｎｉｃ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ５１０１２０，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ
霉 烯 类 抗 菌 药 物 的 菌 种 逐 渐 增 多 ，其 主 要 的 耐 药 机 制 就 是 产 生 可 水 解 碳 青 霉 烯 类 抗 菌 药 物 的 β－内 酰 胺 酶 －碳 青 霉 烯 酶 。 ［３－４］ 为进一步了解可疑产碳青霉烯酶菌株对常见抗菌药物的耐药
性和耐药原因，本研究收集了２０１１年６月至２０１２年 ６ 月 期 间
广州医学院附属第一医院临床分离的４７株可疑的产碳青霉 烯
酶的 肺 炎 克 雷 伯 菌 和 大 肠 埃 希 菌 ，对 其 进 行 耐 药 性 分 析，并 从 分子机制上对其耐药性进行研究。
１ 材 料 与 方 法 １．１ 实 验 菌 株 广 州 医 学 院 附 属 第 一 医 院 ２０１１ 年 ６ 月 至 ２０１２年６月临床分离的可疑产 碳 青 霉 烯 酶 菌 株 ４７ 株，菌 株 选 取标 准 为 厄 他 培 南 ＭＩＣ≥２μｇ／ｍＬ 或 哌 拉 西 林／他 唑 巴 坦 ＭＩＣ≥３２μｇ／ｍＬ，其中２７株肺炎克雷伯菌，２０ 株 大 肠 埃 希 菌。 标本来源包括痰２０份、中段尿１３份、导管头３份、伤口 分 泌 物 ３份、拭子３份、尿液２份、血 液 １ 份、脓 液 １ 份、腹 水 １ 份。 均 经 ＶＩＴＥＫ－２ 全自动细菌鉴定仪统一进行鉴定。质控菌株大肠
Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ５１０１２０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｓｕｓｐｉｃｉｏｕｓ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍａｓｅｓ ｉｎ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ａｎｄ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｓｏｌａｔｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｌｌ ｂａｃｔｅｒｉａ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｇｕａｎｇ－ ｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，ａｎｄ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｗａｓ ｄｏｎｅ ｂｙ ＶＩＴＥＫ－２ａｕｔｏｍａｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ ａｎｄ ｄｒｕｇ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎａｌｙｚｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｔｈｅ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍａｓｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｈｏｄｇｅ ｔｅｓｔ，ａｎｄ ｔｈｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ （ＰＣＲ）ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｔｏ ａｍｐｌｉｆｙ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ ｈｙｄｒｏｌｙｚｉｎｇ ｇｅｎｅ（ＫＰＣ），ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｇｅｎｅｓ （ＯｍｐＫ３５ａｎｄ ＯｍｐＫ３６）， ｔｒａｎｓｐｏｓｏｎ ｔｎｐＡ ａｎｄ ｔｎｐＵ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｍｏｎｇ ４７ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ｓｕｓｐｉｃｉｏｕｓ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍａｓｅｓ ｉｎ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ａｎｄ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏ－ ｌｉ，ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｒ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｒａｔｅｓ ｔｏ ｔｈｅｍ ｗｅｒｅ ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎｓ，ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎｓ ａｎｄ ｑｕｉｎｏｌｏｎｅｓ，ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ８０％ ．Ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔ－ ａｎｃｅ ｒａｔｅｓ ｆｏｒ ｉｍｉｐｅｎｅｍ，ｍｅｒｏｐｅｎｅｍ ａｎｄ ａｍｉｋａｃｉｎ ｗｅｒｅ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ ３５％ ．Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｉｍｉｐｅｎｅｍ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ，ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｒａｔｅｓ ｔｏ ｃｅｆｏｐｅｒａｚｏｎｅ／ｓｕｌｂａｃｔａｍ，ｃｅｆｍｅｔａｚｏｌｅ，ｃｅｆｏｔｅｔａｎ，ｃｅｆｅｐｉｍｅ，ｐｉｐｅｒａｃｉｌｌｉｎ／ｔａｚｏｂａｃｔａｍ，ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ，ｔｏｂｒａｍｙｃｉｎ，ｍｅｒｏｐｅｎｅｍ ａｎｄ ｅｒｔａｐｅｎｅｍ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｓｔｒａｉｎｓ（Ｐ＜０．０５）．６ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｈｏｄｇｅ ｔｅｓｔ，ｗｉｔｈ ４ ｓｔｒａｉｎｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ＫＰＣ－２ ｇｅｎｅ，ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ ｒａｔｅ ｏｆ ６６．６７％ ．Ｔｈｅ ａｂｓｅｎｃｅ ｒａｔｅｓ ｏｆ ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｇｅｎｅｓ （ＯｍｐＫ３５ａｎｄ ＯｍｐＫ３６）ｗｅｒｅ ３８．３０％ ａｎｄ ６５．９６％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｐｏｓｉｔｉｏｎ ｔｎｐＡ ａｎｄ ｔｎｐＵ ａｃｃｏｕｎｔｅｄ ｆｏｒ ４．２５％ ａｎｄ ３８．３０％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ ｏｆ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍａｓｅ ｉｓ ｎｏｔ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｒｅａｓｏｎ ｏｆ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ－ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｐｒｏｄｕｃｅｒｓ ｉｎ ｂａｃｔｅｒｉａ，ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ｍａｙ ｂｅ ｏｔｈｅｒ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｔｏ ｒｅｄｕｃｅｄ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｃａｒｂａｐｅｎｅｍａｓｅｓ； Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ； Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ； ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ｍｉｃｒｏｂｉａｌ
所分离细 菌 中 ３ 株 同 时 携 带 ＫＰＣ、ＯｍｐＫ３５、ＯｍｐＫ３６ 和 ｔｎｐＵ，占 ６．３８％；１ 株 携 带 ＫＰＣ、膜 孔 蛋 白 ＯｍｐＫ３６ 缺 失，占 ２．１３％；同时 缺 失 膜 孔 蛋 白 ＯｍｐＫ３５、ＯｍｐＫ３６ 和 携 带ｔｎｐＵ ３ 株，占６．３８％；１４株同时缺 失 ＯｍｐＫ３５、ＯｍｐＫ３６，占 ２９．７９％； １８ 株 缺 失 ＯｍｐＫ３５，占 ３８．３０％；３１ 株 缺 失 ＯｍｐＫ３６，占 ６５．９６％ ；２ 株 只 携 带ｔｎｐＡ，占 ４．２５％ ，见 表 ２。
素、妥布霉素、美罗培南、厄他培南的耐药率明显高于敏感菌株，二者差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；改良 Ｈｏｄｇｅ试 验 阳 性 ６ 株，
检 出碳青霉烯酶 ＫＰＣ 基因４株，符合率为６６．６７％，均为 ＫＰＣ－２型；膜孔蛋白 ＯｍｐＫ３５、ＯｍｐＫ３６基因缺失率分别为３８．３０％、６５．
９６％；转座子ｔｎｐＡ、ｔｎｐＵ 检出率分别为４．２５％和３８．３０％。结论 产 碳 青 霉 烯 酶 并 非 菌 株 耐 碳 青 霉 烯 类 药 物 的 主 要 原 因，尚 存
