抗微生物药物和敏感性试验
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给药后在体内达到的血药浓度所抑制或杀灭
中介度(intermediate):不是敏感性的度量 这一范围作 不是敏感性的度量,这一范围作 中介度
为“缓冲域”,以防止由微小的技术因素失控导致的结果偏 缓冲域” 以防止由微小的技术因素失控导致的结果偏 因而其临床意义是不确定的,故不应作临床报告 对于K— 差,因而其临床意义是不确定的 故不应作临床报告 对于 因而其临床意义是不确定的 故不应作临床报告.对于 B法测得的结果在中介度的药物 如没有其他替代品 使用前 法测得的结果在中介度的药物,如没有其他替代品 法测得的结果在中介度的药物 如没有其他替代品,使用前 应作定量(稀释法 药敏试验(MIC)以确证其敏感性 稀释法)药敏试验 应作定量 稀释法 药敏试验 以确证其敏感性
抗菌药物敏感性试验
(二) 抗菌药物纸片 二
直径6.35mm,吸水量 吸水量20ul专用药敏纸片 用逐片加样或 专用药敏纸片,用逐片加样或 直径 吸水量 专用药敏纸片 浸泡方法使每片含药量达规定所示,2℃ ℃ 浸泡方法使每片含药量达规定所示 ℃ ~8℃ 或-20℃ 无霜 ℃ 冷冻箱内保存. 内酰胺类药敏纸片应冷冻贮存 且不超过1 内酰胺类药敏纸片应冷冻贮存,且不超过 冷冻箱内保存 β-内酰胺类药敏纸片应冷冻贮存 且不超过 使用前将贮存容器移至室温1~2h,避免开启容器时产生冷 周,使用前将贮存容器移至室温 使用前将贮存容器移至室温 避免开启容器时产生冷 凝水
细菌对抗菌药物敏感试验
郭庆合
概述
加强抗菌药物敏感试验的目的
1.常规药敏试验帮助临床医师选药 常规药敏试验帮助临床医师选药 2.进行流行病学调查，了解致病菌的耐药性变迁 进行流行病学调查， 进行流行病学调查 3.评价新药的抗菌谱和抗菌活性 评价新药的抗菌谱和抗菌活性 4.用于菌种的鉴定 用于菌种的鉴定
抗菌药物敏感性试验
(七) 质量控制 七
采用标准菌株金葡菌ATCC25923,大肠埃希菌 大肠埃希菌ATCC25922 采用标准菌株金葡菌 大肠埃希菌 和铜绿假单胞菌ATCC27853等与测试菌在同一条件下做药 和铜绿假单胞菌 等与测试菌在同一条件下做药 敏试验 标准菌株的抑菌圈应落在预期范围内.如果超出范围 如果超出范围,则不应 标准菌株的抑菌圈应落在预期范围内 如果超出范围 则不应 发出报告,及时检查原因 予以纠正 发出报告 及时检查原因,予以纠正 及时检查原因 每日标准菌株的测定结果应以抑菌圈直径为纵坐标,天数为 每日标准菌株的测定结果应以抑菌圈直径为纵坐标 天数为 横坐标绘制室内质控图,要求每天抑菌圈变化数不得超过 横坐标绘制室内质控图 要求每天抑菌圈变化数不得超过 2mm 标准菌株应每周在MH琼脂上传代一次 ℃保存 琼脂上传代一次,4℃ 标准菌株应每周在 琼脂上传代一次
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临床常用抗生素
青霉素类 头孢菌素类 其他β-内酰胺类抗生素 其他 内酰胺类抗生素 氨基糖苷类 喹诺酮类 大环内酯类 四环素、 四环素、氯霉素和林可霉素类 糖肽类 磺胺类 其他合成抗菌药物
临床常用抗生素
注： 抗微生物新药不断涌现,给感染性疾病的治疗带来福 音。 抗菌药物的使用不当可促进耐药菌在病人体内和医 院环境中定殖繁衍导致交叉感染和内源性感染。 合理使用抗菌药物的前提是重视感染病原学的实验 室检查和监控抗感染治疗的药物选择.
