医学检验中凝集反应的原理

梅毒初筛的实验方案
（1）ATT。其优点是：可自动化、高通量，适用于无症状人 群的筛查、献血者（包括血制品）和器官捐献者。
缺点是：在梅毒低流行地区阳性预测值低、存在大量假阳 性。
（2）ANTT。其优点是可以定量，从滴度可检测活动度。缺 点是只能检出活动性梅毒，且在早期梅毒的检出率不及 TT 法。
（3）ATT 和 ANTT 并列联合检测。即每一位待检者同步检测 TT 和 NTT。这一方案要求 NTT 必须定量检测，适宜于极
凝集反应的原理及临床应用
凝集反应 (agglutination)：
是指细菌和红细胞等颗粒性抗原或表面包被 抗原的颗粒性载体与相应抗体结合后，可出 现肉眼可见的凝集现象。
抗原抗体反应： 是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。
抗原抗体反应可分为两个阶段：
第一阶段：特异性结合阶段，数秒至数分钟，不出 现可见的反应。
梅毒治疗
• 强调早诊断，早治疗，疗程规则，剂量足够。疗后定期进 行临床和实验室随访。性伙伴要同查同治。早期梅毒经彻 底治疗可临床痊愈，消除传染性。晚期梅毒治疗可消除组 织内炎症，但已破坏的组织难以修复。
• 青霉素，如水剂青霉素、普鲁卡因青霉素、苄星青霉素等 为不同分期梅毒的首选药物。对青霉素过敏者可选四环素、 红霉素等。
• 1.传染源
梅毒是人类独有的疾病，显性和隐性梅毒患者是传染源，感 染梅毒的人的皮损及其分泌物、血液中含有梅毒螺旋体。感 染后的头2年最具传染性，而在4年后性传播的传染性大为下 降。梅毒螺旋体可通过胎盘传给胎儿，早期梅毒的孕妇传染 给胎儿的危险性很大。
• 2.传播途径
性接触是梅毒的主要传播途径，占95%以上。感染梅毒的早 期传染性最强。随着病期的延长传染性越来越小，一般认为 感染后4年以上性接触的传染性十分微弱。
患有梅毒的孕妇可通过胎盘传染给胎儿，引起胎儿宫内感染， 可导致流产、早产、死胎或分娩胎传梅毒儿。一般认为孕妇 梅毒病期越早，对胎儿感染的机会越大。孕妇即使患有无症 状的隐性梅毒还具有传染性。
早期梅毒分为一期、二期、早期潜伏梅毒；晚
期梅毒分为：三期（梅毒树胶样肿、心血管梅毒、 神经梅毒）、晚期潜伏梅毒。先天性梅毒也按时间 分为早期梅毒（出生后两年内）和晚期梅毒。
• 微量反应板中的内容物充分混合后再静置（30 秒）。
• 反应静置过程中，一定要对微量反应板加盖并禁 止振摇 至少静置2小时以上。
不加Baidu Nhomakorabea血清反应素实验（Trust）
梅毒简介
梅毒（syphilis）是一种由苍白密螺旋体感染导致的慢 性、系统性疾病。分为后天获得性梅毒和先天性梅毒。获 得性梅毒（多通过性接触传染）按感染时间分为早期梅毒 （感染时间 ≤ 1 年）和晚期梅毒（感染时间 >1 年）。
（二）反向间接凝集反应
用已知特异性抗体致敏载体以检测标本中的相应抗原。
（三）间接免疫凝集抑制反应
以已知抗原致敏的颗粒载体及相应的抗体为诊断试剂，检测 标本中是否存在和致敏抗原相同的抗原。
间接凝集反应常用的载体的颗粒：
动物或人红细胞、细菌 多种惰性颗粒如：聚苯乙烯胶乳、皂土、明胶颗粒、
活性炭、火棉胶等。
第二阶段：可见反应阶段，抗原抗体复合物在适当 的电解质、PH、温度和补体等的影响 下，进一步交联聚集，出现凝集、沉淀、 溶解和补体结合介导的生物现象等肉眼 可见的反应。 此阶段慢，数分钟至数小时。
抗原抗体反应的特点：
1、特异性 抗原、抗体特异性结合是基于抗原决定簇（表位）与抗 体超变区分子间的结构互补性与亲和性。
RPR 或者 TRUST 既可用于评价梅毒活动度也可用于 监测疗效。 在治疗起始应以 NTT 定量结果作为之后衡量疗 效的基础值，治疗之后第 1、3、6 个月定期复检，之后每 6 个月复检一次直至 NTT 转阴（或呈低水平阳性， NTT1:1-1:4）持续 1 年。NTT 高滴度患者应保持随访观察。
阳性。 3、半定量：将标本作一系列倍比稀释后进行反应，
以出现阳性反应的最高稀释度作为滴度。
凝集反应两个阶段：
1、特异性结合阶段 2、出现可见凝集反应阶段
凝集反应的分类
一、直接凝集反应：