国际检验医学杂志２０１４年１月第３５卷第２期 Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｊａｎｕａｒｙ ２０１４，Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．２
·临床检验研究论著·
耐碳青霉烯肺克雷伯菌和大肠埃希菌耐药机制研究
· １６５ ·
梁 权 辉１ ，徐 韫 健２ （１．广州医科大学第一临床学院检验系０９级，广东广州 ５１０１２０；
２．广州医科大学附属第一医院检验科，广东广州 ５１０１２０）
作 者 简 介 ：梁 权 辉 ，男 ，医 学 检 验 系 学 生 ，主 要 从 事 微 生 物 学 研 究 。
· １６６ ·
国际检验医学杂志２０１４年１月第３５卷第２期 Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｊａｎｕａｒｙ ２０１４，Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．２
埃希菌 ＡＴＣＣ ２５９２２，肺炎克雷伯菌 ＡＴＣＣ ７００６０３。 １．２ 主要试剂和仪器 胰蛋白胨大豆胨肉汤、胰蛋白胨、水 解 酪蛋白胨（ＭＨ）琼脂、厄他培南试纸购自英国 Ｏｘｉｄ公 司；ＤＮＡ 标记物、ＰＣＲ 配 套 试 剂 购 自 ＴａＫａＲａ 公 司；溴 化 乙 锭 和 琼 脂 糖 购自北京鼎国公司。ＶＩＴＥＫ－２全自 动 细 菌 鉴 定 仪 购 自 法 国 梅 里埃公司，ＰＣＲ 仪购 自 德 国 Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公 司，凝 胶 成 像 分 析 系 统购自英国 Ｓｙｎｇｅｎｅ公司，电泳仪购自北京市六一仪器厂。 １．３ 药物敏感试验 采 用 ＶＩＴＥＫ－２ 全 自 动 细 菌 鉴 定 仪 对 临 床分离 的 ４７ 株 可 疑 产 碳 青 霉 烯 酶 菌 株 进 行 ２１ 种 常 用 抗 菌 药 物敏感试验。结果判断按照美国临床和实验室标准化研究所 （ＣＬＳＩ）２０１１年 标 准［５］进 行 。 １．４ 改 良 Ｈｏｄｇｅ试 验 将 大 肠 埃 希 菌 ＡＴＣＣ２５９２２ 涂 布 至 ＭＨ 平板上（０．５ 麦 氏 浊 度），将 厄 他 培 南 纸 片 贴 到 平 板 中 央， 接种待检菌的无菌接种环从药敏纸片边缘向平板边缘划待测 菌，注意不要划破平板表面。３５ ℃孵育 过 夜，观 察 厄 他 培 南 抑 菌圈内出现待测菌矢状生长者则视为 Ｈｏｄｇｅ试验阳性。 １．５ ＰＣＲ 引物 根据文献［６－７］设计引物，引物由华大基 因 公 司 合 成 （见 表 １）。
测碳青霉烯酶 ＫＰＣ 基因、外膜孔道蛋白（ＯｍｐＫ３５和 ＯｍｐＫ３６）编码基因、转座子ｔｎｐＡ、ｔｎｐＵ 基因。结果 ４７株可疑产碳 青 霉 烯
酶肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对青霉素类、头孢菌素类、喹诺酮类抗菌药物的耐药率高达 ８０％ 以 上，对 亚 胺 培 南、美 罗 培 南、丁 胺
卡那霉素耐药率为３５％以下；耐亚胺培南菌株对头孢哌 酮／舒 巴 坦、头 孢 美 唑、头 孢 替 坦、头 孢 吡 肟、哌 拉 西 林／他 唑 巴 坦、庆 大 霉
在其他耐药机制。
关键词：碳青霉烯酶； 克雷伯菌，肺炎； 大肠杆菌； 抗药性，微生物
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－４１３０．２０１４．０２．０１６
文 献 标 识 码 ：Ａ
文 章 编 号 ：１６７３－４１３０（２０１４）０２－０１６５－０４
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ａｎｄ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｌｉａｎｇ Ｑｕａｎｈｕｉ１，Ｘｕ Ｙｕｎｊｉａｎ２
摘 要：目的 分析该 院 临 床 分 离 的 可 疑 产 碳 青 霉 烯 酶 肺 炎 克 雷 伯 菌 和 大 肠 埃 希 菌 的 耐 药 性 与 耐 药 机 制。 方 法 采 用
ＶＩＴＥＫ－２全自动细菌鉴定仪检测其对２１种抗菌药物的药敏结果，采用改良 Ｈｏｄｇｅ试验进行碳青霉烯酶筛选，用聚合酶链反应检
表 １ 耐 碳 青 霉 烯 类 抗 菌 药 物 基 因 组 引 物
基因阳性产物测序后经 ＢＬＡＳＴ 比对，与已在 ＧｅｎＢａｎｋ登 录 的 ＫＰＣ－２、ＯｍｐＫ３５、ＯｍｐＫ３６、ｔｎｐＡ、ｔｎｐＵ 基 因 序 列 的 相 似 率 分 别 为９９％、９９％、９９％、９７％和９９％。ＫＰＣ 基因 ＰＣＲ 产物电泳 图 见 图 ２。
碳 青 霉 烯 类 抗 菌 药 物 是 临 床 应 用 的 重 要 广 谱 抗 菌 药 物 ，具 有抗菌谱广、抗菌作用 强 的 特 点，它 对 包 括 超 广 谱 β－内 酰 胺 酶 （ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｂｅｔａ－ｌａｃｔａｍａｓｅｓ，ＥＳＢＬｓ）和 头 孢 菌 素 酶 （ＡｍｐＣ）在内的β－内酰胺酶高度 稳 定，是 治 疗 多 重 耐 药 革 兰 阴 性 杆 菌 的 有 力 武 器 。 ［wenku.baidu.com－２］ 但 随 着 该 类 药 物 的 广 泛 使 用 ，耐 碳 青