1.培养基质量 如PH,深度 硬度 表面湿度等 商品化或自制 培养基质量,如 深度,硬度 表面湿度等.商品化或自制 培养基质量 深度 硬度,表面湿度等 商品化或自制MH 平板须标准质控菌株检测,合格后方能使用 平板须标准质控菌株检测 合格后方能使用 2.药敏纸片的质量 含药量和保存方式 药敏纸片的质量,含药量和保存方式 药敏纸片的质量 3.接种菌量正确与否 取决于麦氏比浊标准的配制 正确使用 接种菌量正确与否,取决于麦氏比浊标准的配制 接种菌量正确与否 取决于麦氏比浊标准的配制,正确使用 和保存 4.试验操作的质量 试验操作的质量 5.孵育条件 温度和时间 孵育条件,温度和时间 孵育条件 6.抑菌圈测量工具的精度 抑菌圈测量工具的精度 7.质控标准菌株本身的药敏特性是否合格 有无变异 质控标准菌株本身的药敏特性是否合格,有无变异 质控标准菌株本身的药敏特性是否合格
抗菌药物敏感性试验
(三) 培养基 三
水解酪蛋白(Mueller-Hinton MH)琼脂是生长较快的需氧和 水解酪蛋白 琼脂是生长较快的需氧和 兼性厌氧菌药敏试验标准培养基 PH7.2~7.4,琼脂厚度 琼脂厚度4mm 琼脂厚度 MH平板用塑料袋密封后 ℃ 冰箱保存 周,用前 ℃ 孵育 平板用塑料袋密封后4℃ 冰箱保存1周 用前 用前35℃ 平板用塑料袋密封后 30min,使表面干燥 使表面干燥 链球菌,肠球菌 脑膜炎奈瑟菌药敏,MH平板中加入 脱纤维 肠球菌,脑膜炎奈瑟菌药敏 平板中加入5%脱纤维 链球菌 肠球菌 脑膜炎奈瑟菌药敏 平板中加入 羊血 嗜血杆菌药敏,MH琼脂每毫升补充牛正铁血红素 琼脂每毫升补充牛正铁血红素15ug, β嗜血杆菌药敏 琼脂每毫升补充牛正铁血红素 NAD15ug,酵母提取物 酵母提取物5ug 酵母提取物 淋球菌药敏,用 琼脂并加增补剂 或用T-M培养基 琼脂并加增补剂,或用 淋球菌药敏 用GC琼脂并加增补剂 或用 培养基 MRSA和MRSE药敏 药敏,MH琼脂或肉汤中加 琼脂或肉汤中加2%~4%氯化钠 和 药敏 琼脂或肉汤中加 氯化钠
耐药(resistant):表示测试菌不能被在体内感染部位可达 耐药
到的抗菌药物浓度所抑制
表 抗菌药物
纸片法药敏试验纸片含药量和结果解释 纸片含药量 30 ug 10 ug 10单位 1ug 10 ug 100 ug 30 ug 30 ug 30 ug 30 ug 10 ug 5 ug 30 ug 2 ug 1.25/23.75 ug 耐药 ≤14 ≤12 ≤28 ≤10 ≤13 ≤17 ≤14 ≤14 ≤14 ≤15 ≤13 ≤15 ≤14 ≤10 抑菌圈直径(mm) 中介 15~16 13~14 11~12 14~16 15~17 15~17 15~17 16~21 14~15 16~20 15~20 11~15
阿米卡星 庆大霉素 青霉素 苯唑西林 氨苄西林 哌拉西林 头孢唑林 头孢呋辛 头孢他啶 氨曲南 亚胺培南 环丙沙星 万古霉素 克林霉素 复方新诺明
敏感 ≥17 ≥15 ≥29 ≥13 ≥17 ≥18 ≥18 ≥18 ≥18 ≥22 ≥16 ≥21 ≥15 ≥21 ≥16
抗菌药物敏感性试验
(六) 影响因素 六
（二）分类：1.液体稀释法 分类： 液体稀释法
2.琼脂稀释法 琼脂稀释法
抗菌药物敏感性试验
其他
1.结核杆菌的药敏试验 结核杆菌的药敏试验 2.厌氧菌的药物敏感试验 厌氧菌的药物敏感试验 3.真菌的药物敏感试验 真菌的药物敏感试验
抗菌药物敏感性试验
特殊耐药菌检测 （一）耐甲氧西林葡萄球菌检测
