TorusDEA色谱柱的创新应用液相色谱-串联四极杆质谱法-Waters

实验 样品制备和萃取
有机菠菜样品购自零售店。菠菜冷冻存储，取出之后在搅拌 器中匀质化。采用EURL极性农药快速提取(QuPPe)方法萃取 测试样品3。萃取方法的详细步骤如图1所示。 根据SANTE指南6评估方法性能。为了评估方法的准确度，按 0.01和0.05 mg/kg对多份测试样品进行加标(n=5)。制备浓度 范围在0.0075至0.200 mg/kg(7.5至200 ppb）的基质匹配标准 品溶液，以测定加标样品中阴离子型农药和代谢物的浓度(采 用分段校准)。
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简介
对食品或饲料生产中用作原料的农作物施用农药而导致的农药残留问题是威 胁公众健康的一大风险因素。各个国家/地区都为此建立了全面的法规体系， 针对活性成分的审批、农药的使用，以及食品中农药的最大允许残留量给出 了明确标准。残留物是通过评估活性成分确定的，可能包括相关代谢物及其 它转化产物。食品监管检测项目会检测产品是否符合农药最大残留量(MRL)或 可接受标准、评估膳食摄入量，还会检查产品是否使用了未经批准的农药。 食品行业本身也会出于责任、品牌保护或产品出厂检验等目的，对原料和成 品进行检测。有些极性农药极为常用，因此需要稳定的方法来监测它们在食 品中的残留，以确保残留量符合当地法规规定的最大允许限值要求。对于已 获批的用途，其MRL通常比较高(以大麦中的草甘膦残留为例，欧盟规定的 MRL为20 mg/kg1，美国规定的MRL为30 mg/kg2)。而对于未规定MRL的用 途，默认采用“检测限或检测限左右”作为MRL。尽管上述法规限值高于大 部分其它农药的限定值0.01 mg/kg，但在过去几年间，新规定的限值已经降至 0.3～0.1 mg/kg。为了促进贸易，一些国家/地区针对某些极性农药规定了临 时MRL或国家/地区干预限值。 尽管现在已经有不少多残留LC-MS/MS方法可用于分析食品中的农药残留， 但仍有一些农药不适合采用这些通用方法进行分析，原因是这些农药的极性 和/或离子强度太高，导致其难以成功被萃取出来，并且/或者在常用的C18色 谱柱中保留性能较差。过去，人们采用一系列具有专属选择性的单残留方法 单独分析这些化合物，分析成本极高，因此监管计划往往会将这些分析物排 除在外。QuPPe(极性农药快速提取)方法3可同时提取多种强极性农药及其代 谢物。QuPPe方法通常需要配合高灵敏度的LC-MS/MS仪器，目的是解决粗 提取物(未净化)中显著的基质效应问题。
称取匀浆样品(5 g)放入50 mL离心管中
柱温： 样品温度： 运行时间： 梯度*： 时间 (min) 0.00 4.50 6.50 16.0 %A 10 60 60 10
加入含1%甲酸的甲醇溶液(5 mL)
充分涡旋混合2 min
%B 90 40 40 90
曲线 — 2 6 1
在6000 rpm下离心5 min
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[ APPLICATION NOTE ]
尽管QuPPe方法可与多种色谱技术配合使用(包括采用离子对试剂或衍生化步骤的反相(RP)色谱、多孔石墨化碳黑(PGC)色谱、离子 色谱(IC)、亲水作用色谱(HILIC)和“混合模式”色谱)，但有研究表明这些方法都有一定局限性。目前已有报道的问题涉及以下方面 ：分析范围(需要使用多种不同的单残留分析方法)、需要专用设备(例如IC)、保留性能/选择性不理想、保留时间漂移、基质效应导 致明显的离子抑制作用，以及操作背压限制了可用流速，还使得色谱柱容易发生堵塞。 之前我们研究过上述方法检测食品中阴离子型极性农药的优缺点4,5。在本应用纪要中，我们验证了一种农药检测方法，该方法基于 QuPPE，并创新性地将Waters® Torus DEA色谱柱(部件号186007616)用作UPLC色谱柱，能够经济有效地检测菠菜中的多种极性农药 及其代谢物。
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灵敏度足以测定粗提取物中ppb水平 的残留
沃特世解决方案
Torus™ DEA 色谱柱 ACQUITY™ UPLC™ I-Class 系统 Xevo™ TQ-XS 质谱仪 MassLynx™ MS 软件 TargetLynx™ XS 应用管理软件
关键词
UPLC-MS/MS，阴离子型极性农药，草甘膦， QuPPe方法
UPLC 条件
使用前需要对LC系统和色谱柱进行清洗和活化，以去除金属 离子，因为金属离子能够与极性农药相互作用，进而导致峰 形变差。详情请参阅入门指南7。 UPLC系统： 色谱柱： 流动相A： 流动相B： 流速： 进样体积： 进样模式： 弱清洗溶剂： 强清洗溶剂： ACQUITY UPLC I-Class， 配有样品管理器 - FL(配备50 µL定量环) Torus DEA 130 Å, 1.7 µm, 2.1 mm x 100 mm 50 mM甲酸铵＋ 0.9%甲酸 乙腈 + 0.9%甲酸 0.5 mL/min 10 µL 针溢出部分环定量(PLNO) 90:10 乙腈:水 10:90 乙腈:水 50 °C 10 °C 16 min
Torus DEA色谱柱的创新应用： 液相色谱-串联四极杆质谱法分析菠菜中的阴离子型极性农药
Benjamin Wuyts1、Euan Ross2和Simon Hird2, 1 沃特世公司(比利时பைடு நூலகம்鲁塞尔) 2 沃特世公司(英国威姆斯洛)
应用优势
适用于测定菠菜中多种极性农药的高专属 性靶向分析方法，可同时满足官方质控要 求和食品生产商的检测要求，该方法具有 如下优势： 改善色谱保留时间、峰形和选择性(相 较于早期方法)。
将上清液过滤(0.25 µm PVDF滤膜，旋转过滤器)至塑料样品瓶中
*进样结束与梯度开始之间有320 µL延迟。
图1.极性农药快速提取(QuPPe)方法示意图。
Torus DEA色谱柱的创新应用：分析菠菜中的阴离子型极性农药
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[ APPLICATION NOTE ]
MS条件
MS系统： 电离模式： 毛细管电压： 离子计数阈值： 脱溶剂气温度： 脱溶剂气流速： 离子源温度： 锥孔气流速： 碰撞气流速： 喷雾器气压： Xevo TQ-XS ESI2.5 kV 40 600 °C 1000 L/h 150 °C 300 L/h 0.14 mL/min 7 Bar