霉 烯 类 抗 菌 药 物 的 菌 种 逐 渐 增 多 ，其 主 要 的 耐 药 机 制 就 是 产 生 可 水 解 碳 青 霉 烯 类 抗 菌 药 物 的 β－内 酰 胺 酶 －碳 青 霉 烯 酶 。 ［３－４］ 为进一步了解可疑产碳青霉烯酶菌株对常见抗菌药物的耐药
性和耐药原因，本研究收集了２０１１年６月至２０１２年 ６ 月 期 间
广州医学院附属第一医院临床分离的４７株可疑的产碳青霉 烯
酶的 肺 炎 克 雷 伯 菌 和 大 肠 埃 希 菌 ，对 其 进 行 耐 药 性 分 析，并 从 分子机制上对其耐药性进行研究。
１ 材 料 与 方 法 １．１ 实 验 菌 株 广 州 医 学 院 附 属 第 一 医 院 ２０１１ 年 ６ 月 至 ２０１２年６月临床分离的可疑产 碳 青 霉 烯 酶 菌 株 ４７ 株，菌 株 选 取标 准 为 厄 他 培 南 ＭＩＣ≥２μｇ／ｍＬ 或 哌 拉 西 林／他 唑 巴 坦 ＭＩＣ≥３２μｇ／ｍＬ，其中２７株肺炎克雷伯菌，２０ 株 大 肠 埃 希 菌。 标本来源包括痰２０份、中段尿１３份、导管头３份、伤口 分 泌 物 ３份、拭子３份、尿液２份、血 液 １ 份、脓 液 １ 份、腹 水 １ 份。 均 经 ＶＩＴＥＫ－２ 全自动细菌鉴定仪统一进行鉴定。质控菌株大肠
Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ５１０１２０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｓｕｓｐｉｃｉｏｕｓ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍａｓｅｓ ｉｎ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ａｎｄ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｓｏｌａｔｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｌｌ ｂａｃｔｅｒｉａ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｇｕａｎｇ－ ｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，ａｎｄ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｗａｓ ｄｏｎｅ ｂｙ ＶＩＴＥＫ－２ａｕｔｏｍａｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ ａｎｄ ｄｒｕｇ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎａｌｙｚｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｔｈｅ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍａｓｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｈｏｄｇｅ ｔｅｓｔ，ａｎｄ ｔｈｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ （ＰＣＲ）ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｔｏ ａｍｐｌｉｆｙ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ ｈｙｄｒｏｌｙｚｉｎｇ ｇｅｎｅ（ＫＰＣ），ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｇｅｎｅｓ （ＯｍｐＫ３５ａｎｄ ＯｍｐＫ３６）， ｔｒａｎｓｐｏｓｏｎ ｔｎｐＡ ａｎｄ ｔｎｐＵ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｍｏｎｇ ４７ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ｓｕｓｐｉｃｉｏｕｓ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍａｓｅｓ ｉｎ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ａｎｄ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏ－ ｌｉ，ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｒ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｒａｔｅｓ ｔｏ ｔｈｅｍ ｗｅｒｅ ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎｓ，ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎｓ ａｎｄ ｑｕｉｎｏｌｏｎｅｓ，ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ８０％ ．Ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔ－ ａｎｃｅ ｒａｔｅｓ ｆｏｒ ｉｍｉｐｅｎｅｍ，ｍｅｒｏｐｅｎｅｍ ａｎｄ ａｍｉｋａｃｉｎ ｗｅｒｅ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ ３５％ ．Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｉｍｉｐｅｎｅｍ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ，ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｒａｔｅｓ ｔｏ ｃｅｆｏｐｅｒａｚｏｎｅ／ｓｕｌｂａｃｔａｍ，ｃｅｆｍｅｔａｚｏｌｅ，ｃｅｆｏｔｅｔａｎ，ｃｅｆｅｐｉｍｅ，ｐｉｐｅｒａｃｉｌｌｉｎ／ｔａｚｏｂａｃｔａｍ，ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ，ｔｏｂｒａｍｙｃｉｎ，ｍｅｒｏｐｅｎｅｍ ａｎｄ ｅｒｔａｐｅｎｅｍ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｓｔｒａｉｎｓ（Ｐ＜０．０５）．６ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｈｏｄｇｅ ｔｅｓｔ，ｗｉｔｈ ４ ｓｔｒａｉｎｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ＫＰＣ－２ ｇｅｎｅ，ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ ｒａｔｅ ｏｆ ６６．６７％ ．Ｔｈｅ ａｂｓｅｎｃｅ ｒａｔｅｓ ｏｆ ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｇｅｎｅｓ （ＯｍｐＫ３５ａｎｄ ＯｍｐＫ３６）ｗｅｒｅ ３８．３０％ ａｎｄ ６５．９６％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｐｏｓｉｔｉｏｎ ｔｎｐＡ ａｎｄ ｔｎｐＵ ａｃｃｏｕｎｔｅｄ ｆｏｒ ４．２５％ ａｎｄ ３８．３０％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｅｍｅｒｇｅｎｃｅ ｏｆ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍａｓｅ ｉｓ ｎｏｔ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｒｅａｓｏｎ ｏｆ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ－ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｐｒｏｄｕｃｅｒｓ ｉｎ ｂａｃｔｅｒｉａ，ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ｍａｙ ｂｅ ｏｔｈｅｒ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｔｏ ｒｅｄｕｃｅｄ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｃａｒｂａｐｅｎｅｍａｓｅｓ； Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ； Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ； ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ｍｉｃｒｏｂｉａｌ
所分离细 菌 中 ３ 株 同 时 携 带 ＫＰＣ、ＯｍｐＫ３５、ＯｍｐＫ３６ 和 ｔｎｐＵ，占 ６．３８％；１ 株 携 带 ＫＰＣ、膜 孔 蛋 白 ＯｍｐＫ３６ 缺 失，占 ２．１３％；同时 缺 失 膜 孔 蛋 白 ＯｍｐＫ３５、ＯｍｐＫ３６ 和 携 带ｔｎｐＵ ３ 株，占６．３８％；１４株同时缺 失 ＯｍｐＫ３５、ＯｍｐＫ３６，占 ２９．７９％； １８ 株 缺 失 ＯｍｐＫ３５，占 ３８．３０％；３１ 株 缺 失 ＯｍｐＫ３６，占 ６５．９６％ ；２ 株 只 携 带ｔｎｐＡ，占 ４．２５％ ，见 表 ２。
素、妥布霉素、美罗培南、厄他培南的耐药率明显高于敏感菌株，二者差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；改良 Ｈｏｄｇｅ试 验 阳 性 ６ 株，
检 出碳青霉烯酶 ＫＰＣ 基因４株，符合率为６６．６７％，均为 ＫＰＣ－２型；膜孔蛋白 ＯｍｐＫ３５、ＯｍｐＫ３６基因缺失率分别为３８．３０％、６５．
９６％；转座子ｔｎｐＡ、ｔｎｐＵ 检出率分别为４．２５％和３８．３０％。结论 产 碳 青 霉 烯 酶 并 非 菌 株 耐 碳 青 霉 烯 类 药 物 的 主 要 原 因，尚 存