金葡菌： 苯唑西林抑菌圈 苯唑西林抑菌圈≦ 金葡菌：1ug苯唑西林抑菌圈≦10mm或MIC≧0.4ug/ml 或 ≧ 凝固酶阴性葡萄球菌： 苯唑西林抑菌圈≦ 凝固酶阴性葡萄球菌： 1ug苯唑西林抑菌圈≦17mm 苯唑西林抑菌圈
(五) 结果解释 五
用精确度为10mm的游标卡尺量取抑菌环直径 参 的游标卡尺量取抑菌环直径,参 用精确度为 的游标卡尺量取抑菌环直径 照标准解释结果.根椐常规剂量给药后测定药物能 照标准解释结果 根椐常规剂量给药后测定药物能 在体内达到的血药浓度将抗菌药物敏感性标准分 为以下三级 敏感(susceptible):表示测试菌能被测定药物常规剂量 敏感
抗菌药物敏感性试验
二、稀释法
（一）定义：稀释法是定量测定抗菌药物抑制细菌生长作
用的体外方法,分为肉汤稀释法和琼脂稀释法 稀释法所测得 用的体外方法 分为肉汤稀释法和琼脂稀释法.稀释法所测得 分为肉汤稀释法和琼脂稀释法 的某抗菌药物能抑制检测菌肉眼可见生长最低浓度称为最 或最小)抑菌浓度 低(或最小 抑菌浓度 或最小 抑菌浓度(minnimal inhibitory concentration,MIC)
抗菌药物敏感性试验意义
1.对敏感性不能预测的临床分离菌株进行常规药敏 对敏感性不能预测的临床分离菌株进行常规药敏 试验,帮助临床医师选择抗感染治疗药物 试验 帮助临床医师选择抗感染治疗药物 2.临床因治疗效果差而考虑更换抗菌药物时 应对拟 临床因治疗效果差而考虑更换抗菌药物时,应对拟 临床因治疗效果差而考虑更换抗菌药物时 选药物进行药敏试验 3.了解所在医院或地区常见病原菌耐药性的变迁情 了解所在医院或地区常见病原菌耐药性的变迁情 定期通报临床,有助于临床的经验治疗选药 况,定期通报临床 有助于临床的经验治疗选药 定期通报临床 4.评价新抗菌药物抗菌谱和抗菌活性 评价新抗菌药物抗菌谱和抗菌活性 5.对细菌耐药谱进行分析和分型有助于某些菌种的 对细菌耐药谱进行分析和分型有助于某些菌种的 鉴定,并作为医院感染流行病学调查的手段之一 鉴定 并作为医院感染流行病学调查的手段之一
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂 平板上,纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向 平板上 纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向 纸片周围扩散形成递减的梯度浓度,在纸片周围抑菌浓度范 纸片周围扩散形成递减的梯度浓度 在纸片周围抑菌浓度范 围内测试菌的生长被抑制,从而形成无菌生长的透明圈即为 围内测试菌的生长被抑制 从而形成无菌生长的透明圈即为 抑菌圈.抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度. 抑菌圈 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度
抗菌药物敏感性试验
(四) 操作步骤 四