细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参 与下直接与相应抗体结合出现肉眼可见的凝集现象，称为
直接凝集反应。
二、间接凝集反应：
非梅毒螺旋体实验（Non-treponemal Tests，NTT）
一期梅毒出现硬下疳后 10-15 天 NTT 可呈阳性（感染 后约 6 周左右），未经治疗的梅毒患者，NTT 滴度在感染 后 1-2 年达到高峰，之后降低，直至晚期梅毒呈低水平阳 性。
NTT 滴度总体上与疾病活动度有关，因此在 NTT 应 定量报告。
2、可逆性 抗原与抗体的结合是分子表面的非共价键结合，故形成 的复合物不稳定，在一定的条件下可以解离为游离抗原 与抗体。
3、比例性
比例性：是指抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比
关系。
钩状效应：指由于抗原、抗体比例不合适而导致假阴性
的现象。
等价带：抗原抗体比例合适，结合充分，沉淀物形成快
而多。
前带：抗体过剩时称为前带。 后带：抗原过剩时称为后带。
将可溶性抗原（或抗体）预先吸附或偶联于与免疫无关、 大小适当的颗粒性载体表面，使之成为抗原（或抗体）致敏 颗粒，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质存在 的条件下，出现肉眼可见的特异性凝集现象，称为间接凝集 反应或被动免疫凝集反应。
间接凝集试验的类型：
（一）正向间接凝集反应 用已知抗原致敏载体以检测标本中的相应抗体。
梅毒血清学检测假阳性
假阳性 TT 偶尔见于自身免疫疾病、孕妇 。
假阳性 NTT 的发生率约 0.2-0.8%（也有研究显示更高）， 分为急性 BFP-NTT（持续时间 6 个月）。急性 BFP-NTT 可见于新近免疫接种后，新近发生心肌梗塞，疟疾、肝炎、 水痘、麻疹等发热性感染疾病以及孕妇。慢性 BFP-NTT 可 见于注射型吸毒，自身免疫疾病、HIV 感染、麻风病、恶性 肿瘤、慢性肝病、以及老年人群。绝大部分 BFP-NTT 的滴 度都小于 ≤ 1:4。
梅毒螺旋体抗体检测（TPPA）：明胶颗粒 不加热血清反应素试验（Trust）：甲苯胺红颗粒 血浆反应素试验（RPR）：活性炭颗粒
结果判定：
定性
发生肉眼可见的凝集现象
半定量
影响因素及注意事项：
• 致敏粒子以及未致敏粒子在使用之前30分钟于室 温（15~30℃）下进行调制，且均应混合均匀后 再使用。
4、阶段性
影响抗原抗体反应的因素：
1、抗原抗体反应物的自身因素：
性质、活性及浓度等直接影响结合反应
2、环境因素：
① 电解质：eg：0.85%NaCl ②酸碱度：PH6~8 ③温度：常用温度37℃和室温（18~25℃） ④振荡、搅拌：加强抗原抗体分子结合，加速反应
凝集反应的特点：
1、灵敏度高、方法简便。 2、定性：根据凝集现象出现与否判断结果阴性或
梅毒的实验室诊断（Laboratory）
梅毒螺旋体实验（Treponemal Tests，TT） ，TT 大多
采用重组抗原检测血清中存在的螺旋体特异性抗体（IgG 和 IgM 混合抗体）。 梅毒螺旋体感染（主要是性接触感染）后至硬下疳出现之 间的时间为梅毒潜伏期，约 10-90 天。 梅毒感染者硬下疳出现后 7-14 天 TT 可呈阳性。 TT 滴度对现症梅毒的诊断和治疗没有意义，也不能用于梅 毒活动度的检测和疗效评价。 大多数梅毒感染者，TT 呈终身阳性。
简答题
1、凝集反应的定义？ 2、什么是钩状效应？什么是前带现象？ 3、凝集反应的两个阶段？ 4、什么是正向间接凝集反应？临床实验室应用？ 5、梅毒治愈后TPPA与Trust实验结果应分别为何种反应性？
早期梅毒可疑病例的筛查。
梅毒血清学检测假阴性
已治愈的梅毒患者一定是 TT 阳性 /NTT 阴性。NTT 阴 性仍然是目前评价梅毒治愈的最好指标。但是晚期梅毒患者 经过标准化治疗后仍可能呈 NTT 阳性。 梅毒患者出现 TT 假阴性极其罕见，如果出现，应考虑实验操作出现问题。 在极早期梅毒也可见由于前带现象造成的 NTT 假阴性。因 此在初筛实验中 NTT 检测应同步进行原倍血清和稀释血清 的检测以防止前带现象。