国际检验医学杂志２０１４年１月第３５卷第２期 Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｊａｎｕａｒｙ ２０１４，Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．２
·临床检验研究论著·
耐碳青霉烯肺克雷伯菌和大肠埃希菌耐药机制研究
· １６５ ·
梁 权 辉１ ，徐 韫 健２ （１．广州医科大学第一临床学院检验系０９级，广东广州 ５１０１２０；
２．广州医科大学附属第一医院检验科，广东广州 ５１０１２０）
作 者 简 介 ：梁 权 辉 ，男 ，医 学 检 验 系 学 生 ，主 要 从 事 微 生 物 学 研 究 。
· １６６ ·
国际检验医学杂志２０１４年１月第３５卷第２期 Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｊａｎｕａｒｙ ２０１４，Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．２
埃希菌 ＡＴＣＣ ２５９２２，肺炎克雷伯菌 ＡＴＣＣ ７００６０３。 １．２ 主要试剂和仪器 胰蛋白胨大豆胨肉汤、胰蛋白胨、水 解 酪蛋白胨（ＭＨ）琼脂、厄他培南试纸购自英国 Ｏｘｉｄ公 司；ＤＮＡ 标记物、ＰＣＲ 配 套 试 剂 购 自 ＴａＫａＲａ 公 司；溴 化 乙 锭 和 琼 脂 糖 购自北京鼎国公司。ＶＩＴＥＫ－２全自 动 细 菌 鉴 定 仪 购 自 法 国 梅 里埃公司，ＰＣＲ 仪购 自 德 国 Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公 司，凝 胶 成 像 分 析 系 统购自英国 Ｓｙｎｇｅｎｅ公司，电泳仪购自北京市六一仪器厂。 １．３ 药物敏感试验 采 用 ＶＩＴＥＫ－２ 全 自 动 细 菌 鉴 定 仪 对 临 床分离 的 ４７ 株 可 疑 产 碳 青 霉 烯 酶 菌 株 进 行 ２１ 种 常 用 抗 菌 药 物敏感试验。结果判断按照美国临床和实验室标准化研究所 （ＣＬＳＩ）２０１１年 标 准［５］进 行 。 １．４ 改 良 Ｈｏｄｇｅ试 验 将 大 肠 埃 希 菌 ＡＴＣＣ２５９２２ 涂 布 至 ＭＨ 平板上（０．５ 麦 氏 浊 度），将 厄 他 培 南 纸 片 贴 到 平 板 中 央， 接种待检菌的无菌接种环从药敏纸片边缘向平板边缘划待测 菌，注意不要划破平板表面。３５ ℃孵育 过 夜，观 察 厄 他 培 南 抑 菌圈内出现待测菌矢状生长者则视为 Ｈｏｄｇｅ试验阳性。 １．５ ＰＣＲ 引物 根据文献［６－７］设计引物，引物由华大基 因 公 司 合 成 （见 表 １）。
测碳青霉烯酶 ＫＰＣ 基因、外膜孔道蛋白（ＯｍｐＫ３５和 ＯｍｐＫ３６）编码基因、转座子ｔｎｐＡ、ｔｎｐＵ 基因。结果 ４７株可疑产碳 青 霉 烯
酶肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对青霉素类、头孢菌素类、喹诺酮类抗菌药物的耐药率高达 ８０％ 以 上，对 亚 胺 培 南、美 罗 培 南、丁 胺
卡那霉素耐药率为３５％以下；耐亚胺培南菌株对头孢哌 酮／舒 巴 坦、头 孢 美 唑、头 孢 替 坦、头 孢 吡 肟、哌 拉 西 林／他 唑 巴 坦、庆 大 霉
在其他耐药机制。
关键词：碳青霉烯酶； 克雷伯菌，肺炎； 大肠杆菌； 抗药性，微生物
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－４１３０．２０１４．０２．０１６
文 献 标 识 码 ：Ａ
文 章 编 号 ：１６７３－４１３０（２０１４）０２－０１６５－０４
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ａｎｄ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｌｉａｎｇ Ｑｕａｎｈｕｉ１，Ｘｕ Ｙｕｎｊｉａｎ２
摘 要：目的 分析该 院 临 床 分 离 的 可 疑 产 碳 青 霉 烯 酶 肺 炎 克 雷 伯 菌 和 大 肠 埃 希 菌 的 耐 药 性 与 耐 药 机 制。 方 法 采 用
ＶＩＴＥＫ－２全自动细菌鉴定仪检测其对２１种抗菌药物的药敏结果，采用改良 Ｈｏｄｇｅ试验进行碳青霉烯酶筛选，用聚合酶链反应检
表 １ 耐 碳 青 霉 烯 类 抗 菌 药 物 基 因 组 引 物
基因阳性产物测序后经 ＢＬＡＳＴ 比对，与已在 ＧｅｎＢａｎｋ登 录 的 ＫＰＣ－２、ＯｍｐＫ３５、ＯｍｐＫ３６、ｔｎｐＡ、ｔｎｐＵ 基 因 序 列 的 相 似 率 分 别 为９９％、９９％、９９％、９７％和９９％。ＫＰＣ 基因 ＰＣＲ 产物电泳 图 见 图 ２。
碳 青 霉 烯 类 抗 菌 药 物 是 临 床 应 用 的 重 要 广 谱 抗 菌 药 物 ，具 有抗菌谱广、抗菌作用 强 的 特 点，它 对 包 括 超 广 谱 β－内 酰 胺 酶 （ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｂｅｔａ－ｌａｃｔａｍａｓｅｓ，ＥＳＢＬｓ）和 头 孢 菌 素 酶 （ＡｍｐＣ）在内的β－内酰胺酶高度 稳 定，是 治 疗 多 重 耐 药 革 兰 阴 性 杆 菌 的 有 力 武 器 。 ［wenku.baidu.com－２］ 但 随 着 该 类 药 物 的 广 泛 使 用 ，耐 碳 青