1.取分纯待测菌菌落 直径 取分纯待测菌菌落(直径 个接种到3~5mlMH肉汤 取分纯待测菌菌落 直径1mm)4~5个接种到 个接种到 肉汤 链球菌,嗜血杆菌需加血肉汤并孵育过夜 中,37℃ 培养 链球菌 嗜血杆菌需加血肉汤并孵育过夜 ℃ 培养5h.链球菌 2.增菌后的对数期菌液用 增菌后的对数期菌液用3~4ml生理盐水校正浓度至 麦氏 生理盐水校正浓度至0.5麦氏 增菌后的对数期菌液用 生理盐水校正浓度至 比浊标准(相当 相当1.5× 校正后菌液15min内接种 比浊标准 相当 ×108CFU/ml),校正后菌液 校正后菌液 内接种 3.用无菌棉拭子蘸取菌液 在管内壁将多余菌液旋转挤去后在 用无菌棉拭子蘸取菌液,在管内壁将多余菌液旋转挤去后在 用无菌棉拭子蘸取菌液 琼脂表面均匀涂布接种3次 每次旋转平板 每次旋转平板60度 最后沿平板 琼脂表面均匀涂布接种 次,每次旋转平板 度,最后沿平板 内缘涂抹1周 内缘涂抹 周 4.平板置室温下 平板置室温下3~5分种后用纸片分离器或无菌镊将含药纸 平板置室温下 分种后用纸片分离器或无菌镊将含药纸 片贴于琼脂表面,各纸片中心相距应大于 各纸片中心相距应大于24mm,纸片距平板 片贴于琼脂表面 各纸片中心相距应大于 纸片距平板 内缘应大于15mm 内缘应大于 5.35℃孵育 甲氧西林和万古霉素药敏结果孵育24h ℃孵育16~18h,甲氧西林和万古霉素药敏结果孵育 甲氧西林和万古霉素药敏结果孵育
抗菌药物敏感性试验
二、药敏试验抗菌药物的选择
药敏试验选药依据:依据NCCLS标准，分 标准， 药敏试验选药依据 依据 标准
A、B、C、U四组。 、 、 、 四组 四组。
抗菌药物敏感性试验
一、 纸片琼脂扩散法
经世界卫生组织推荐,目前各国临床微生物学实 经世界卫生组织推荐 目前各国临床微生物学实 验室广泛采用的标准纸片扩散法是由Kirby和 验室广泛采用的标准纸片扩散法是由 和 Bauer所建立的纸片琼脂法 即Kirby-Bauer法(K-B 所建立的纸片琼脂法,即 所建立的纸片琼脂法 法 法纸片琼脂扩散法) 法纸片琼脂扩散法 (一) 试验原理 一
或MIC≧0.5ug/ml ≧
临床意义： MRS不论体外药敏试验结果如何 ，耐所有β-内 不论体外药敏试验结果如何 耐所有β
中介度(intermediate):不是敏感性的度量 这一范围作 不是敏感性的度量,这一范围作 中介度
为“缓冲域”,以防止由微小的技术因素失控导致的结果偏 缓冲域” 以防止由微小的技术因素失控导致的结果偏 因而其临床意义是不确定的,故不应作临床报告 对于K— 差,因而其临床意义是不确定的 故不应作临床报告 对于 因而其临床意义是不确定的 故不应作临床报告.对于 B法测得的结果在中介度的药物 如没有其他替代品 使用前 法测得的结果在中介度的药物,如没有其他替代品 法测得的结果在中介度的药物 如没有其他替代品,使用前 应作定量(稀释法 药敏试验(MIC)以确证其敏感性 稀释法)药敏试验 应作定量 稀释法 药敏试验 以确证其敏感性
抗菌药物敏感性试验
(二) 抗菌药物纸片 二
直径6.35mm,吸水量 吸水量20ul专用药敏纸片 用逐片加样或 专用药敏纸片,用逐片加样或 直径 吸水量 专用药敏纸片 浸泡方法使每片含药量达规定所示,2℃ ℃ 浸泡方法使每片含药量达规定所示 ℃ ~8℃ 或-20℃ 无霜 ℃ 冷冻箱内保存. 内酰胺类药敏纸片应冷冻贮存 且不超过1 内酰胺类药敏纸片应冷冻贮存,且不超过 冷冻箱内保存 β-内酰胺类药敏纸片应冷冻贮存 且不超过 使用前将贮存容器移至室温1~2h,避免开启容器时产生冷 周,使用前将贮存容器移至室温 使用前将贮存容器移至室温 避免开启容器时产生冷 凝水
细菌对抗菌药物敏感试验
郭庆合
概述
加强抗菌药物敏感试验的目的
1.常规药敏试验帮助临床医师选药 常规药敏试验帮助临床医师选药 2.进行流行病学调查，了解致病菌的耐药性变迁 进行流行病学调查， 进行流行病学调查 3.评价新药的抗菌谱和抗菌活性 评价新药的抗菌谱和抗菌活性 4.用于菌种的鉴定 用于菌种的鉴定
抗菌药物敏感性试验
(七) 质量控制 七
采用标准菌株金葡菌ATCC25923,大肠埃希菌 大肠埃希菌ATCC25922 采用标准菌株金葡菌 大肠埃希菌 和铜绿假单胞菌ATCC27853等与测试菌在同一条件下做药 和铜绿假单胞菌 等与测试菌在同一条件下做药 敏试验 标准菌株的抑菌圈应落在预期范围内.如果超出范围 如果超出范围,则不应 标准菌株的抑菌圈应落在预期范围内 如果超出范围 则不应 发出报告,及时检查原因 予以纠正 发出报告 及时检查原因,予以纠正 及时检查原因 每日标准菌株的测定结果应以抑菌圈直径为纵坐标,天数为 每日标准菌株的测定结果应以抑菌圈直径为纵坐标 天数为 横坐标绘制室内质控图,要求每天抑菌圈变化数不得超过 横坐标绘制室内质控图 要求每天抑菌圈变化数不得超过 2mm 标准菌株应每周在MH琼脂上传代一次 ℃保存 琼脂上传代一次,4℃ 标准菌株应每周在 琼脂上传代一次
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临床常用抗生素
青霉素类 头孢菌素类 其他β-内酰胺类抗生素 其他 内酰胺类抗生素 氨基糖苷类 喹诺酮类 大环内酯类 四环素、 四环素、氯霉素和林可霉素类 糖肽类 磺胺类 其他合成抗菌药物
临床常用抗生素
注： 抗微生物新药不断涌现,给感染性疾病的治疗带来福 音。 抗菌药物的使用不当可促进耐药菌在病人体内和医 院环境中定殖繁衍导致交叉感染和内源性感染。 合理使用抗菌药物的前提是重视感染病原学的实验 室检查和监控抗感染治疗的药物选择.
1.培养基质量 如PH,深度 硬度 表面湿度等 商品化或自制 培养基质量,如 深度,硬度 表面湿度等.商品化或自制 培养基质量 深度 硬度,表面湿度等 商品化或自制MH 平板须标准质控菌株检测,合格后方能使用 平板须标准质控菌株检测 合格后方能使用 2.药敏纸片的质量 含药量和保存方式 药敏纸片的质量,含药量和保存方式 药敏纸片的质量 3.接种菌量正确与否 取决于麦氏比浊标准的配制 正确使用 接种菌量正确与否,取决于麦氏比浊标准的配制 接种菌量正确与否 取决于麦氏比浊标准的配制,正确使用 和保存 4.试验操作的质量 试验操作的质量 5.孵育条件 温度和时间 孵育条件,温度和时间 孵育条件 6.抑菌圈测量工具的精度 抑菌圈测量工具的精度 7.质控标准菌株本身的药敏特性是否合格 有无变异 质控标准菌株本身的药敏特性是否合格,有无变异 质控标准菌株本身的药敏特性是否合格
抗菌药物敏感性试验
(三) 培养基 三
水解酪蛋白(Mueller-Hinton MH)琼脂是生长较快的需氧和 水解酪蛋白 琼脂是生长较快的需氧和 兼性厌氧菌药敏试验标准培养基 PH7.2~7.4,琼脂厚度 琼脂厚度4mm 琼脂厚度 MH平板用塑料袋密封后 ℃ 冰箱保存 周,用前 ℃ 孵育 平板用塑料袋密封后4℃ 冰箱保存1周 用前 用前35℃ 平板用塑料袋密封后 30min,使表面干燥 使表面干燥 链球菌,肠球菌 脑膜炎奈瑟菌药敏,MH平板中加入 脱纤维 肠球菌,脑膜炎奈瑟菌药敏 平板中加入5%脱纤维 链球菌 肠球菌 脑膜炎奈瑟菌药敏 平板中加入 羊血 嗜血杆菌药敏,MH琼脂每毫升补充牛正铁血红素 琼脂每毫升补充牛正铁血红素15ug, β嗜血杆菌药敏 琼脂每毫升补充牛正铁血红素 NAD15ug,酵母提取物 酵母提取物5ug 酵母提取物 淋球菌药敏,用 琼脂并加增补剂 或用T-M培养基 琼脂并加增补剂,或用 淋球菌药敏 用GC琼脂并加增补剂 或用 培养基 MRSA和MRSE药敏 药敏,MH琼脂或肉汤中加 琼脂或肉汤中加2%~4%氯化钠 和 药敏 琼脂或肉汤中加 氯化钠
耐药(resistant):表示测试菌不能被在体内感染部位可达 耐药
到的抗菌药物浓度所抑制
表 抗菌药物
纸片法药敏试验纸片含药量和结果解释 纸片含药量 30 ug 10 ug 10单位 1ug 10 ug 100 ug 30 ug 30 ug 30 ug 30 ug 10 ug 5 ug 30 ug 2 ug 1.25/23.75 ug 耐药 ≤14 ≤12 ≤28 ≤10 ≤13 ≤17 ≤14 ≤14 ≤14 ≤15 ≤13 ≤15 ≤14 ≤10 抑菌圈直径(mm) 中介 15~16 13~14 11~12 14~16 15~17 15~17 15~17 16~21 14~15 16~20 15~20 11~15
阿米卡星 庆大霉素 青霉素 苯唑西林 氨苄西林 哌拉西林 头孢唑林 头孢呋辛 头孢他啶 氨曲南 亚胺培南 环丙沙星 万古霉素 克林霉素 复方新诺明
敏感 ≥17 ≥15 ≥29 ≥13 ≥17 ≥18 ≥18 ≥18 ≥18 ≥22 ≥16 ≥21 ≥15 ≥21 ≥16
抗菌药物敏感性试验
(六) 影响因素 六
（二）分类：1.液体稀释法 分类： 液体稀释法
2.琼脂稀释法 琼脂稀释法
抗菌药物敏感性试验
其他
1.结核杆菌的药敏试验 结核杆菌的药敏试验 2.厌氧菌的药物敏感试验 厌氧菌的药物敏感试验 3.真菌的药物敏感试验 真菌的药物敏感试验
抗菌药物敏感性试验
特殊耐药菌检测 （一）耐甲氧西林葡萄球菌检测
金葡菌： 苯唑西林抑菌圈 苯唑西林抑菌圈≦ 金葡菌：1ug苯唑西林抑菌圈≦10mm或MIC≧0.4ug/ml 或 ≧ 凝固酶阴性葡萄球菌： 苯唑西林抑菌圈≦ 凝固酶阴性葡萄球菌： 1ug苯唑西林抑菌圈≦17mm 苯唑西林抑菌圈
(五) 结果解释 五
用精确度为10mm的游标卡尺量取抑菌环直径 参 的游标卡尺量取抑菌环直径,参 用精确度为 的游标卡尺量取抑菌环直径 照标准解释结果.根椐常规剂量给药后测定药物能 照标准解释结果 根椐常规剂量给药后测定药物能 在体内达到的血药浓度将抗菌药物敏感性标准分 为以下三级 敏感(susceptible):表示测试菌能被测定药物常规剂量 敏感
抗菌药物敏感性试验
二、稀释法
（一）定义：稀释法是定量测定抗菌药物抑制细菌生长作
用的体外方法,分为肉汤稀释法和琼脂稀释法 稀释法所测得 用的体外方法 分为肉汤稀释法和琼脂稀释法.稀释法所测得 分为肉汤稀释法和琼脂稀释法 的某抗菌药物能抑制检测菌肉眼可见生长最低浓度称为最 或最小)抑菌浓度 低(或最小 抑菌浓度 或最小 抑菌浓度(minnimal inhibitory concentration,MIC)
抗菌药物敏感性试验意义
1.对敏感性不能预测的临床分离菌株进行常规药敏 对敏感性不能预测的临床分离菌株进行常规药敏 试验,帮助临床医师选择抗感染治疗药物 试验 帮助临床医师选择抗感染治疗药物 2.临床因治疗效果差而考虑更换抗菌药物时 应对拟 临床因治疗效果差而考虑更换抗菌药物时,应对拟 临床因治疗效果差而考虑更换抗菌药物时 选药物进行药敏试验 3.了解所在医院或地区常见病原菌耐药性的变迁情 了解所在医院或地区常见病原菌耐药性的变迁情 定期通报临床,有助于临床的经验治疗选药 况,定期通报临床 有助于临床的经验治疗选药 定期通报临床 4.评价新抗菌药物抗菌谱和抗菌活性 评价新抗菌药物抗菌谱和抗菌活性 5.对细菌耐药谱进行分析和分型有助于某些菌种的 对细菌耐药谱进行分析和分型有助于某些菌种的 鉴定,并作为医院感染流行病学调查的手段之一 鉴定 并作为医院感染流行病学调查的手段之一
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂 平板上,纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向 平板上 纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向 纸片周围扩散形成递减的梯度浓度,在纸片周围抑菌浓度范 纸片周围扩散形成递减的梯度浓度 在纸片周围抑菌浓度范 围内测试菌的生长被抑制,从而形成无菌生长的透明圈即为 围内测试菌的生长被抑制 从而形成无菌生长的透明圈即为 抑菌圈.抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度. 抑菌圈 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度
抗菌药物敏感性试验
(四) 操作步骤 四
1.取分纯待测菌菌落 直径 取分纯待测菌菌落(直径 个接种到3~5mlMH肉汤 取分纯待测菌菌落 直径1mm)4~5个接种到 个接种到 肉汤 链球菌,嗜血杆菌需加血肉汤并孵育过夜 中,37℃ 培养 链球菌 嗜血杆菌需加血肉汤并孵育过夜 ℃ 培养5h.链球菌 2.增菌后的对数期菌液用 增菌后的对数期菌液用3~4ml生理盐水校正浓度至 麦氏 生理盐水校正浓度至0.5麦氏 增菌后的对数期菌液用 生理盐水校正浓度至 比浊标准(相当 相当1.5× 校正后菌液15min内接种 比浊标准 相当 ×108CFU/ml),校正后菌液 校正后菌液 内接种 3.用无菌棉拭子蘸取菌液 在管内壁将多余菌液旋转挤去后在 用无菌棉拭子蘸取菌液,在管内壁将多余菌液旋转挤去后在 用无菌棉拭子蘸取菌液 琼脂表面均匀涂布接种3次 每次旋转平板 每次旋转平板60度 最后沿平板 琼脂表面均匀涂布接种 次,每次旋转平板 度,最后沿平板 内缘涂抹1周 内缘涂抹 周 4.平板置室温下 平板置室温下3~5分种后用纸片分离器或无菌镊将含药纸 平板置室温下 分种后用纸片分离器或无菌镊将含药纸 片贴于琼脂表面,各纸片中心相距应大于 各纸片中心相距应大于24mm,纸片距平板 片贴于琼脂表面 各纸片中心相距应大于 纸片距平板 内缘应大于15mm 内缘应大于 5.35℃孵育 甲氧西林和万古霉素药敏结果孵育24h ℃孵育16~18h,甲氧西林和万古霉素药敏结果孵育 甲氧西林和万古霉素药敏结果孵育
抗菌药物敏感性试验
二、药敏试验抗菌药物的选择
药敏试验选药依据:依据NCCLS标准，分 标准， 药敏试验选药依据 依据 标准
A、B、C、U四组。 、 、 、 四组 四组。
抗菌药物敏感性试验
一、 纸片琼脂扩散法
经世界卫生组织推荐,目前各国临床微生物学实 经世界卫生组织推荐 目前各国临床微生物学实 验室广泛采用的标准纸片扩散法是由Kirby和 验室广泛采用的标准纸片扩散法是由 和 Bauer所建立的纸片琼脂法 即Kirby-Bauer法(K-B 所建立的纸片琼脂法,即 所建立的纸片琼脂法 法 法纸片琼脂扩散法) 法纸片琼脂扩散法 (一) 试验原理 一
或MIC≧0.5ug/ml ≧
临床意义： MRS不论体外药敏试验结果如何 ，耐所有β-内 不论体外药敏试验结果如何 耐所有β